歐陽貴平，謝香萍，李小花，劉石長，江萍

(贛州市南康區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗科,江西 贛州341400)

纖維蛋白原(Fg)是血漿中含量最多的一種凝血蛋白，其含量降低或功能異常均可致凝血功能障礙；作為一種與凝血相關(guān)的急性時相蛋白，在血栓性疾病的發(fā)生和發(fā)展中也有重要意義。近年來Fg定量已作為出血與血栓性疾病診治中最常用的檢查項目，因此對其測定的準確性也直接影響到臨床診斷和治療。目前，無論進口和國產(chǎn)全自動血凝儀對Fg測定多數(shù)都涵蓋 Clauss法和PT-der法兩種方法，本文就用Sysmex公司CA-1500全自動血凝儀Clauss法和PT-der法兩種方法測定Fg的結(jié)果進行比較分析，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 標本來源 收集本院2014年5月份門診及住院病人凝血功能檢查血漿255例，年齡2至69歲，男性150例，女性105例。

1.2 儀器 日本Sysmex公司CA-1500全自動血凝儀。

1.3 試劑 采用西門子公司生產(chǎn)的CA-1500全自動血凝儀配套試劑，PT-der法采用PT試劑盒，批號為：545546，ISI值為：0.96；Clauss法采用 Fg 測定試劑盒，批號為：538075，緩沖液批號為：547038。采用西門子公司生產(chǎn)的CA-1500全自動血凝儀配套凝血質(zhì)控品：Dade CI-Trol Coagulation Control Level 1， 批 號 為 ：528147；Dade CI-Trol Coagulation Control Level 2，批號為：548239B。以上試劑和質(zhì)控品均在有效期內(nèi)使用。

1.4 方法 臨床樣本采集空腹靜脈血 (所有樣本均無溶血、黃疸和脂血)1.8ml于真空抗凝管(含0.2m l 109mmol/L枸椽酸鈉抗凝劑)中,顛倒混勻,3000r/min離心10min，在2h內(nèi)同時用Clauss法和PT-der法測定Fg含量，CA-1500全自動血凝儀檢測臨床樣本時室內(nèi)質(zhì)控在控。依據(jù)Clauss法測定結(jié)果進行低值(Fg＜2.0g/L)、 中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)分組。

1.5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.5軟件進行統(tǒng)計學處理，計數(shù)資料用(x±s)表示，組間比較用t檢驗,P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1精密度 批內(nèi)精密度同時用兩種方法連續(xù)檢測質(zhì)控血漿Fg濃度20次，天間精密度同時用兩種方法連續(xù)檢測質(zhì)控血漿Fg濃度20d，計算平均值、標準差(s)和變異系數(shù)(CV)，結(jié)果見表 1。

2.2 兩種方法檢測結(jié)果一致性分析 同時用Clauss法和PT-der法檢測病人血漿Fg濃度,以Clauss法為標準,將結(jié)果分為低值(Fg＜2.0g/L)、中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)三組，PT-der法檢測結(jié)果與Clauss法結(jié)果進行配對t檢驗和相關(guān)回歸分析，F(xiàn)g 含量在低值(Fg＜2.0g/L)、 中值(Fg2.0~4.0g/L)、高值(Fg＞4.0g/L)時，Clauss法和 PT-der法測定 Fg 的結(jié)果都有顯著差異(P＜0.01)，顯示出PT-der法測定值明顯高于Clauss法測定值。結(jié)果見表2。

表1 Clauss法和PT-der法測定FIB的批內(nèi)和天間精密度比較(n=20)

表2 Clauss法和PT-der法測定病人血漿纖維蛋白原含量結(jié)果比較及相關(guān)分析

3 討論

Fg含量檢測原理和方法包括蛋白質(zhì)比色測定、濁度或光散射法測定、鹽析測定、免疫法測定抗原等[1]。Clauss法和PT-de法測定的Fg均屬于濁度或光散射法的一種，也是目前全自動血凝儀較普及的方法。Clauss法操作簡單、實用精確、結(jié)果可靠，被WHO和CLSI推薦為參考方法，但試劑成本較高。其原理是在被檢血漿中加入凝血酶，血漿即凝固，從國際標準品Fg參比血漿測定的標準曲線中獲得被檢血漿的Fg實際含量。凝血酶原導出法(PT-der法)是根據(jù)全自動血凝儀在測定凝血酶原時間(PT)的過程中，依據(jù)PT凝固曲線中光散射強度的改變程度，推導出Fg的濃度，因此不需要消耗試劑和消耗品，盡管該方法節(jié)約試劑、操作簡單、快速，但只能對纖維蛋白原含量作出大致估計，當Fg含量明顯異常時，不能準確判斷[2]。

精密度評價是方法學評價的基礎(chǔ)，本次研究用兩種方法對廠家質(zhì)控品進行批內(nèi)精密度、天間精密度進行分析，結(jié)果顯示Clauss法的批號528147的批內(nèi)CV值為2.46%、天間CV值為6.86%，批號548239B的批內(nèi)CV值為3.40%、天間CV值為6.25%；PT-der法批號528147的批內(nèi)CV值為3.98%、天間CV值 7.14%，批號 548239B的批內(nèi)CV值為5.00%、天間CV值7.51%,均在儀器允許的范圍 (批內(nèi)CV值<5%、總的CV值<10%)。CA-1500血凝儀PT-der法測定Fg結(jié)果精密度比Clauss法低,但在儀器的允許范圍之內(nèi)。

本實驗室使用兩種方法對255例不同濃度的臨床樣本進行檢測，并對檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析，Clauss法和PT-der法兩種方法測定三組Fg結(jié)果有顯著統(tǒng)計學差異 (P＜0.01)。在三組臨床樣本中,PT-der法測定Fg結(jié)果比Clauss法高,Fg濃度在中值(Fg2.0~4.0g/L)Clauss法與PT-der法測定結(jié)果相關(guān)系數(shù)(r值為0.8717)較高,在高值和低值的相關(guān)系數(shù)(r值分別為0.7943,0.6648)均較低,另外從本次試驗兩種方法測定的兩個批號質(zhì)控品的數(shù)據(jù)Clauss法測定548239B和528147的均值分別為2.06g/L和2.03g/L而PT-der法測定548239B和528147的均值分別為3.4g/L和2.76g/L，差異明顯。由于測定方法的原理不同，PT-der法測定結(jié)果受到很大的影響。目前，國內(nèi)外對PT-der法測定Fg方法可靠性研究主要有兩種觀點：一種是在Fg低值時與Clauss法結(jié)果無顯著差異，在高值時有顯著差異，PT-der法結(jié)果比Clauss法高[3-5]，另一種觀點認為PT-der法結(jié)果與 Clauss法結(jié)果差異顯著，PT-der法結(jié)果比Clauss法高,建議不使用PT-der法[6-8]。出現(xiàn)這種情況的原因可能與儀器、病人和試劑等因素有關(guān)[9,10]。綜上，本實驗室CA-1500血凝儀PT-der法不適合代替Clauss法測定血漿纖維蛋白原含量進行臨床篩查、診斷和治療。隨著自動化血凝儀的普及以及測定方法的規(guī)范化和標準化，保證檢驗結(jié)果的準確性和可靠性，實現(xiàn)實驗室數(shù)據(jù)互認，綜合其它作者報道的PT-der法測定Fg的評價，使用Clauss法淘汰PT-der法測的組成(包括病人的年齡)定 Fg是一種必然趨勢。在沒有條件用Clauss法而用PT-der法的測定血漿Fg濃度的實驗室應建立本實驗室的生物參考區(qū)間，并對PT-der法測定結(jié)果與Clauss法測定結(jié)果進行比對，了解其檢測性能，最大可能保證檢驗質(zhì)量。

[1]熊立凡,劉成玉.臨床檢驗基礎(chǔ)[M].第4版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2007:75-76.

[2]叢玉隆.血栓與止血試驗診斷的現(xiàn)狀及發(fā)展[J].中華檢驗醫(yī)學雜志,2001,24(1):5-7.

[3]張健媛,田明照,黃松音,等.全自動血凝儀二種纖維蛋白原測定方法的評價[J].中國醫(yī)藥導刊,2003,5(4):257-258.

[4]曾文坦,周宇丹,肖永輝.PT衍生的纖維蛋白濃度測定及臨床應用[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2011,29(3):265-266.

[5]徐承來,周彥,劉小林.ELITE PRO血凝儀2種測定纖維蛋白原方法的比較[J].重慶醫(yī)科大學學報,2012,37(9):814-816.

[6]周林華,馮倩,鄧德耀,等.凝血酶原時間衍算法測定纖維蛋白原的差異性分析[J].軍醫(yī)進修學院學報,2011,32(2):149-150.

[7]戴慶忠,孫昌君,秦素娟.某全自動血凝儀對兩種纖維蛋白原測定方法評價[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2012,33(2):211-212.

[8]李黎.兩種常用方法測定血漿纖維蛋白原的臨床評價[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2013,10(1):64-65.

[9]Lawrie AS,McDonald SJ,Purdy G,et al.Prothrombin time derived fibrinogen determinationon Sysmex CA-6000[J].J CLin Pathol,1998,51(6):462-466.

[10]袁慧茹.兩種纖維蛋白原測定方法比較 [J].中國誤診學雜志,2005,5(13):2472-2473.