王冬艷，華 欣，葉記林，李 芹，江秀玲

(1．揚州職業(yè)大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2．江蘇省蘇北人民醫(yī)院，江蘇揚州 225009)

血脂異常是一類較常見的代謝紊亂疾病，是導(dǎo)致動脈粥樣硬化的重要因素之一，是冠心病和缺血性腦卒中的獨立危險因素，且近年來有年輕化和加重的趨勢。因此，有效調(diào)節(jié)血脂異常是預(yù)防心腦血管疾病的重要手段，目前應(yīng)用于臨床的血脂調(diào)節(jié)類西藥有較好的療效，但因其副作用或會引起藥源性疾病而無法完成療程，因此，在血脂調(diào)節(jié)藥物中中藥的調(diào)節(jié)作用越來越受到重視，尤其是在預(yù)防血脂異常方面有著西藥不可比擬的優(yōu)勢［1]，一些中藥在傳統(tǒng)的作用基礎(chǔ)上亦具備降血脂作用［2]，或者同時兼?zhèn)湔{(diào)節(jié)血脂和血糖作用［3]。

白首烏為蘿摩科植物，味甘、苦，性微溫，具有滋補(bǔ)肝腎、益精血、抗衰老、烏須發(fā)等功效，現(xiàn)代藥理實驗研究證明，白首烏具有防瘤抗瘤、抗衰老、增強(qiáng)免疫功能及保護(hù)肝臟等功能。近年有實驗表明白首烏具有降血脂作用［4]，而C21甾體苷為白首烏中主要有效成分［5]，本實驗建立了大鼠高脂模型，觀察C21甾體苷對高脂模型大鼠血脂的影響，為進(jìn)一步的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1 實驗材料

1．1 實驗動物 健康SPF級SD雄性大鼠50只，體重(200±20)g，上海市西普爾—必凱實驗動物有限公司，生產(chǎn)許可證號:SCKK(滬)2008－0016。

1．2 藥品與試劑 白首烏C21甾體苷:取濱海產(chǎn)白首烏粗粉用95%乙醇提取，提取物用水溶解后，用適當(dāng)溶劑(正丁醇等)萃取，萃取液減壓回收溶劑得萃取物，萃取物稀釋后上大孔樹脂柱(HP-20)進(jìn)行層析，用適當(dāng)溶劑洗脫，收集洗脫液，精制得C21甾體總苷部位，含量在50%以上;阿托伐他汀鈣片(美國輝瑞科研制藥);血清總膽固醇(TC)測定試劑盒、甘油三酯(TG)測定試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測定試劑盒 、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測定試劑均由盒南京建成生物工程研究所提供;其它試劑均為國產(chǎn)分析純。

1．3 儀器 LABCONCO超純水機(jī):上海和杰科技控股有限公司;AIR-TECH超凈工作臺:蘇州凈化集團(tuán)安泰公司;醫(yī)用解剖器械:蘇州醫(yī)療器械廠;BP11OS電子秤:德國SARTORIUS公司;AU600全自動生化分析儀(OLYMPUS)。

2 方法

2．1 飼料 基礎(chǔ)飼料由揚州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)實驗中心提供。高脂飼料參照文獻(xiàn)方法［6]配制，組成:79%基礎(chǔ)飼料，10%豬油，10%蛋黃粉，1%膽固醇。

2．2 實驗性高脂血癥大鼠模型的建立和給藥 雄性SD大鼠50只，自由進(jìn)食和飲水，隨機(jī)分為正常對照組(10只)和模型組(40只)。動物在適應(yīng)性喂養(yǎng)1周之后，禁食(不禁水)12 h后眼眶靜脈叢采血，分離血清后用生化分析儀檢測血脂4項，即總膽固醇(TC)，甘油三酯(TG)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)。正常對照組自由采食基礎(chǔ)飼料;模型組自由采食高脂飼料，連續(xù)喂養(yǎng)8周。第56天禁食不禁水，12 h后眼眶靜脈叢采血，分離血清后用生化分析儀檢測血脂4項，以確定高脂模型是否成功。將成模的高脂血癥大鼠40只，隨機(jī)分為模型對照組、白首烏C21甾體苷低劑量組20 mg·kg－1、白首烏C21甾體苷高劑量組40 mg·kg－1、陽性對照組阿托伐他汀鈣10 mg·kg－1，每組10只。每日給藥1次，連續(xù)給藥2周。高脂模型成功后，正常對照組同時給予生理鹽水4 mL灌胃。

2．3 樣品采集及血脂檢測 動物飼養(yǎng)期間每天給予足量的新鮮飼料及飲水，更換墊料。并對大鼠的行為表現(xiàn)、身體狀況、尿量和大便情況等進(jìn)行觀察;于實驗結(jié)束最后一天晚上大鼠禁食不禁水12 h，然后摘眼球取血，于4℃、3 000 r·min－1離心機(jī)內(nèi)離心10 min，制備血清，－20℃凍存?zhèn)溆谩＠萌詣由治鰞x采用氧化酶法對大鼠血清TC、TG、LDL-C和HDL-C進(jìn)行測定，具體步驟按試劑盒說明進(jìn)行。大鼠放血后處死并迅速打開腹腔摘取肝臟，生理鹽水洗凈，濾紙擦干后稱量肝臟質(zhì)量，用于計算肝臟系數(shù)，肝臟系數(shù)=肝臟濕質(zhì)量(mg)/體質(zhì)量(g)，稱重后將肝臟組織放入4℃生理鹽水中潤洗干凈。然后在肝臟最大葉距邊緣5 mm處取小塊肝組織，進(jìn)行臟病理切片檢查。

2．4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS19．0軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)處理用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較采用單因素方差分析，多組間兩兩比較采用LSD-t檢驗的方法，以P＜0．05具有顯著性差異。

3 結(jié)果

3．1 大鼠的一般狀況 實驗前SD大鼠的體質(zhì)量較均衡，組間比較無差異。實驗中模型組大鼠的體質(zhì)量增加大于對照組，但比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，實驗結(jié)束后各組大鼠體質(zhì)量比較見表1，各用藥組大鼠的體質(zhì)量增重量小于模型組，與模型組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0．01)。肝臟系數(shù)可反映肝臟受損傷程度，模型組大鼠的肝臟系數(shù)與正常對照組相比，有極顯著性差異(P＜0．01)。陽性對照組、白首烏C21甾體苷低劑量組和高劑量組和均可顯著降低肝臟系數(shù)，差異具有顯著性(P＜0．01)，對大鼠體質(zhì)量和肝臟系數(shù)的影響結(jié)果具體見表1。

3．2 對大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用 對高脂大鼠血脂的影響中，模型組與正常組對照組相比，大鼠血清中TC、TG和LDL-C含量極顯著升高，HDL-C顯著性降低差異具有顯著性(P＜0．01)，表明大鼠高脂血癥模型造模成功。在對TC含量的影響中，與正常組相比，高脂血癥的大鼠的TC含量顯著增高，各用藥組與模型組比較含量有所降低，具有顯著性差異(P＜0．01);在對TG含量的影響中，各用藥組較高脂模型組比較均能降低TG含量，白首烏C21甾體苷低、高劑量組和陽性對照組與模型組相比差異具有顯著性(P＜0．05);對大鼠LDL-C含量影響中白首烏C21甾體苷高劑量組和陽性對照組較高脂模型組能顯著降低LDL-C含量，陽性對照組降低更明顯，差異具有顯著性(P＜0．01);對大鼠HDL-C含量影響中白首烏C21甾體苷高劑量組較模型組能明顯提高HDL-C含量，差異具有顯著性(P＜0．01)，具體見表2。

表1 對大鼠體質(zhì)量和肝臟系數(shù)的影響

表2 各組大鼠血脂情況的比較

3．3 對大鼠肝臟形態(tài)學(xué)影響 在對大鼠病理切片進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察中，模型組大鼠與正常對照組大鼠比較，肝小葉結(jié)構(gòu)不正常，可見肝小葉邊界模糊不清，肝索排列疏松結(jié)構(gòu)紊亂，有一部分細(xì)胞發(fā)生脂肪變性，可見肝細(xì)胞胞漿內(nèi)有許多大小不一的空泡;陽性對照組的肝臟病理切片顯示肝索排列比高脂模型組整齊，但肝小葉結(jié)構(gòu)仍然模糊不清，一部分肝細(xì)胞出現(xiàn)濁腫，可見個別脂肪變性空洞;白首烏C21甾體苷低劑量組的大鼠肝臟病理切片中，肝小葉結(jié)構(gòu)比高脂模型組清晰，肝細(xì)胞的索狀排列較為整齊，但大部分肝細(xì)胞濁腫;白首烏C21甾體苷高劑量組的肝小葉結(jié)構(gòu)輕微模糊，肝索排列比較整齊，肝細(xì)胞形態(tài)基本正常，小部分細(xì)胞出現(xiàn)濁腫、脂滴。病理切片具體見圖1。

4 討論

血脂是人體中重要的物質(zhì)，有許多重要的功能，但是，如果血脂超過一定范圍就會形成高脂血癥。因為脂質(zhì)不溶或微溶于水是以脂蛋白形式存在，因此，高血脂常為高脂蛋白血癥，包括總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)和(或)低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)增高和(或)高密度脂蛋白膽固醇(HDLC)降低。大部分高血脂患者雖然本身癥狀并不明顯，但血中過多的脂類物質(zhì)會逐漸滯留于動脈的血管壁上，久之，能使動脈血管壁增厚、變硬，最終會導(dǎo)致冠心病和腦卒中等動脈粥樣硬化性疾病。因此高血脂是心腦血管疾病的主要危險因素之一，與冠心病、腦卒中、心肌梗死等有密切聯(lián)系［7]。隨著生活水平的提高和生活習(xí)慣的改變，繼發(fā)性高脂血癥的發(fā)病率也明顯增加。因此，規(guī)范地調(diào)節(jié)血脂治療對于心腦血管病的預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。

目前在臨床上常用的治療高血脂癥的藥物中，西藥一般采用他汀類、膽汁酸結(jié)合樹脂類等，有一定的不良反應(yīng)或會引起藥源性疾病以至于無法完成療程，促使越來越多的人將注意力放在天然藥物上，中藥來源的降血脂藥物的研究越來越受到重視，而近年來臨床研究證明，許多中藥治療高脂血癥都收到了較好的療效［8－10]。在此基礎(chǔ)上，充分發(fā)揮天然藥物在降血脂方面多靶點、多成分的特點，分離和提取降血脂作用確切，從而開發(fā)出療效更好、毒副作用更低新型藥物是調(diào)節(jié)血脂藥物發(fā)展的方向之一［11]。常用中藥白首烏為傳統(tǒng)補(bǔ)益類中藥蘿摩科植物，功效為補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，益精血，健脾消食，解毒療瘡，現(xiàn)常用的白首烏藥材的植物為耳葉牛皮消，主產(chǎn)于江蘇，為地產(chǎn)道地藥材，江蘇濱海廣為栽培?，F(xiàn)代實驗研究證實，白首烏有明顯的降低血清膽固醇的作用，其降脂作用與劑量呈正相［12];白首烏能通過減少代謝產(chǎn)物丙二醛的量來降低脂質(zhì)過氧化作用［13];藥理實驗也證實白首烏 C21甾體酯苷對小鼠急性四氯化碳肝損傷的保護(hù)作用［14]。

本實驗中對成模的高脂血癥大鼠進(jìn)行血脂調(diào)節(jié)和肝臟保護(hù)作用研究，與正常組相比，各高脂組大鼠血清中 TC、TG和 LDL-C含量極顯著升高，HDL-C顯著性降低。使用的陽性對照藥阿托伐他汀鈣是臨床常用調(diào)節(jié)血脂藥物，屬于羥甲戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，能有效地減少或阻斷體內(nèi)膽固醇的合成。與模型組比較，陽性對照組和白首烏C21甾體苷兩個劑量組均可降低TC;三個用藥組均可降低TG含量;對LDL-C含量的降低作用中，陽性對照組強(qiáng)于白首烏C21甾體苷兩個劑量組，但對HDL-C含量的調(diào)節(jié)上，白首烏C21甾體苷高劑量組比陽性對照組明顯。因此，白首烏C21甾體苷具有調(diào)節(jié)高脂血癥大鼠的血脂作用，雖然白首烏C21甾體苷在血脂的調(diào)節(jié)上降低低密度脂蛋白作用不及阿托伐他汀鈣，但血脂的調(diào)節(jié)作用中升高有益的高密度脂蛋白作用更明顯，具體機(jī)制有待進(jìn)一步研究。在對肝臟保護(hù)作用的衡量中，肝臟系數(shù)可反映肝臟受損傷程度，用藥組能明顯降低高脂血癥大鼠的肝臟系數(shù);陽性對照阿托伐他汀鈣組和白首烏C21甾體苷低、高劑量組均可顯著降低肝臟系數(shù)，其中白首烏組降低肝臟系數(shù)更為明顯，結(jié)合病理切片，表明白首烏C21甾體苷可減輕肝臟的損傷，這與白首烏補(bǔ)肝腎的功效一致，但對肝臟的具體保護(hù)機(jī)制，仍需進(jìn)一步研究。

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