寇蓬+徐勤+楊麗華

摘要：目的 探討多耐藥基因（MDR1）在宮頸癌組織中的表達及臨床意義。方法 免疫組化法檢測78例中、晚期宮頸癌組織微陣列芯片標(biāo)本中MDR1表達，探討其與宮頸癌臨床病理特征的關(guān)系。結(jié)果 78例宮頸癌組織中MDR1陽性表達率為85.6%，隨著FIGO分期的變晚、淋巴轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)、分化程度的降低，MDR1的表達逐漸增高。結(jié)論 MDR1在宮頸癌組織中表達可能與宮頸癌的侵襲、轉(zhuǎn)移和進展密切相關(guān)。

關(guān)鍵詞：子宮頸癌；MDR1基因；耐藥；表達

宮頸癌是全球女性第二高發(fā)癌癥，每年有52.9萬例新發(fā)病例，50%發(fā)生于發(fā)展中國家[1]，發(fā)病率僅次于乳腺癌，嚴(yán)重危害著女性的身心健康，近27.4萬女性死于該病[2-3]。其中侵襲、轉(zhuǎn)移被認為是宮頸癌患者死亡的重要原因，是影響患者預(yù)后的獨立因素。因此研究與宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移的相關(guān)因素具有重要意義。多藥耐藥（muhidrugresistance，MDR）指的是腫瘤細胞對一種抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性的同時，對結(jié)構(gòu)和作用機制完全不同的抗腫瘤藥物產(chǎn)生交叉耐藥性[4]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測MDR1在中、晚期宮頸癌組織中的表達，分析MDR與中晚期宮頸癌臨床病理之間的關(guān)系，探討MDR1在宮頸癌侵襲、轉(zhuǎn)移和進展中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 宮頸癌組織微陣列芯片購自西安艾麗娜生物科技有限公司，組織芯片的病理學(xué)診斷由兩個獨立的病理科醫(yī)師一致得出。芯片組織標(biāo)本由宮頸活檢病理確診，按照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）2009年修訂的宮頸腫瘤分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅱ期43例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例（含淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌8例）。1例正常宮頸腺體作為陰性對照，年齡為47歲。另有一例粘液表皮樣癌，不進入統(tǒng)計。有1例標(biāo)本無組織學(xué)分級資料。山羊血清、HRP-山羊抗兔二抗均購自康為世紀(jì)、兔抗人MDR、DAB顯色試劑盒、蘇木素染色劑、中性樹膠均夠自博士德。

1.2免疫組化法檢測MDR在宮頸癌組織中的表達 切片常規(guī)烘烤、脫蠟、水化、抗原修復(fù)、山羊血清室溫封閉1h，每張切片分別滴加0.01M PBS按1：100稀釋的兔抗人MDR一抗，4℃過夜，滴加生物素標(biāo)記的二抗300μl，室溫避光孵育30min，滴加DAB顯色液液300μl，蘇木素復(fù)染、常規(guī)脫水、透明、中性樹膠封片、讀片。己知陽性片為陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 MDR表達評判標(biāo)準(zhǔn) 參照相關(guān)文獻[5]，在Leica光學(xué)顯微鏡200倍放大倍數(shù)觀察切片，MDR1以細胞核或細胞質(zhì)呈淡黃色至棕褐色顆粒為陽性。隨機選擇五個視野，每個視野計數(shù)200個細胞。評分標(biāo)準(zhǔn)按Shimizu方法，根據(jù)陽性細胞百分比和染色強度評分：根據(jù)染色強度分別記為0分（陰性反應(yīng)），1分（淡黃色），2分（棕黃色）和3分（棕褐色）；根據(jù)陽性細胞數(shù)目分別記為0分（陽性細胞<10%），1分（陽性細胞數(shù)<40%），2分（陽性細胞數(shù)40%～70%），和3分（強陽性：陽性細胞數(shù)>70%）。兩類分值相乘，5個視野評分結(jié)果取均值。0～3分為（-），4～5分為（+），6～分為（++），9分為（+++）。得到各組的平均分?jǐn)?shù)后進行統(tǒng)計分析比較。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析處理：計數(shù)資料采用Fisher's精確概率法及非參數(shù)秩和檢驗；若P<0.05，則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

MDR在宮頸癌組織中的表達及與臨床病理特征的關(guān)系MDR免疫組化陽性產(chǎn)物呈淡黃色至棕褐色顆粒，主要定位于細胞漿或細胞核（見圖1）。78例宮頸癌組織中MDR的陽性表達率為85.6%。MDR在宮頸癌組織中的表達與腫瘤組織學(xué)類型、年齡無關(guān)；與FIGO分期、淋巴轉(zhuǎn)移、分化程度密切相關(guān)，隨著FIGO分期的變晚、淋巴轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)、分化程度的降低MDR的表達均逐漸增高（P<0.05），見表1。

3 討論

化療在腫瘤的治療中發(fā)揮了重要的作用，但是腫瘤細胞對藥物的耐藥性嚴(yán)重影響了化療藥的臨床效果。本文探討了常見的耐藥基因及宮頸癌進展的相關(guān)性，MDR1基因是MDR發(fā)生的主要基因，其編碼一種細胞膜糖蛋即P-糖蛋白（P-glymprotein，PgP），利用細胞膜ATP泵與化療藥物結(jié)合并將藥物泵出細胞外，導(dǎo)致細胞內(nèi)藥物濃度降低，進而產(chǎn)生耐藥。張巖等[6]發(fā)現(xiàn)，P-gp蛋白陽性表達可能是導(dǎo)致宮頸癌患者化療失敗的原因之一，提示通過檢測治療前MDR1基因的表達，可預(yù)測患者的預(yù)后及化療效果。本研究還發(fā)現(xiàn)發(fā)現(xiàn)MDR1基因的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度及FIGO分期呈正相關(guān)，隨著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、分化程度越低、FIGO分期越高，其陽性表達越高。說明MDR1基因的表達除了與化療耐藥發(fā)生有關(guān)外，與宮頸的發(fā)生、發(fā)展、浸潤轉(zhuǎn)移也密切相關(guān)。因此，檢測MDR1的表達可以預(yù)測宮頸癌化療敏感性、協(xié)助臨床選擇化療方案，同時可推測宮頸癌浸潤、轉(zhuǎn)移程度，評估宮頸癌病情，具有一定的臨床意義。但MDR1高表達與宮頸癌進展、浸潤轉(zhuǎn)移的機制還需要進一步研究。

參考文獻：

[1]Justin O，Parkhurst，Madhulika Vulimiri，et al.Cervical cancer and the global health agenda：Insights from multiple policy-analysis frameworks[J].Global Public Health，2013，8（10）：1093-1108.

[2]Jemal A，Center M M，Desantis C，et al.Global patternsof cancer incidence and mortality rates and trends[J].Cancer Epidemiology Biomarkers&Prevention，2010，19（8）：1893-1907.

[3]Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al.Estimates of worldwideburden of cancer in 2008：GLOBOCAN 2008[J].Int JCancer，2010，127（12）：2 893-2 917.

[4]Murakami S.Molecular mechanism of multi-drug resistance[J].Nihon Rinsho，2008，66（1）：193-203.

[5]韓晶，騫愛榮，胡麗芳，等.基于免疫熒光圖像的微管蛋白半定量分析[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2009（24）：2901-2904.

[6]張巖，李寧.宮頸鱗癌組織中P-gP、LRP的表達及臨床意義[M].山東醫(yī)藥，2011，51（15）：1-3.編輯/哈濤