陳 華 （山東省畜牧獸醫(yī)信息中心 山東 濟南 250032）

陳 靜* 田夫林 王貴升 王苗利 孫圣福 馬慧玲 孔祥華 李玉杰 徐 鴻 藺曉月

（山東省動物疫病預(yù)防與控制中心 山東 濟南）

禽流感典型病毒粒子呈球形狀，直徑80～120nm，平均為100nm[1]。特別是某些毒株初次分離時，常呈絲狀，絲狀體長短不一，長者可達數(shù)微米，但經(jīng)雞胚和細胞培養(yǎng)物連續(xù)傳代后可變?yōu)榍蛐蝃2]。禽流感(Avian influenza, AI)是禽流行性感冒的簡稱，它是指由禽流感病毒引起的一種動物傳染病，常發(fā)生在禽，有時也發(fā)生在低等哺乳類動物，至今在人僅有偶發(fā)病例。其主要癥狀表現(xiàn)為從亞臨床感染到輕重度的呼吸道感染，產(chǎn)蛋下降甚至嚴重致死性疾病，其嚴重程度取決于病毒毒株以及被感染禽的種類，日齡和有無并發(fā)癥等因素。其中H5和H7:兩個血清型可以引起高致病性禽流感(HPAI)，以傳播快、發(fā)病快、死亡率高為特征，常可導(dǎo)致感染雞群的全軍覆沒，造成嚴重的經(jīng)濟損失，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類烈性傳染病，并被列入國際衛(wèi)生武器公約動物類傳染病名單[3]。中致病性的主要指H9N2和 H6N8亞型毒株，其他的毒株均為低的、非致病性的。禽流感病毒不僅會給養(yǎng)禽、畜牧業(yè)帶來災(zāi)難性的破壞，而且對公共健康也構(gòu)成了嚴重威脅。因此，禽流感的危害已引起世界各國普遍關(guān)注。尤其自1997年香港發(fā)生高致病性禽流感后，禽流感感染人不斷增多，我國內(nèi)地近來人群中也出現(xiàn)了禽流感病死病例，流行范圍不斷擴大，給全球的養(yǎng)禽業(yè)市場造成很大沖擊，同時給人類安全造成巨大威脅。

禽流感病毒是單股負鏈分節(jié)段的RNA病毒，屬于正黏病毒科(Orthomyxoviridae)。正黏病毒科有5個屬，即甲型流感病毒屬(Influenza virus A)、乙型流感病毒屬(Influenza virus B)、丙型流感病毒屬(Influenza virus C)、索戈托病毒屬(Thogoto virus)[4]和傳染性鮭魚貧血癥病毒屬(Isa-virus)[5]。根據(jù)其病毒核蛋白(NP)和基質(zhì)蛋白(mS)抗原性的不同，可分為A、B、C 3個血清型[6]。A型流感病毒根據(jù)其致病力的不同，分為高致病性病毒(HPAIV)、中致病病毒(mPAIV)和低(或者不)致病病毒(LPAIV)3種[7]。禽流感分為非致病性、低致病性、高致病性禽流感三大類，前兩類發(fā)病癥狀較輕，對養(yǎng)禽業(yè)造成的影響相對較小，屬于溫和性禽流感，而高致病性禽流感一旦暴發(fā)，發(fā)病率和死亡率很高，給養(yǎng)禽業(yè)造成毀滅性打擊，同時危害人類生命安全[8]。本病主要為接觸傳染，水平傳播，其發(fā)病受季節(jié)的影響，但又不完全受季節(jié)的限制，熱冷應(yīng)激常常是誘發(fā)本病的重要因素[9]。

禽流感的臨床癥狀與病毒毒力、環(huán)境因素、并發(fā)感染有關(guān)，也與雞的品種、雞的年齡、雞的性別密切相關(guān)，因而其臨床表現(xiàn)是極不一致的[10]。雞群常突然發(fā)病。流行初期的急性病例可不出現(xiàn)任何癥狀而死亡。病雞表現(xiàn)精神沉郁，羽毛蓬亂，不愿走動；食欲減退或廢絕；眼瞼浮腫，冠、髯腫脹、青紫、出血、壞死；眼結(jié)膜充血，分泌物增多；鼻分泌物同時增多，常使病雞搖頭甩頸。病雞有不同程度的呼吸道癥狀，咳嗽、喇鼻，打噴嚏，有喘嗚音等。病雞出現(xiàn)或不出現(xiàn)下痢；下痢者，以黃綠色、綠色稀便為主，稀便中常常伴有似血樣桔紅色條塊物(常被誤認為球蟲)，尿酸鹽增多。病雞腿鱗青紫或呈紫色，有出血點；皮膚常有出血斑點。有的病雞出現(xiàn)似神經(jīng)癥狀的驚厥現(xiàn)象。產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋率明顯下降，蛋殼褪色，出現(xiàn)畸形蛋、軟皮蛋、砂殼蛋等，蛋殼表面膠質(zhì)層內(nèi)常出現(xiàn)大量干紅斑點，以薄殼蛋為主，極易破碎。

我國從2004年起，在全國開始對存欄的禽類進行強制免疫，是預(yù)防控制禽流感流行的重要舉措。在大面積集中免疫的情況下，由于候鳥和水禽在禽流感傳播中具有很重要的角色，而且病毒也不斷發(fā)生抗原飄移和抗原突變，其影響免疫的因素較多，免疫后抗體產(chǎn)生水平仍然需要進行監(jiān)測和分析，從而為以后的強制免疫工作和禽流感防治工作提供有益的參考。

1 材料和方法

1.1 試驗材料

1.1.1 主要試劑 雞紅細胞懸液；疫苗(國內(nèi)某企業(yè)生產(chǎn)的H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗)。

1.1.2 主要耗材及儀器 96孔“V”形微量反應(yīng)板、定量移液器(25μl)、滴頭、微型振蕩器、恒溫箱、離心機等。

1.2 試驗方法

1.2.1 H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗對肉鴨的免疫效果檢測 選擇1個規(guī)模化肉鴨養(yǎng)殖場，每場隨機挑選20只肉鴨，8日齡首免H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗，頸部皮下注射，0.3ml/只；27日齡二免該疫苗，頸部皮下注射，0.5ml/只。分別于首免之前、首免后14d及二免后14d，采集血清通過HI試驗進行H5亞型禽流感抗體檢測。

1.2.2 H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗對肉雞的免疫效果檢測 選擇1個規(guī)模化肉雞養(yǎng)殖場，每場隨機挑選20只肉雞，8日齡首免H5亞型禽流感(Re-4+Re-5)疫苗，頸部皮下注射，0.3ml/只；27日齡二免該疫苗，頸部皮下注射，0.5ml/只。分別于首免之前、首免后14d及二免后14d，采集血清通過HI實驗進行H5亞型禽流感抗體檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1 H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗對肉鴨的免疫效果檢測

表1 H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗對肉鴨的免疫效果 (%)

由表1可知，對于免疫之前沒有母源抗體的肉鴨，通過免疫H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗，在首免后14天鴨群均產(chǎn)生了針對Re-4和Re-5的抗體，二免后抗體水平明顯高于首免，但是免疫合格率都不高于70%，針對Re-4和Re-5的抗體平均效價均低于4log2，達不到農(nóng)業(yè)部的抗體保護要求。首免和二免后14d，肉鴨對Re-4和Re-5的免疫應(yīng)答反應(yīng)不一致，Re-4抗體水平明顯高于Re-5抗體水平，提示肉鴨對Re-4的免疫應(yīng)答反應(yīng)強于對Re-5的免疫應(yīng)答。

2.2 H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗對肉雞的免疫效果檢測

表2 H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)疫苗對肉雞的免疫效果 (%)

由表2可知，對于體內(nèi)存在較低母源抗體水平的肉雞，通過免疫H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗，在首免后14天雞群針對Re-4和Re-5的抗體水平均有所下降，但針對Re-4的抗體合格率卻由15%上升到40%，而針對Re-5的抗體合格率則由10%降為0。二免后抗體水平明顯高于首免，針對針對Re-4和Re-5的平均抗體水平分別達到了7.75log2和8.9log2，且每個個體的抗體效價均不低于4log2，免疫合格率均達到100%，均達到農(nóng)業(yè)部的抗體保護要求。研究表明低水平的母源抗體能夠影響H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗免疫后在短期內(nèi)(首免后14天)抗體水平的升高。二免后，整個雞群的抗體水平有較大提高，Re-4、Re-5的免疫抗體效價分別提高了5.45log2、8.65log2，免疫合格率可達到100%，表明H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗加強免疫后能夠在肉雞群產(chǎn)生很好的免疫保護，且雞群對Re-4的免疫應(yīng)答早于Re-5。

3 討論

（1）從免疫家禽的種類來看，雞的免疫效果最好，而鴨和鵝等水禽的免疫抗體水平較低。推測可能有兩方面的原因：一是山東省養(yǎng)雞的規(guī)?；潭群凸芾硭捷^高，免疫比較到位，而目前水禽養(yǎng)殖的規(guī)?；潭炔桓?，放牧或半放牧的飼養(yǎng)方式，免疫難度大，免疫效果難以保證；二是目前我國使用的禽流感疫苗的種毒主要是針對雞的防疫，沒有水禽專用疫苗，可能影響到在鴨和鵝等水禽中的免疫效果。（2）針對我國使用的禽流感疫苗可能影響到在鴨和鵝等水禽中的免疫效果這一推測，本研究選擇了商品肉鴨和商品肉雞進行同樣的免疫程序來比較二者的免疫抗體水平。試驗結(jié)果表明目前使用的H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗對肉雞的免疫保護效果顯著高于肉鴨。對于沒有母源抗體的肉鴨，加強免疫H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗后，雖然抗體水平明顯高于首免，但是個體免疫合格率都不高于70%，針對Re-4和Re-5的抗體平均效價均低于4log2，達不到農(nóng)業(yè)部的抗體保護要求，而肉雞加強免疫H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗后針對Re-4和Re-5的抗體水平均達到8log2左右，免疫合格率均達到100%。（3）通過抗體檢測也可以發(fā)現(xiàn)，首免和二免后14d，肉鴨體內(nèi)產(chǎn)生的針對Re-4的抗體水平明顯高于Re-5抗體水平，表明肉鴨對Re-4的免疫應(yīng)答反應(yīng)明顯強于對Re-5的免疫應(yīng)答。同時，首免14d后，雖然肉雞體內(nèi)的針對Re-4和Re-5的抗體平均效價均略低于免疫前，但針對Re-4的抗體合格率卻由15%上升到40%，而針對Re-5的抗體合格率則由10%降為0，表明雞群對Re-4的免疫應(yīng)答早于Re-5。（4）研究表明，研制針對不同家禽專用的H5亞型禽流感疫苗已經(jīng)成為解決生產(chǎn)中提高水禽流感抗體合格率的迫切需求。

4 結(jié)論

（1）使用H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗免疫雞、鴨、鵝等不同家禽，對雞的免疫抗體合格率明顯高于鴨、鵝等水禽的免疫抗體合格率。（2）加強免疫H5亞型禽流感(Re-4+Re-5株)滅活疫苗可使雞群達到100%免疫抗體合格率，但鴨群的免疫抗體合格率不理想。

[l]Elster C, Larsen K, GagnoJ, et a1.Influenza virus m 1 Protein binds to RNA through its nuclear localization signal[J].J chen viml, 1997, (78): 1589-1596.

[2]Baker AT, Varghese JN, Laver WG, et al.Three dimensional structure of neuraminidase of subtype N9 from an avian influenza virus[J].Roteins, 1987, 2(2): 111-117.