劉薇芝，劉 巍，胡漢昆，鄭 艷，田 晗（.武漢大學中南醫(yī)院，武漢 43007；.中南民族大學藥學院，武漢 43007）

糖尿?。―iabetes mellitus，DM）是一組代謝性臨床綜合征。依據(jù)第17屆國際糖尿病大會報道，全球已確診1.5億患者，預測到2025年該數(shù)目將增至3億，其中2型糖尿?。═2DM）占90%以上，并且呈現(xiàn)逐年上升趨勢[1-2]?？嗍w[Fagopyrum tataricum（linn）Gaertn]又名韃靼蕎，是蕎麥的一個栽培品種，屬于雙子葉蓼科蕎麥屬，為一年生草本植物?？嗍w具有防治心腦血管硬化、促進消化吸收、增強機體免疫力的作用。研究表明，苦蕎對糖尿病有較好的療效，而苦蕎黃酮是其主要的藥效成分之一[3]。本研究采用鏈脲佐菌素（STZ）聯(lián)合高脂高糖飲食復制大鼠2型糖尿病模型[4-5]，采用空腹血糖、葡萄糖耐量、血清胰島素（INS）、甘油三酯（TG）以及總膽固醇（TC）多個指標，綜合評價苦蕎黃酮提取物對2型糖尿病模型大鼠的治療作用，為苦蕎黃酮提取物治療2型糖尿病的臨床應用提供科學依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

AG 5804R22331 型聚合酶鏈反應（PCR）儀（德國Eppendorf公司）；穩(wěn)豪型血糖儀（美國強生公司）；TGL-20B型高速冷凍離心機（上海安亭科學儀器廠）；InfiniteM200型多功能酶標儀（德國Tecan公司）。

1.2 藥品與試劑

STZ（美國Sigma公司，批號：S0130，規(guī)格：1 g/瓶）；苦蕎黃酮提取物（西安塞納生物技術有限公司，批號：20130105，純度：70%）；鹽酸二甲雙胍片（北京中惠藥業(yè)有限公司，批號：20120504，規(guī)格：0.25 g/片）；TG 試劑盒（批號：20121105）、TC試劑盒（批號：20121010）、INS試劑盒（批號：20121112）均購自北京北化康泰臨床試劑有限公司。

1.3 動物

2 方法

2.1 復制模型與分組、給藥

以高糖飲用水（12%果糖水，即將120 g果糖溶于1 000 ml蒸餾水中）與高脂飼料喂養(yǎng)大鼠[4]，2 周后一次性ip 給予STZ（30 mg/kg）以復制大鼠2型糖尿病模型；正常對照組大鼠ip給予等容檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。復制模型72 h后，大鼠尾靜脈取血檢測，血糖值＞16.7 mmol/L 為復制模型成功[2]。60 只SD 大鼠隨機均分為6 組，即正常對照（等容生理氯化鈉溶液）組、模型（等容生理氯化鈉溶液）組、二甲雙胍（300 mg/kg）組與苦蕎黃酮提取物高、中、低劑量（1 000、500、250 mg/kg）組，ig給藥，每天1次，連續(xù)4周。給藥劑量依據(jù)參考文獻[7]。

2.2 大鼠空腹血糖值與糖耐量檢測[6]

給藥7、14、21、28 d時檢測大鼠空腹血糖：每次測定前，大鼠禁食12 h，尾靜脈采血，采用血糖儀測定其空腹血糖。給藥28 d 后，同上禁食處理，大鼠ig 給予葡萄糖（2 000 mg/kg），測定糖負荷后15、30、60、120 min 各時間點的血糖值，繪制口服糖耐量實驗的時間-血糖曲線，計算時間-血糖的曲線下面積（AUCG）。

2.3 大鼠血漿TC、TG與血清INS的檢測

末次給藥后，大鼠ip 給予0.3%戊巴比妥鈉（10 ml/kg）麻醉，隨后摘眼球取血。部分全血以離心半徑為10 cm、3 500 r/min 離心15 min，獲取血清，按試劑盒說明書檢測大鼠血清INS 水平。部分全血以乙二胺四乙酸鹽（EDTA）抗凝，4 ℃下靜置20 min 后，以離心半徑為10 cm、1 500 r/min 離心15 min，獲取血漿，按試劑盒說明書檢測TC和TG水平。

2.4 統(tǒng)計學方法

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠空腹血糖值的檢測結(jié)果

與正常對照組比較，在復制模型后第7、14、21、28 天時模型組大鼠空腹血糖值升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，二甲雙胍組與苦蕎黃酮提取物高、中、低劑量組大鼠空腹血糖值降低，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠空腹血糖值的檢測結(jié)果（，n＝10）Tab 1 Fasting blood glucose results of rats in each group（，n＝10）

表1 各組大鼠空腹血糖值的檢測結(jié)果（，n＝10）Tab 1 Fasting blood glucose results of rats in each group（，n＝10）

注：與正常對照組比較，＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.01

3.2 各組大鼠糖耐量的檢測結(jié)果

通過時間-血糖曲線并計算AUCG。與正常對照組比較，模型組大鼠AUCG 增加，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，二甲雙胍組與苦蕎黃酮提取物高、中、低劑量組大鼠AUCG減少，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01或P＜0.05）。各組大鼠糖耐量實驗的時間-血糖曲線見圖1，AUCG結(jié)果見表2。

圖1 各組大鼠糖耐量實驗的時間-血糖曲線（n＝10）Fig 1 The glucose blood-time curve of rats’glucose tolerance in each group（n＝10）

表2 各組大鼠AUCG、血漿TC、TG 與血清INS 水平的檢測結(jié)果（，n＝10）Tab 2 Results of AUCG，serum insulin，serum triglyceride and total cholesterol of rats in each group（，n＝10）

表2 各組大鼠AUCG、血漿TC、TG 與血清INS 水平的檢測結(jié)果（，n＝10）Tab 2 Results of AUCG，serum insulin，serum triglyceride and total cholesterol of rats in each group（，n＝10）

注：與正常對照組比較，＊P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

3.3 各組大鼠血漿TC、TG與血清INS的檢測結(jié)果

與正常對照組比較，模型組大鼠血漿TC、TG含量增加，血清INS 活性增強，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。與模型組比較，二甲雙胍組與苦蕎黃酮提取物高、中、低劑量組大鼠血漿TC、TG含量減少，血清INS活性減弱，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01），結(jié)果見表2。

4 討論

本研究采用空腹血糖水平、葡萄糖耐量、血清INS 及血漿TC、TG等多個指標綜合評價苦蕎黃酮提取物對STZ聯(lián)合高脂高糖復制2型糖尿病模型大鼠的保護作用，從而對苦蕎黃酮提取物對2 型糖尿病的治療效果提出科學的參考依據(jù)?？崭寡桥c葡萄糖耐量是臨床上的重要及常用的指標，反映機體胰島B 細胞的功能，代表著基礎胰島素的分泌能力[8]。另外，監(jiān)測INS水平是臨床上診斷糖尿病的重要可靠方法，也是反映胰島B細胞分泌功能的重要指標。流行病學調(diào)查提示，隨著中國社會人口的老齡化及高脂高糖的不良飲食習慣，高脂高糖飲食是導致胰島素抵抗和糖尿病發(fā)病的高度危險因素[9-10]。由于大部分2 型糖尿病患者同時具有葡萄糖以及脂質(zhì)代謝紊亂等病變，因此對TG 以及TC 的檢測可較好地反映苦蕎黃酮提取物的治療效果。

本研究從多個角度綜合分析苦蕎黃酮提取物對STZ聯(lián)合高脂高糖飲食復制的2型糖尿病模型大鼠的保護作用，結(jié)果顯示苦蕎黃酮提取物可明顯下調(diào)模型大鼠的空腹血糖水平、葡萄糖耐量、血清INS 水平及血漿TG、TC 水平。因此本研究可為苦蕎黃酮提取物對2型糖尿病的治療提供實驗依據(jù)。

[1]桂莉，郭家智，曹梅，等.高脂、高膽固醇灌胃誘導2 型糖尿病SD大鼠模型的實驗研究[J].昆明醫(yī)學院學報，2010（10）：41.

[2]洪麗莉，許冠蓀，申國明，等.SD大鼠2型糖尿病模型的建立[J].實驗動物科學與管理，2005，15（6）：379.

[3]祁學忠，吉鎖興，王曉燕，等.苦蕎黃酮及其降血糖作用的研究[J].科技情報開發(fā)與經(jīng)濟，2003，13（8）：111.

[4]王俊賢，李小軍，劉躍輝，等.高糖、高脂誘導大鼠肝臟胰島素抵抗評價[J].中國藥師，2012，15（6）：747.

[5]王海彬，王東華，張鐵民.菩人丹超微粉對糖尿病大鼠視網(wǎng)膜VEGF蛋白表達的影響[J].中國藥房，2011，22（23）：2 199.

[6]Janet C，Wayne R，Joseph T，et al.Guide for the care and use of laboratory animals[M].Washington：National Academics Press，2011：1-220.

[7]王敏，魏益民，高錦明.苦蕎麥總黃酮對高脂血大鼠血脂和抗氧化作用的影響[J].營養(yǎng)學報，2006，28（6）：502.

[8]Carnevale Schianca GP，Rossi A，Sainaghi PP，et al.The significance of impaired fasting glucose versus impaired glucose tolerance：importance of insulin secretion and resistance[J].Diabetes Care，2003，26（5）：1 333.

[9]Virally M，Blickle JF，Girard J，et al.Type diabetesmellitus：epidemiology，pathophysiology，unmet needs and therapeutical perspectives[J].Diabetes Metab，2007，33（4）：231.

[10]Campbell IW.Epidemiology and clinical presentation of type diabetes[J].Value Health，2000，3（1）：3.