侯亞平 沈莉 張金彩 張燕

添加不同量PAS-ⅢM對(duì)單采血小板質(zhì)量的影響

侯亞平 沈莉 張金彩 張燕

目的 研究單采血小板添加不同濃度的PAS-ⅢM液后在保存期間對(duì)血小板功能的影響變化，探究更適合單采血小板保存的PAS-ⅢM液的濃度。方法 將40個(gè)治療量的單采血小板分成4組，分別添加不同濃度PAS-ⅢM液的單采血小板，對(duì)各組在保存期的第1、3、5、7、10天分別進(jìn)行pH值、HSR、凝血酶聚集率、CD62p陽(yáng)性率的測(cè)定。結(jié)果 添加PAS-ⅢM液濃度為70%的單采血小板在單采血小板保存的第10天，pH值、HSR、凝血酶聚集率、CD62p陽(yáng)性率等各項(xiàng)指標(biāo)均優(yōu)于添加PAS-ⅢM液濃度為90%、50%以及未添加PAS-ⅢM液的單采血小板。結(jié)論 添加PAS-ⅢM液濃度為70%的單采血小板有效的保存了血小板的功能，延長(zhǎng)了單采血小板的保存期。

單采血小板;PAS-ⅢM;HSR;CD62p

通常單采血小板是用血漿作為懸浮介質(zhì)保存的，保存時(shí)間為5 d左右，國(guó)外近年來(lái)研制了多種不同的血小板添加液，以延長(zhǎng)血小板保存時(shí)間。不同的血小板保存液，不同的血漿濃度，對(duì)血小板的質(zhì)量影響也不同。本實(shí)驗(yàn)是去除不等量的血漿，添加不等量的PAS-ⅢM單采血小板添加液，在22℃保存，以觀察體外單采血小板的質(zhì)量指標(biāo)變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機(jī)抽取符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》的獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的單采血小板。

1.2 設(shè)備與試劑 MCS+血細(xì)胞分離機(jī)(美國(guó)血液技術(shù)公司)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(SYSMEX有限公司)，無(wú)菌導(dǎo)管接口機(jī)(日本制造)，血小板振蕩儀(蘇州)，F(xiàn)ACS流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD公司)，血小板凝聚儀(北京普利生集團(tuán))，血小板聚集誘導(dǎo)劑，PAS-ⅢM聯(lián)袋(山東威高醫(yī)用高分子生物制品有限公司)，995E耗材(美國(guó)血液技術(shù)公司)，離心機(jī)(德國(guó)JouanKR41)。

1.3 方法 根據(jù)《獻(xiàn)血者健康檢查要求》對(duì)單采成分獻(xiàn)血者進(jìn)行初篩檢測(cè)，合格后隨機(jī)抽取符合采集單采血小板要求的獻(xiàn)血者40人，用MCS+血細(xì)胞分離機(jī)采集單采血小板1個(gè)治療量，采集過(guò)程均順利，獻(xiàn)血者沒有出現(xiàn)獻(xiàn)血反應(yīng)并且血細(xì)胞分離機(jī)未出現(xiàn)異常報(bào)警等情況。經(jīng)質(zhì)量檢測(cè)，采集后每位獻(xiàn)血者捐獻(xiàn)的單采血小板產(chǎn)品質(zhì)量(血小板含量，白細(xì)胞，紅細(xì)胞殘留量及容量)均符合《全血及成分血質(zhì)量要求》。將40人份的單采血小板隨機(jī)分成4組，每組10份，將其中1組單采血小板作為對(duì)照組，放入血小板振蕩儀中22℃振蕩保存。隨機(jī)將另外3組經(jīng)離心分別移除占單采血小板總量的90%、70%、50%的血漿后，通過(guò)無(wú)菌導(dǎo)管接口機(jī)連接PAS-ⅢM聯(lián)袋，通過(guò)密閉管道分別加入與移除血漿容量相等的的 PAS-ⅢM液，分別制備成含90%、70%、50%濃度PAS-ⅢM的單采血小板，再將含不同濃度PAS-ⅢM的單采血小板各10份放入血小板振蕩儀中振蕩保存。將制備成不同PAS-ⅢM濃度的單采血小板和未移除血漿的單采血小板對(duì)照組分別進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn):(1)用ISTAT CG4+血?dú)鈨x在第1、3、5、7、10天分別測(cè)定pH值。(2)用分光光度計(jì)在第1、3、5、7、10天分別測(cè)定HSR。(3)用血小板聚集儀在第1、3、5、7、10 天分別測(cè)定凝血酶聚集率。(4)用流式細(xì)胞儀在第 1、3、5、7、10 天分別檢測(cè)血小板 CD62p陽(yáng)性率。

2 結(jié)果

2.1 pH值比較 正常單采血小板的pH值應(yīng)在6.4～7.4，4組單采血小板在實(shí)驗(yàn)的第1～5天，pH值沒有明顯的差異。PAS-ⅢM濃度為70%和PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板，在第10天時(shí)pH值仍在血小板保存的正常范圍內(nèi)，但是PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板pH值低于PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板。PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板在第10天的pH值接近未添加PAS-ⅢM的單采血小板對(duì)照組在第5天pH值，PAS-ⅢM濃度為50%的單采血小板和未添加PAS-ⅢM的單采血小板對(duì)照組在10天pH值都低于正常值低限，并且未添加PAS-ⅢM的單采血小板對(duì)照組在7 d～10 d pH值下降非?？臁Ｒ姳?。

表1 pH值比較

2.2 HSR比較 在實(shí)驗(yàn)的第1天，4組單采血小板HSR實(shí)驗(yàn)均沒有明顯差異，在實(shí)驗(yàn)的第3天，PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板，和其他3組對(duì)比，有明顯差異。PAS-ⅢM濃度為50%的單采血小板在第5天HSR值明顯下降，未添加PAS-ⅢM的對(duì)照組在第7天-第10天HSR恢復(fù)率明顯下降。PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板在第1、3、5、10天HSR值沒有明顯差異。其他3組在第10天HSR值和第1天相比顯著減少。見表2。

表2 HSR比較 %

2.3 凝血酶聚集率比較 PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板和對(duì)照組的凝血酶聚集率在第5天就出現(xiàn)明顯下降，第7～10天略有下降;PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板凝血酶聚集率在1、3、5、7、10天均沒有明顯下降，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，沒有明顯差異。PAS-ⅢM濃度為50%的單采血小板凝血酶聚集率在第7天出現(xiàn)明顯下降。見表3。

表3 凝血酶聚集率比較 %

2.4 血小板CD62p陽(yáng)性率的比較 PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板從第1天到第10天血小板CD62p陽(yáng)性率有所升高，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析沒有明顯差異。PAS-ⅢM濃度為90%的單采血小板血小板CD62p陽(yáng)性率在第3天就明顯升高，和第1天有明顯差異;對(duì)照組血小板CD62p陽(yáng)性率在第7天明顯升高，和第1天有明顯差異。見表4。

表4 血小板CD62p陽(yáng)性率比較 %

3 討論

3.1 PAS-ⅢM中的醋酸鹽主要以三羧酸循環(huán)的方式代謝［1］，最終代謝產(chǎn)物CO2能夠從保存袋內(nèi)排出，減少了碳酸氫鹽的消耗，保證了單采血小板pH值維持正常范圍，PAS-ⅢM中的磷酸鹽能維持血小板的中性pH值。未添加PAS-ⅢM的單采血小板對(duì)照組，是完全以血漿作為血小板的懸浮介質(zhì)，血漿中的葡萄糖主要以糖酵解的方式代謝，而代謝終產(chǎn)物乳酸鹽和氫離子不能排出，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，產(chǎn)生的乳酸鹽和氫離子等代謝產(chǎn)物增多，pH值急劇下降，血小板的功能活性也減低，達(dá)不到正常范圍。

3.2 血小板在低滲環(huán)境中使自身體積縮小的機(jī)制和其他動(dòng)物細(xì)胞一樣，通過(guò)產(chǎn)生一系列信息傳導(dǎo)和生化反應(yīng)，降低血小板內(nèi)部離子的濃度以維持血小板內(nèi)體積，血小板內(nèi)的這個(gè)反應(yīng)依靠ATP來(lái)完成，而ATP來(lái)源于PAS-ⅢM中醋酸鹽的氧化［2］。HSR實(shí)驗(yàn)是檢測(cè)單采血小板的抗低滲休克能力。即HSR恢復(fù)率越高，血小板的形態(tài)和體積越接近正常，血小板的功能就越好［3］。

3.3 凝血酶誘導(dǎo)的聚集反應(yīng)即凝血酶聚集率，血小板CD62p是血小板活化的重要指標(biāo)，PAS-ⅢM中含有鎂離子和鉀離子，鎂離子通過(guò)改變膜流體性或通過(guò)形成環(huán)腺苷酸抑制血小板在受到刺激時(shí)發(fā)生聚集，鉀離子和鎂離子聯(lián)合應(yīng)用能夠減少血小板的活化，由此表明，PAS-ⅢM能夠減少血小板活化。但是CD62p的水平不能單獨(dú)作為血小板生存力和輸注效果的唯一指標(biāo)。

3.4 實(shí)驗(yàn)表明，PAS-ⅢM和血漿混合保存單采血小板較好地保持了血小板膜的完整性和維護(hù)血小板正常體積所需要的能量代謝，較好地保持了血小板的功能。而PAS-ⅢM濃度為70%的單采血小板更有效的保持了血小板的特性［3，4］。國(guó)外有文獻(xiàn)報(bào)道，PAS-ⅢM 保存血小板在體外維持血小板質(zhì)量至少有30%的血漿［5］。BEST Collaborative剩余血漿被從30%降低到20%對(duì)血小板的功能有損害［6］。

3.5 溫度對(duì)單采血小板的保存非常重要，本實(shí)驗(yàn)是在正常22℃條件下進(jìn)行的，4℃和22℃添加PAS-ⅢM液的單采血小板在血小板的功能，形態(tài)上會(huì)有明顯的差異。國(guó)外有報(bào)道表明，添加PAS-ⅢM液后冷藏和冷凍單采血小板可以提高血小板的功能，提高出血病人的止血效果，同時(shí)減少發(fā)熱、膿毒血癥、過(guò)敏等輸血反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)［7］。對(duì)于添加不同濃度的PAS-ⅢM液的單采血小板也有不同的影響，由于條件限制，還應(yīng)該進(jìn)一步進(jìn)行血小板功能方面的其他實(shí)驗(yàn)。

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10．3969/j．issn．1002-7386．2015．21．032

050071 石家莊市，河北省血液中心

2015-04-12)