陸浩　姚康　黃東　李晨光　常書?！〈饔钕琛O愛軍　鄒云增　錢菊英　葛均波

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院心內(nèi)科，上?！?00032)

?

·論著·

ST段抬高型急性心肌梗死患者外周血中樹突狀細(xì)胞及其亞型的變化

陸浩姚康黃東李晨光常書福戴宇翔孫愛軍鄒云增錢菊英葛均波

(復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院心內(nèi)科，上海200032)

摘要目的：探討ST段抬高型急型心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)患者外周血中樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)及其亞型的變化。方法： 選擇17例ST段抬高型AMI患者(AMI組)和14例穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)患者(SAP組)為研究對(duì)象，并以15例性別、年齡相匹配的冠狀動(dòng)脈造影陰性者為對(duì)照組。采用流式細(xì)胞技術(shù)三色分析法測(cè)定3組人群外周血中DCs及其亞型占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比和絕對(duì)數(shù)，其中DCs以Lin1-HLA-DR+確定，髓樣樹突細(xì)胞(myeloid dendritic cell，mDC)以Lin1-HLA-DR+CD11c+確定，漿細(xì)胞樣樹突狀細(xì)胞(plasmacytoid dendritic cell，pDC)以Lin1-HLA-DR+CD123+確定；并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法檢測(cè)3組人群外周血中白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平。其中ST段抬高型AMI患者在AMI發(fā)作7 d后進(jìn)行隨訪。結(jié)果：AMI組患者急性期(<24 h)DCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、DCs的絕對(duì)數(shù)、mDC和pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、mDC和pDC的絕對(duì)數(shù)、mDC與pDC比值均低于SAP組和對(duì)照組(P<0.01、0.05)。發(fā)作7 d后復(fù)查，AMI組DCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、DCs的絕對(duì)數(shù)、mDC和pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、mDC和pDC的絕對(duì)數(shù)、mDC與pDC比值均高于急性期(P<0.01、0.05)。SAP組與對(duì)照組外周血中DCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、DCs的絕對(duì)數(shù)、mDC和pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、mDC和pDC的絕對(duì)數(shù)、mDC與pDC比值差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。AMI患者急性期血清TNF-α及IL-6水平高于對(duì)照組和SAP組(P<0.05)，發(fā)作7 d后IL-6水平明顯降低(P<0.05)。結(jié)論：AMI時(shí)外周血中的DCs包括mDC及pDC在急性期均明顯降低，發(fā)作7 d后恢復(fù)至正常水平，提示外周血中DCs在AMI急性期可能參與了不穩(wěn)定斑塊的形成。

關(guān)鍵詞樹突狀細(xì)胞；動(dòng)脈粥樣硬化；免疫反應(yīng)；ST段抬高型急型心肌梗死

炎性免疫反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)斑塊的發(fā)生、演變及破裂過程中有至關(guān)重要的作用[1]。氧化型低密度脂蛋白、微生物抗原及熱休克蛋白等可誘發(fā)血管壁的免疫反應(yīng)，從而導(dǎo)致AS的發(fā)生和進(jìn)展。樹突狀細(xì)胞(dendritic cells，DCs)作為體內(nèi)最重要的專職抗原呈遞細(xì)胞和免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，在這一過程中起了重要作用。目前研究[2]發(fā)現(xiàn)，DCs在不穩(wěn)定斑塊中的數(shù)量明顯增加，且DCs主要聚集于不穩(wěn)定斑塊的肩部，與T淋巴細(xì)胞成簇聚集啟動(dòng)了炎性免疫反應(yīng)，從而增加了斑塊不穩(wěn)定性。

目前在人外周血中發(fā)現(xiàn)至少2種DCs亞型：髓樣DC(myeloid DC，mDC)和漿細(xì)胞樣DC(plasmacytoid DC，pDC)。mDC來自骨髓樣前體細(xì)胞，可產(chǎn)生大量的白介素-12(IL-12)，促使Th1免疫應(yīng)答；pDC起源于淋巴樣前體細(xì)胞，呈現(xiàn)漿細(xì)胞樣形態(tài)，可產(chǎn)生不依賴于IL-4的Th2免疫應(yīng)答。DCs表達(dá)高水平的人類主要組織相容性復(fù)合體(major histocompatibility complex，MHC)Ⅱ類分子，因此DCs的表型確定為L(zhǎng)in-HLA-DR+細(xì)胞[3]。在許多自身免疫性系統(tǒng)性疾病及慢性感染性疾病中，血液循環(huán)中的DCs數(shù)量明顯減少。研究[4-5]提示，DCs遷移至局部病灶及相鄰淋巴結(jié)組織是導(dǎo)致外周血DCs減少的原因。目前認(rèn)為炎性免疫反應(yīng)在不穩(wěn)定斑塊形成及破裂過程中起了重要作用，而急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是不穩(wěn)定斑塊破裂導(dǎo)致的。在AMI時(shí)，全身處于炎性免疫反應(yīng)狀態(tài)，體內(nèi)循環(huán)中DCs數(shù)量及其亞型的變化可反映此時(shí)體內(nèi)炎性狀態(tài)及DCs功能變化。因此，本研究對(duì)不穩(wěn)定斑塊引起的極端狀態(tài)——ST段抬高型AMI患者外周循環(huán)中DCs數(shù)量及其亞型改變進(jìn)行了研究，以探索DCs在不穩(wěn)定斑塊形成中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料本研究入選3組人群：(1)ST段抬高型AMI患者(AMI組)：2011年1月—4月復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院收治的17例發(fā)病時(shí)間在24 h內(nèi)的ST段抬高型AMI患者，其中男性12例，女性5例，年齡46～74歲，平均(64.25±7.73)歲，其中15例患者行急診經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療(percuta-neous coronary intervention，PCI)；(2)穩(wěn)定型心絞痛(stable angina pectoris，SAP)患者(SAP組)：14例冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)至少一支冠狀動(dòng)脈狹窄>50%、肌鈣蛋白T陰性、入院前24 h內(nèi)無(wú)靜息性胸痛的患者，其中男性11例，女性3例，年齡52～75歲，平均(63.67±9.74)歲；(3)對(duì)照組：年齡、性別匹配的冠狀動(dòng)脈造影陰性者15例，其中男性11例，女性4例，年齡50～75歲，平均(62.16±12.43)歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：美國(guó)紐約心臟病學(xué)會(huì)(New Yoke Heart Association，NYHA)心功能分級(jí)3級(jí)和4級(jí)、肝腎功能不全、自身免疫性系統(tǒng)性疾病、感染性疾病(如敗血癥、嚴(yán)重的肺部或膽道感染、高熱等)、應(yīng)用非甾體類消炎藥、惡性腫瘤、哮喘、卒中、周圍血管疾病等患者。

1.2標(biāo)本采集AMI組患者入院當(dāng)天采集靜脈血2 mL，其中行急診PCI術(shù)的患者術(shù)前采血，并在AMI發(fā)作7 d后再次采血。SAP組及對(duì)照組均采集入院24 h內(nèi)清晨空腹靜脈血。所有入選者按常規(guī)方案測(cè)定白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞數(shù)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、三酰甘油(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-choleste-rol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein-cholesterol，HDL-C)；并取患者血清，采用酶聯(lián)鏈免疫吸附試驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法檢測(cè)腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)及白細(xì)胞介素6(interleukin-6，IL-6)；流式細(xì)胞技術(shù)三色分析法檢測(cè)外周血DCs及其亞型比例。

1.3DCs及其亞型的檢測(cè)取4根試管，加入異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate，F(xiàn)ITC)標(biāo)記的Lin1混合抗體20 μL和PerCP標(biāo)記的HLA-DR單克隆抗體(美國(guó)Becton Dickinson公司)10 μL，同時(shí)管1、2、3、4分別加入熒光素(phycoerythrin，PE)標(biāo)記的CD123、IgG1、CD11c和IgG2a單抗(美國(guó)Becton Dickinson公司)，第2、4管作為陰性對(duì)照。每管加入200 μL全血，振蕩混勻，室溫暗處反應(yīng)20 min。加入熒光激活細(xì)胞分選(fluorescence-activated cell sorting，F(xiàn)ACS)溶血素2 mL溶解紅細(xì)胞，振蕩混勻，室溫暗處放置10 min。1500 r/min離心5 min，棄去上清液后，振蕩混勻，加入1 mL磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS)；1500 r/min離心5 min，棄上清，振蕩混勻，加入300 μL 1%多聚甲醛；2～8 ℃暗處保存，24 h內(nèi)。應(yīng)用FACS流式細(xì)胞儀(美國(guó)Becton Dickinson公司)分析結(jié)果，流式細(xì)胞檢測(cè)方法及步驟見圖1，其中mDC以Lin1-HLA-DR+CD11c+確定，pDC以Lin1-HLA-DR+CD123+確定，總DCs=mDC+pDC。

A：排除細(xì)胞碎片和死細(xì)胞；B：找到Lin1弱陽(yáng)性和陰性群體：使用Anti-HLA-DR/Lin1點(diǎn)圖(G1=R1)，畫R2，圈定Lin1弱陽(yáng)性和陰性細(xì)胞；C：畫R3，圈定嗜堿粒細(xì)胞(Anti-HLA-DR-/CD123+)；畫R4，圈定CD123+DC細(xì)胞(Anti-HLA-DR+/CD123+)；pDC定義為HLA-DR+和CD123+(R4)；D：畫R5，圈定CD11c+細(xì)胞(Anti-HLA-DR+/CD11c+)；mDC定義為L(zhǎng)in-，HLA-DR+和CD11c+(R5)

圖1流式細(xì)胞儀檢測(cè)外周血DCs亞型

1.4血清TNF-α和IL-6的檢測(cè)采用雙抗體夾心ELISA法，按照試劑盒說明書進(jìn)行。取血清100 μL加至預(yù)包被抗人TNF-α單抗的96孔酶標(biāo)板中，37 ℃溫育60 min，棄待測(cè)樣品血清，Tween-PBS洗滌數(shù)次反應(yīng)板(每孔加入350 μL)，并去除水滴；再加入100 μL生物素標(biāo)記的抗人TNF-α的多克隆抗體，37 ℃溫育60 min，Tween-PBS洗滌數(shù)次；每孔加入100 μL辣根過氧化物酶，37 ℃溫育30 min，Tween-PBS洗滌數(shù)次；每孔加入3,3′,5,5′-四甲基聯(lián)苯胺顯色液，37 ℃暗處溫育15 min后，加入100 μL終止液，30 min內(nèi)450 nm處讀取光密度(optical density，OD)值，根據(jù)同時(shí)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)樣品曲線計(jì)算待測(cè)血清中TNF-α含量。同樣方法測(cè)定IL-6濃度。

2結(jié)果

2.1臨床資料3組人群的年齡、既往史(包括高血壓、糖尿病史及吸煙史)、實(shí)驗(yàn)室檢查(包括TC、LDL-C、HDL-C、TG)和藥物(包括阿司匹林、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑/血管緊張素受體阻斷劑、他汀類藥物)應(yīng)用情況見表1。

2.1AMI患者急性期外周血中DCs的變化AMI組患者急性期DCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比、DCs絕對(duì)數(shù)均低于SAP組及對(duì)照組(P<0.01)；AMI患者發(fā)作7 d后DCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞百分比及其絕對(duì)數(shù)與急性期比較明顯增加(P<0.01)；SAP組患者外周血中DCs占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比及其絕對(duì)數(shù)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表2。

表1　3組人群的臨床資料比較　(n，%)

注：ACEI/ARB：血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑/血管緊張素受體阻斷劑，與對(duì)照組比較，*P<0.05

表2　3組人群外周血中DCs的變化

注：與對(duì)照組及SAP組比較，*P<0.01；與AMI組急性期比較，△P<0.01

2.3AMI患者外周血中DCs亞型的變化AMI組急性期外周血mDC與pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比和其絕對(duì)數(shù)較SAP組及對(duì)照組均明顯降低(P<0.01)，SAP組外周血mDC與pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比及其絕對(duì)數(shù)與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。AMI組患者發(fā)作7 d后mDC與pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比及其絕對(duì)數(shù)較急性期均明顯增加(P<0.01)，見圖2及表3。

另外，AMI組急性期外周血mDC與pDC比值低于對(duì)照組和SAP組(P<0.05)，AMI組發(fā)作7 d后mDC與pDC的比值與急性期比較明顯上升(P<0.05)；SAP組患者外周血mDC與pDC比值與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

2.4AMI患者血清TNF-α及IL-6水平的變化與對(duì)照組及SAP組患者比較，AMI組急性期血清TNF-α及IL-6水平明顯上升(P<0.05)；發(fā)作7 d后血清IL-6的水平明顯下降(P<0.05)，而TNF-α水平未見明顯降低，見表4。

圖2流式細(xì)胞技術(shù)三色分析法檢測(cè)1例正常對(duì)照患者、1例穩(wěn)定性心絞痛(SAP)患者及1例急性ST段抬高型心肌梗死(AMI)患者外周血中的mDC[Lin-，HLA-DR+和CD11c+(R5)]及pDC[Lin-，HLA-DR+和CD123+(R4)]

表3　3組人群外周血中DCs亞型的變化

注：與對(duì)照組及SAP組比較，*P<0.01；與AMI組(急性期)比較，△P<0.01

表4　3組人群血清TNF-α及IL-6水平的變化

注：與對(duì)照組及SAP組比較，*P<0.05；與AMI組急性期比較，△P<0.05

3討論

在AS斑塊組織內(nèi)有大量DCs聚集，DCs不僅參與了AS斑塊形成的過程，而且在不穩(wěn)定AS斑塊的形成中起了重要作用。在AS斑塊中，90%的DCs聚集在斑塊內(nèi)有破裂傾向的肩部[2]。Yilmaz等[6]研究發(fā)現(xiàn)，在不穩(wěn)定頸動(dòng)脈斑塊肩部的DCs中，有70%表達(dá)其活化標(biāo)志物CD83及樹突細(xì)胞溶酶體相關(guān)膜蛋白(DC-lysosomal-associated membrane protein，DC-LAMP)，并且在斑塊有破裂傾向的區(qū)域可發(fā)現(xiàn)激活的T淋巴細(xì)胞與DCs成簇聚集，因此認(rèn)為DCs與T淋巴細(xì)胞在有破裂傾向的部位共聚集分布與斑塊的不穩(wěn)定性有關(guān)。研究[7]比較有和無(wú)急性缺血癥狀患者粥樣斑塊中DCs的數(shù)量發(fā)現(xiàn)，急性缺血癥狀患者AS斑塊中DCs的數(shù)量明顯增多，并且不穩(wěn)定斑塊中的DCs是由循環(huán)中的DCs前體遷移而來。本研究利用流式細(xì)胞技術(shù)三色分析法直接測(cè)定ST段抬高型AMI患者外周血中DCs及其2種亞型mDC、pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比及其絕對(duì)數(shù)，并對(duì)mDC/pDC的比值變化進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)AMI患者急性期外周血mDC、pDC占外周血單個(gè)核細(xì)胞的百分比及其絕對(duì)數(shù)均明顯減小，mDC/pDC比值明顯下降，發(fā)作7 d后外周血中DCs數(shù)量及mDC/pDC比值逐漸恢復(fù)；并且發(fā)現(xiàn)AMI患者急性期血清IL-6、TNF-α明顯升高，發(fā)作7 d后IL-6水平下降，提示AMI患者急性期處于炎性免疫反應(yīng)狀態(tài)。

DCs主要來源于骨髓中CD34+多能干細(xì)胞。DCs前體離開骨髓，隨著血液循環(huán)到達(dá)靶組織，定植到抗原侵入部位，并轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒霥Cs；在這些部位，DCs持續(xù)而有效地?cái)z取周圍微環(huán)境的抗原成分。黏附分子、共刺激分子和抗原呈遞分子的共同表達(dá)促進(jìn)DCs與T淋巴細(xì)胞接觸并激活T淋巴細(xì)胞。在外周血中DCs數(shù)量很少(占外周血白細(xì)胞總數(shù)的0.1%～1%)。mDC來自骨髓樣前體細(xì)胞，與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞有共同的祖細(xì)胞；mDC表面表達(dá)CD1c、CD11c、CD33；在TNF-α或CD40L刺激下，mDC遷移至外周組織中成為間質(zhì)細(xì)胞并吞噬抗原，繼而通過二級(jí)淋巴器官激活免疫反應(yīng)分泌IL-12，促使產(chǎn)生Th1免疫應(yīng)答。pDC起源于淋巴樣前體細(xì)胞，呈漿細(xì)胞樣形態(tài)，與T、B和NK細(xì)胞有共同的前體細(xì)胞；pDC表達(dá)高水平IL-3受體α鏈(CD123)，是產(chǎn)生干擾素-α(interferon-α，IFN-α)的主要來源，還可產(chǎn)生不依賴于IL-4的Th2免疫應(yīng)答。近期的研究[8-9]表明，mDC和pDC均在AS斑塊的形成和進(jìn)展中起了重要作用。外周血中DCs的數(shù)量可以反映體內(nèi)免疫狀態(tài)，本研究發(fā)現(xiàn)AMI患者急性期外周血中DCs數(shù)量明顯下降(以mDC下降更為明顯)，考慮可能有以下幾方面原因：首先，血液循環(huán)中的DCs可能遷移到AS斑塊中，造成外周血中數(shù)量的下降。如研究[10]發(fā)現(xiàn)在冠狀動(dòng)脈造影證實(shí)的冠心病患者外周血中pDC明顯下降，認(rèn)為DCs遷移至AS斑塊組織是外周血DCs下降的原因。Yilmaz等[11]證實(shí)了這一點(diǎn)，他們發(fā)現(xiàn)在不穩(wěn)定斑塊組織中巨噬細(xì)胞炎性蛋白-3α(macrophage inflammatory protein-3α，MIP-3α)的表達(dá)較穩(wěn)定斑塊內(nèi)明顯增加，而MIP-3α是功能最強(qiáng)大的DCs趨化因子，在AS斑塊中MIP-3α與DCs數(shù)量明顯相關(guān)。Ranjit等[12]的研究也發(fā)現(xiàn)，冠心病患者外周血中成熟mDC增加，遷移能力提高。本研究發(fā)現(xiàn)在AMI患者急性期血清TNF-α水平明顯增加，而TNF-α具有增加DCs與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附能力及促進(jìn)DCs遷移的能力[13]。因此在AMI急性期，外周血中DCs在局部和外周炎性因子的趨化下，向不穩(wěn)定斑塊的遷移可能導(dǎo)致了外周血中DCs數(shù)量明顯減少，DCs在AS斑塊中聚集啟動(dòng)并促進(jìn)了炎性免疫反應(yīng)，增加斑塊的不穩(wěn)定性，加速了斑塊破裂。其次，在AMI患者中，外周血中DCs遷移至淋巴結(jié)，而血管壁中的DCs在吞噬抗原后作為隱藏細(xì)胞通過傳入淋巴管遷移到淋巴組織，在那里激活T淋巴細(xì)胞，促進(jìn)了炎性免疫反應(yīng)過程。研究[14]發(fā)現(xiàn)，在AS斑塊血管周圍的淋巴結(jié)中的DCs數(shù)量明顯多于無(wú)AS斑塊血管周圍的淋巴結(jié)。再次，本研究發(fā)現(xiàn)在AMI患者發(fā)作7 d后外周血DCs數(shù)量基本恢復(fù)至正常水平，因此也不排除在急性期中外周血中DCs侵入壞死心肌造成外周血中DCs數(shù)量減少的可能。近期有研究[15]發(fā)現(xiàn)，在AMI急性期，梗死心肌組織中DCs的數(shù)量明顯增加。除此之外，不能排除其他原因引起的外周血中DCs數(shù)量下降，如骨髓中DCs前體細(xì)胞的產(chǎn)生減少、DCs細(xì)胞凋亡的增加等。

另外，本研究發(fā)現(xiàn)，AMI患者急性期外周血mDC/pDC比值明顯下降，說明在AMI急性期mDC下降更明顯，更多mDC遷移至局部斑塊中。mDC和pDC對(duì)趨化因子的遷移反應(yīng)存在明顯差別，前者對(duì)單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1，MCP-1)和MIP-3α敏感，后者主要被CXCR-12趨化[16]，而MCP-1和MIP-3α在AS斑塊和冠心病患者外周血中異常升高。盡管有研究表明，冠心病尤其是不穩(wěn)定型冠心病患者系統(tǒng)性免疫反應(yīng)增強(qiáng)，表現(xiàn)為Th1應(yīng)答增強(qiáng)，Th1應(yīng)答相關(guān)細(xì)胞因子IL-12水平增高，但最近的研究更傾向于AS斑塊尤其是不穩(wěn)定斑塊局部的抗原依賴性免疫激活，而非系統(tǒng)性炎性免疫反應(yīng)。DCs及其亞型在抗原遞呈和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著重要作用，目前研究認(rèn)為mDC和pDC的平衡是決定Th1/Th2免疫應(yīng)答的關(guān)鍵，mDC可產(chǎn)生大量促炎因子IL-12而優(yōu)先誘導(dǎo)Th1應(yīng)答，而pDC分泌少量的IL-12，主要產(chǎn)生Th2應(yīng)答。本研究發(fā)現(xiàn)，外周血DCs遷移性改變，認(rèn)為其可能是斑塊局部的免疫應(yīng)答增強(qiáng)的重要原因，且以mDC的遷移為主，mDC在AS病變中受到抗原激活后，其分泌IL-12的能力增強(qiáng)，加速了Th1免疫應(yīng)答，并可能導(dǎo)致AS斑塊的不穩(wěn)定性增加及破裂的發(fā)生。

本研究存在以下不足之處：研究入選的病例數(shù)少；對(duì)AMI患者僅隨訪7 d，應(yīng)隨訪更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)患者外周血DCs數(shù)量的變化；在研究中未能對(duì)外周血中DCs的成熟度及其功能進(jìn)行分析比較。另外本研究?jī)H對(duì)DCs在外周血中數(shù)量變化進(jìn)行研究，而DCs在冠心病中的作用尤其在AMI中的作用還需要經(jīng)病理及形態(tài)學(xué)研究來證實(shí)。

綜上所述，由不穩(wěn)定斑塊破裂導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈內(nèi)血栓形成，是不穩(wěn)定斑塊引起的最終臨床表現(xiàn)。在AMI患者急性期，外周血中DCs數(shù)量明顯下降，可能遷移到了AS斑塊中并參與了斑塊不穩(wěn)定的形成，提示DCs在AS形成的炎性免疫過程起了重要作用，為AS炎性免疫假說提供了新的理論依據(jù)，并為AS尤其是不穩(wěn)定斑塊的預(yù)測(cè)提供了新的思路。

參考文獻(xiàn)

[1]Cartland SP,Jessup W.Dendritic cells in atherosclerosis[J].Curr Pharm Des,2013,19(33):5883-5890.

[2]Dietel B,Cicha I,Voskens CJ,et al.Decreased numbers of regulatory T cells are associated with human atherosclerotic lesion vulnerability and inversely correlate with infiltrated mature dendritic cells[J].Atherosclerosis,2013,230(1):92-99.

[3]Robinson SP,Patterson S,English N,et al.Human peripheral blood contains two distinct lineages of dendritic cells[J].Eur J Immunol,1999,29(9):2769-2778.

[4]Ozaki Y,Amakawa R,Ito T,et al.Alteration of peripheral blood dendritic cells in patients with primary Sj?gren′s syndrome[J].Arthritis Rheum,2001,44(2):419-431.

[5]Uehira K,Amakawa R,Ito T,et al.Dendritic cells are decreased in blood and accumulated in granuloma in tuberculosis[J].Clin Immunol,2002,105(3):296-303.

[6]Yilmaz A,Lochno M,Traeg F,et al.Emergence of dendritic cells in rupture-prone regions of vulnerable carotid plaques[J].Atherosclerosis,2004,176(1):101-110.

[7]Jin W,Yan W,Li ZL,et al.A decrease in the percentage of circulating mDC precursors in patients with coronary heart disease:a relation to the severity and extent of coronary artery lesions?[J].Heart Vessels,2013,28(2):135-142.

[8]Koltsova EK,Hedrick CC,Ley K.Myeloid cells in atherosclerosis:a delicate balance of anti-inflammatory and proinflammatory mechanisms[J].Curr Opin Lipidol,2013,24(5):371-380.

[9]Chistiakov DA,Orekhov AN,Sobenin IA,et al.Plasmacytoid dendritic cells:development,functions,and role in atherosclerotic inflammation[J].Front Physiol,2014,5:279.

[10]Van Vré EA,Hoymans VY,Bult H,et al.Decreased number of circulating plasmacytoid dendritic cells in patients with atherosclerotic coronary artery disease[J].Coron Artery Dis,2006,17(3):243-248.

[11]Yilmaz A,Weber J,Cicha I,et al.Decrease in circulating myeloid dendritic cell precursors in coronary artery disease[J].J Am Coll Cardiol,2006,48(1):70-80.

[12]Ranjit S,Dazhu L,Qiutang Z,et al.Differentiation of dendritic cells in monocyte cultures isolated from patients with unstable angina[J].Int J Cardiol,2004,97(3):551-555.

[13]Weis M,Schlichting CL,Engleman EG,et al.Endothelial determinants of dendritic cell adhesion and migration:new implications for vascular diseases[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol,2002,22(11):1817-1823.

[14]Bobryshev YV.Dendritic cells in atherosclerosis:current status of the problem and clinical relevance[J].Eur Heart J,2005,26(17):1700-1704.

[15]Kretzschmar D,Betge S,Windisch A,et al.Recruitment of circulating dendritic cell precursors into the infarcted myocardium and pro-inflammatory response in acute myocardial infarction[J].Clin Sci,2012,123(6):387-398.

[16]Penna G,Vulcano M,Sozzani S,et al.Differential migration behavior and chemokine production by myeloid and plasmacytoid dendritic cells[J].Hum Immunol,2002,63(12):1164-1171.

The Alteration of Circulating Dendritic Cells and Subtypes in ST-Elevated Acute Myocardial Infarction

LUHaoYAOKangHUANGDongLIChenguangCHANGShufuDAIYuxiangSUNAijunZOUYunzengQIANJuyingGEJunboDepartmentofCardiology,ZhongshanHospital,FudanUniversity,Shanghai200032,China

AbstractObjective：To analyze the frequency and alteration of circulating dendritic cells (DCs) and subtypes in patients with ST-elevated acute myocardial infarction(AMI). Methods:A total of 17 patients with ST-elevated AMI(AMI group) and 14 patients with stable angina pectoris(SAP) as SAP group and 15 people with normal coronary angiogram with matched age and gender(control group) were enrolled. The absolute number and percentage in peripheral blood mononuclear cells of circulating DCs, myeloid dendritic cell(mDC) and plasmacytoid dendritic cell(pDC) in the three groups were detected using the 3-colure staining flow cytometry.The levels of interleukin-6(IL-6) and tumor necrosis factor-α(TNF-α) were detected with enzyme-linked immunosorbent assay.In the AMI group, these indexes were measured on the 7th day after the attack. Results: The percentage of circulating DCs in peripheral blood mononuclear cells and the absolute number of DCs, the percentage of circulating mDC and pDC in peripheral blood mononuclear cells and the absolute numbers of mDC and pDC and mDC/pDC ratio in the AMI group on the day of attack(<24 h) were significantly lower than those in the control group and the SAP group(P<0.01 or 0.05).In the AMI group,on the 7th day after the attack, the percentages of DCs,mDC and pDC in peripheral blood mononuclear cells and the absolute numbers of DCs,mDC and pDC and mDC/pDC ratio were higher than those on the day of attack (P<0.01 or 0.05).The level of IL-6 and TNF-α in the AMI group on the day of attack were significantly higher than those in the control group and SAP group(P<0.05), and the level of IL-6 decreased on the 7th day after the attack in the AMI group (P<0.05).But there was no significant difference in the percentage of DCs,mDC and pDC in peripheral blood mononuclear cells and the absolute numbers and mDC/pDC ratio between the control group and the SAP group(P>0.05). Conclusions: Circulating mDC and pDC are significantly reduced in patients on the day of attack of AMI,and it can increase to nearly normal on the 7th day after attack.It indicates that the possibility of DCs recruits into coronary plaques and improve the formation of unstable plaque.

Key WordsDendritic cells；Atherosclerosis；Immune response；ST-elevated acute myocardial infarction

通訊作者葛均波，E-mail：jbge@zs-hospital.sh.cn

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：81400318)

中圖分類號(hào)R 542.2+2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A