雷 斌，李 碧

（1.湖南省資興市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南資興 423401；2.湖南省資興市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南資興 423402）

糖化血紅蛋白的檢測(cè)意義及常用方法比較

雷 斌1，李 碧2

（1.湖南省資興市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南資興 423401；2.湖南省資興市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖南資興 423402）

目的使用國(guó)產(chǎn)設(shè)備、試劑及配套的校準(zhǔn)系統(tǒng)對(duì)糖化血紅蛋白檢測(cè)的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，比較生化免疫比濁法和陽(yáng)離子交換色譜法在糖化血紅蛋白檢測(cè)中的意義。方法分別使用生化分析儀和糖化血紅蛋白儀檢測(cè)糖化血紅蛋白，并進(jìn)行比較。結(jié)果檢測(cè)結(jié)果均值與靶值的差異度及變異系數(shù)均小于5%。結(jié)論使用國(guó)產(chǎn)設(shè)備和試劑檢測(cè)糖化血紅蛋白符合實(shí)驗(yàn)室要求，并能滿足臨床需要，此外液相層析法的準(zhǔn)確性和線性范圍略高于生化免疫比濁法。

糖化血紅蛋白； 生化免疫比濁法； 液相層析法； 溯源性； 標(biāo)準(zhǔn)化

2010年中日友好醫(yī)院楊文英教授組織的全國(guó)糖尿病流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)國(guó)內(nèi)20歲以上成年人糖尿病患病率達(dá)9.7%，其中60.0%未得到診斷，糖尿病前期患病率高達(dá)15.0%［1］。2010年國(guó)內(nèi)糖尿病患者官方數(shù)據(jù)為9 260萬(wàn)，因此及時(shí)診斷和發(fā)現(xiàn)糖尿病，延緩和控制糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生，對(duì)維護(hù)人民的身體健康有著重要的意義。檢測(cè)和診斷糖尿病的檢測(cè)方法已日漸成熟，國(guó)際糖尿病協(xié)會(huì)也早已公布較為完善的診斷標(biāo)準(zhǔn)。世界衛(wèi)生組織（WHO）已明確糖化血紅蛋白（Hb A1c）≥48 mmol/mol（6.5%）診斷為糖尿病。糖耐量試驗(yàn)（OGTT）是國(guó)際公認(rèn)的確診糖尿病金標(biāo)準(zhǔn)，但由于OGTT檢測(cè)程序復(fù)雜、成本高、血糖變異度大等原因造成其在診斷糖尿病過(guò)程中受到制約。因?yàn)檠旱钠咸烟菧y(cè)定，只代表采樣時(shí)的血糖水平，其體內(nèi)控制依賴于基礎(chǔ)胰島素的分泌和肝臟適當(dāng)?shù)囊葝u素敏感性以控制肝糖的生成和輸出，還受各種因素如飲食、分析方法及采用的儀器溯源性、藥物及其他疾病的影響，此外患者采取了限制飲食或加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)的自我治療措施使高血糖得到適當(dāng)?shù)母纳疲虼搜菧y(cè)定并不能完全正確的評(píng)價(jià)疾病控制程度和療效。而Hb A1c的檢測(cè)不要求患者空腹，日間變異小于2.0%，受干擾因素小，結(jié)果更可靠、直觀，是評(píng)價(jià)糖尿病患者長(zhǎng)期血糖水平控制的金標(biāo)準(zhǔn)［2］。Hb A1c與糖尿病并發(fā)癥，尤其是微血管病變具有高度的相關(guān)性，也是WHO推薦的糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)［3］。近年來(lái)，隨著國(guó)內(nèi)Hb A1c的檢測(cè)更加規(guī)化范，其越來(lái)越受到臨床醫(yī)生的重視。目前檢測(cè)Hb A1c常用方法有液相層析法（親和層析、陽(yáng)離子交換色譜法）、即時(shí)檢測(cè)法（POCT）及免疫化學(xué)法。POCT法快速、簡(jiǎn)單但重復(fù)性和準(zhǔn)確性存有局限性，免疫化學(xué)法和液相層析法技術(shù)簡(jiǎn)單，自動(dòng)化程度高，重復(fù)性準(zhǔn)確性較高。本研究對(duì)免疫化學(xué)法和陽(yáng)離子交換色譜法進(jìn)行比較，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試劑 深圳邁瑞800生化分析儀，使用寧波美康生物科技有限公司生產(chǎn)的試劑及校準(zhǔn)物（批號(hào)20111111）。上海惠中醫(yī)療科技有限公司生產(chǎn)的MQ－2000 Hb A1c分析儀，使用上海華臣生物有限公司的試劑及校準(zhǔn)物（批號(hào)HBA1C11445）。第三方質(zhì)控物:Bio－Rad質(zhì)控，2個(gè)水平濃度。

1.2 方法

1.2.1 生化免疫比濁法 采用十四基三甲銨溴化合物（TTAB）作為溶血?jiǎng)辜t細(xì)胞溶血，加入抗Hb A1c抗體緩沖液與Hb A1c反應(yīng)形成可溶性抗原抗體復(fù)合物，然后加入多聚半抗原緩沖液，與過(guò)剩的抗Hb A1c抗體結(jié)合，生成不溶性的抗體多聚半抗原復(fù)合物，比濁進(jìn)行測(cè)定。

1.2.2 陽(yáng)離子交換色譜法 在選定低濃度條件下洗脫，Hb A1c首先被洗脫；再用高濃度洗脫液洗出非Hb A1c，得到相應(yīng)的血紅蛋白層析譜，其坐標(biāo)是時(shí)間，縱坐標(biāo)是百分比。Hb A1c值以色譜圖中的Hb A1c峰面積占全血紅蛋白面積的百分率來(lái)表示。

1.2.3 質(zhì)量控制 選取第三方質(zhì)控物Bio－Rad 2個(gè)水平濃度，水平1:Level1－38411，示值5.42，水平2:Level2－38412，示值9.28。批號(hào)38410，在有效期內(nèi)使用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示。

2 結(jié) 果

2.1 2種方法2個(gè)濃度水平的測(cè)定結(jié)果比較 2011年美國(guó)生化科學(xué)院在糖尿病診斷和管理中的應(yīng)用于建議中指出:測(cè)定Hb A1c的室內(nèi)變異小于2.0%，室間變異小于3.5%，并至少需要做2個(gè)水平的質(zhì)控物。本研究結(jié)果顯示2種方法均值與靶值的差異度及變異系數(shù)（CV）均小于5%，可見(jiàn)生化免疫法和陽(yáng)離子交換法的精密度、準(zhǔn)確性均可以接受，并具有一定的可比性，但離美國(guó)生化科學(xué)院的規(guī)定以及進(jìn)口設(shè)備和試劑還有差距，本次實(shí)驗(yàn)使用的生化免疫法試劑在測(cè)定高值時(shí)，結(jié)果略有偏低，線性范圍偏窄。見(jiàn)表1。

2.2 2008年上海地區(qū)Hb A1c間質(zhì)評(píng)結(jié)果匯總 上海地區(qū)開(kāi)展Hb A1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)室間CV較高，見(jiàn)表2。

3 討 論

Hb A1c的測(cè)定結(jié)果是以百分率來(lái)表示，指的是葡萄糖結(jié)合的血紅蛋白（Hb）占全部Hb的比例，健康成年人的Hb A1c水平平均約為（4%～6%），不同方法參考范圍略有差異。臨床研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病患者將Hb A1c控制在8%以內(nèi)，糖尿病患者并發(fā)癥將大大降低，如果糖尿病患者體內(nèi)的Hb A1c長(zhǎng)期大于9%，反映患者持續(xù)性高血糖，患者體內(nèi)的紅細(xì)胞攜氧能力下降，致使周圍組織缺氧，導(dǎo)致糖尿病性腎病、動(dòng)脈硬化、白內(nèi)障、足部炎癥等并發(fā)癥高發(fā)。

紅細(xì)胞中的血紅蛋白的Hb A1占97.0%，Hb A2為2.5%，HbF占0.5%。其中Hb A1又可分為Hb A1a1、Hb A1a2、Hb A1b和Hb A1C，其中Hb A1c具有重要的臨床意義，反映的是檢測(cè)前120 d內(nèi)的平均血糖水平。

西雙說(shuō)，那簡(jiǎn)單，現(xiàn)在就可以還你。他將手里的借條折一下，再折一下，然后展開(kāi)，問(wèn)羅衫，是不是三等分？羅衫莫名其妙地看著他，搞不懂他接下來(lái)會(huì)有什么名堂。西雙嗤地從借條上撕下一綹，彈一下，甩給羅衫，說(shuō)，三萬(wàn)塊錢(qián)的三分之一，正好一萬(wàn)，還你。

由于國(guó)內(nèi)對(duì)于Hb A1c測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化工作起步較晚，目前仍處于初級(jí)階段。并且由于不同的Hb A1c測(cè)定方法，可得到不同的測(cè)定值。2007年由美國(guó)糖尿病組織、歐洲糖尿病研究學(xué)會(huì)、國(guó)際糖尿病聯(lián)盟和國(guó)際臨床化學(xué)實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)盟（IFCC）等學(xué)術(shù)組織達(dá)成共識(shí)確認(rèn)Hb A1c結(jié)果應(yīng)用IFCC單位（mmol/mol），IFCC決心對(duì)Hb A1c的檢測(cè)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，于1996年創(chuàng)建了國(guó)際Hb A1c標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃（NGSP），其宗旨非常明確，即標(biāo)準(zhǔn)化Hb A1c檢測(cè)，使測(cè)定結(jié)果具有可比性。為此，NGSP組建了以指導(dǎo)委員會(huì)為核心的參考實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)［4］。同時(shí)推薦將IFCC參考物質(zhì)（IFCC－RM）應(yīng)用于參考實(shí)驗(yàn)室［5］。2011年美國(guó)生化科學(xué)院發(fā)布實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)在糖尿病診斷和管理中的應(yīng)用與建議中指出:測(cè)定Hb A1c的室內(nèi)變異小于2.0%，室間變異小于3.5%，并至少需要做2個(gè)水平的質(zhì)控物［6］。

從檢測(cè)原理及相關(guān)資料分析證明免疫法用的是抗原抗體結(jié)合方式，抗體能特異性識(shí)別鏈糖基化多肽，避免電荷數(shù)改變引起的干擾，缺點(diǎn)是當(dāng)存在含有結(jié)構(gòu)改變的Hb或紅細(xì)胞生存周期異常情況時(shí)不可避免會(huì)受到影響。而陽(yáng)離子交換色譜法精密度及線性略高于免疫法，缺點(diǎn)是不能把胎兒型血紅蛋白（HbF）從Hb A1c分離出來(lái)，當(dāng)含有Hb F會(huì)使Hb A1c值偏高，以及含有一些稀有異?；蜃兎NHb皆會(huì)造成干擾測(cè)定。

從表1數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析來(lái)看，本實(shí)驗(yàn)的均值與靶值差異度以及CV值均小于5%，生化免疫法和陽(yáng)離子交換法的精密度、準(zhǔn)確性均可以接受，并具有一定的可比性，但離美國(guó)生化科學(xué)院的規(guī)定及進(jìn)口設(shè)備和試劑還有差距，本次實(shí)驗(yàn)使用的生化免疫法試劑在測(cè)定高值時(shí)，結(jié)果略有偏低，線性范圍偏窄。從表2數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析來(lái)看，上海地區(qū)開(kāi)展Hb A1c實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)室間CV較高，各實(shí)驗(yàn)室采用的Hb A1c檢測(cè)系統(tǒng)包括設(shè)備、試劑、檢測(cè)原理等方面有差異，結(jié)果可比性不夠理想。

由于檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)方法的不同，以及異常Hb導(dǎo)致Hb A1c值的假性升高或降低［7］。因此許多醫(yī)生和患者在拿著不同實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果時(shí)比較困惑。為此，國(guó)家臨床檢驗(yàn)中心從2007年起做了大量具體工作，主要工作有:（1）根據(jù)IFCC推薦的人血液Hb A1c參考測(cè)量程序建立了Hb A1c液相－質(zhì)譜－質(zhì)譜候選參考測(cè)定方法，參考方法的主要作用是保證定值。（2）按照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織（ISO）Guide35并參照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和“一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范”［8］的要求制備了人血基質(zhì)Hb A1c，于2010年獲得國(guó)家一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)。

2012年7月4日，“Hb A1c一級(jí)參考實(shí)驗(yàn)室”在上海市臨床檢驗(yàn)中心暨臨床檢驗(yàn)質(zhì)量控制中心建成，標(biāo)志著國(guó)內(nèi)的糖尿病檢測(cè)將有可依循的最高標(biāo)準(zhǔn)，也意味著國(guó)內(nèi)的糖尿病檢測(cè)將可依循最高標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)量管理。因此所在實(shí)驗(yàn)室也可溯源到IFCC或NGSP認(rèn)可的檢測(cè)系統(tǒng)，包括檢測(cè)的儀器、試劑和校準(zhǔn)方法。隨著國(guó)內(nèi)廠家的研發(fā)水平不斷提高，使用國(guó)產(chǎn)的Hb A1c檢測(cè)設(shè)備和檢測(cè)試劑也能滿足臨床需要。總之，加強(qiáng)各實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)Hb A1c一致化、標(biāo)準(zhǔn)化的建設(shè)，提高各實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果可比性，從而正確無(wú)誤地動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)和治療患者的血糖水平刻不容緩。

［1］Yang WY，Lu JM，Weng JP，et al.Prevalence of diabetes among men and women in China［J］.N Engl J Med，2010，362（12）:1090－1101.

［2］王東環(huán)，陳文祥.應(yīng)注重糖化血紅蛋白在糖尿病診療中的臨床價(jià)值［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（6）:493－496.

［3］Word Health Organization.User of glycated haemoglobin （Hb A1c）in the diagnosis of diabetes mellitus:abbreviated report of a WHO consultation［S］.Geneva:WHO，2011:1－25.

［4］American Diabetes Association.Position statement:tests of glycemia in diabetes［J］.Diabetes Care，1998，21（1）:69－71.

［5］田亞平.糖化血紅蛋白的標(biāo)準(zhǔn)化及臨床應(yīng)用中值得關(guān)注的問(wèn)題［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（6）:481－483.

［6］宋智心，徐國(guó)賓，馬懷安，等.糖化血紅蛋白的標(biāo)準(zhǔn)化現(xiàn)狀［J］.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2012，35（6）:497－500.

［7］Bry LD.Effects of hemoglobin variants and chemically modified derivatives on assays for glycohemoglobin［J］.Clin Chem，2001，47 （2）:153－163.

［8］國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局.JJF 1006－94一級(jí)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)規(guī)范［S］.北京:國(guó)家技術(shù)監(jiān)督局，1994.

10.3969/j.issn.1673－4130.2015.10.065

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