蘇湘川，任小麗，石青青

（浙江省臺州市立醫(yī)院，臺州 318000）

特應性皮炎（Atopic dermatitis，AD）是一種與遺傳過敏素質有關的慢性炎癥性皮膚病，多自嬰兒期起病,病情遷延反復,部分可持續(xù)至成年期。在兒童期，特應性皮炎是一種常見疾病，發(fā)病率較高，并呈現逐年上升的趨勢。在我國兒童皮膚病中，AD 占皮膚科兒童就診人數的30%左右[1]。本病的病因不明，發(fā)病機制涉及炎癥損傷、細胞誘導分化、細胞凋亡及免疫系統(tǒng)的調控等多方面[2]。Th17 細胞是獨立于Th1/Th2 型細胞的一種新型T 細胞，能分泌炎癥介質白細胞介素-6（IL-6）、白細胞介素-17（IL-17）等多種細胞因子誘導免疫炎癥反應[3]。本研究通過檢測不同嚴重程度AD 患者外周血Th17 細胞比例及Th17 細胞相關細胞因子表達水平，旨探討Th17 細胞及其相關細胞因子在不同嚴重程度AD 患者發(fā)病中的意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2011 年1 月—2013 年12 月在我科就診的輕度AD 患者34 例，中度AD 患者36 例，重度AD 患者34 例，診斷均符合Williams 診斷標準[4]。病情嚴重程度按歐洲特應性皮炎評分標準（SCORAD）進行評分[5]，評分越高，病情越重，按分值從低到高分為3 組，＜25 分為輕度組，25～50 分為中度組，＞50 分為重度組。其中輕度AD 患者男22 例，女12 例，平均年齡（10.27±2.41）歲；中度AD 患者男23 例，女13 例，平均年齡（11.27±2.72）歲；重度AD患者男21 例，女13 例，平均年齡（11.56±2.05）歲。所有患者未合并系統(tǒng)感染性疾病、免疫系統(tǒng)疾病及肝、腎、造血系統(tǒng)疾病和內分泌系統(tǒng)等嚴重原發(fā)性疾病和精神病患者。并于入組前1 周停用抗組胺藥及外用糖皮質激素，半年內未系統(tǒng)使用糖皮質激素、免疫抑制劑及免疫調節(jié)劑。健康對照組為隨機抽取本院同期35 例健康體檢者，其中男22 例，女13 例，平均年齡（10.82±1.98）歲。各組間性別、年齡差異無統(tǒng)計學意義。

1.2 試劑和儀器 PE-抗IL-17 流式抗體，PE-IL-6 流式抗體，PE-IgG1 同型對照抗體均為美國eBioscience 公司產品；佛波酯、離子霉素、植物血凝素、固定劑和破膜劑為美國Sigma 公司；美能星、流式細胞儀為BD公司；RPMI1640 培養(yǎng)基為Gibco 產品。

1.3 外周血Th17 細胞的檢測[6]取100 μL 患者全血，用100 μL RPMI1640 培養(yǎng)基等量稀釋，加入1 μL/mL 佛波酯工作液4 μL，37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4～6 h。加入10 μL PECy5 抗CD3 和10 μL FITC抗CD8 單抗，室溫、避光、溫育15 min。分為2 管，每管加入上述已染色的全血100 μL 編號為a 和b，分別加入固定液100 μL，室溫，避光溫育15 min，再各自分別加入PBS 3 mL，1 200 r/min 離心5 min，除去上清液。各自再加入破膜劑100 μL，同時在a 管中加入10 μL PE-IgG1 同型對照抗體，b 管中加入10 μL PE-IgG1 抗IL-17 流式抗體，室溫，避光溫育15 min，每管中加入PBS 3 mL，1 200 r/min 離心5 min，除去上清液，加入0.5 mL PBS 重懸細胞，上機檢測。

1.4 血清中IL-17、IL-6 的檢測 采清晨空腹靜脈血5 mL，離心、取血清，采用ELISA 法檢測患者血清及健康組血清中IL-17、IL-6，操作嚴格按試劑說明書進行。ELISA 試劑盒為晶美生物工程有限公司提供。

1.5 統(tǒng)計學處理 數據以均數±標準差（x±s）表示，采用統(tǒng)計軟件SPSS16.0 進行分析。對各組數據進行F 檢驗，P<0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

不同嚴重程度特應性皮炎患者外周血Th17 細胞、IL-17、IL-6 水平與健康組比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0．05），見表1。

表1 各組Th17 細胞比例，IL-17、IL-6 濃度比較 例

3 討論

AD 是一種與遺傳過敏素質有關的慢性炎癥性皮膚病，其特征為濕疹樣皮損、瘙癢劇烈、皮膚干燥，常伴有血清中IgE 水平增高和外周血嗜酸細胞粒細胞增多的異常免疫現象[7]。Th17 細胞是一種新發(fā)現的CD4+T 細胞亞群，可通過分泌IL-17、IL-6等細胞因子誘導產生多種前炎癥細胞因子和趨化因子，在自身免疫性炎癥中發(fā)揮著重要作用[3]。IL-6是一種多功能細胞因子，參與機體的炎性反應過程和能量代謝調節(jié)，是炎性反應的細胞因子網絡中一個中樞性調節(jié)因子，又稱前炎性反應細胞因子，參與機體的各種病理生理過程。鄭益志等[8]研究發(fā)現AD 患者血清中IL-6 明顯高于正常健康對照組，與本研究結果相似。Th17 細胞是IL-17 的主要來源細胞，反之IL-17 是Th17 細胞的主要效應分子，兩者變化趨勢的一致性共同反映了Th17 細胞在AD 發(fā)病中的作用。AD 的確切發(fā)病機制尚未闡明，因此，從根本上控制本病仍難以實現。進一步研究其發(fā)病機制，對于改善當前的治療手段、開發(fā)新的治療方法非常必要[9-10]。目前國際上已開始研發(fā)多種生物制劑,例如作用于IL-17 及其受體的靶向藥物,如IL-17R-Ig 融合蛋白、IL-17 抗體等。我們通過研究發(fā)現不同嚴重程度AD 患者外周血Th17 細胞、IL-17、IL-6 水平與正常健康體檢者比較明顯升高，且隨著病情嚴重程度增加而逐漸增高，說明Th17 細胞及其分泌的細胞因子對AD 的發(fā)病及病情發(fā)展存在一定的關系, 可嘗試用此類生物制劑改善AD 的炎癥狀態(tài)、緩解病情。

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