胡軍紅，謝建紅，陸玲，謝素玉

(清遠(yuǎn)市省佛岡縣人民醫(yī)院，廣東 清遠(yuǎn)511600)

天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)是一種臨床常見的酶類測定項目，在臨床生化檢驗工作中我們經(jīng)常會遇到超出可測量范圍的酶類項目需要稀釋后才能測定出來。如何才能保證稀釋后測定的結(jié)果準(zhǔn)確可靠就需要我們對每個酶類檢測項目的臨床可報告范圍進(jìn)行驗證。本文就日立7600生化分析儀檢測AST的臨床可報告范圍進(jìn)行了一系列研究，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1 儀器與試劑 (1)儀器：日立7600全自動生化分析儀。(2)試劑：寧波美康A(chǔ)ST檢測試劑,校準(zhǔn)品為羅氏CFAS,質(zhì)控品為伯樂公司提供。試劑批號：20130821；校準(zhǔn)品批號：20130206；質(zhì)控品批號：27601,27602。

1.1 .2樣本的制備 收集本院患者AST低濃度和高濃度的新鮮血清標(biāo)本若干份,要求血清清亮，無溶血、無黃疸、無脂血。

1.2 方法

1.2 .1儀器維護(hù)及校準(zhǔn) 按照說明書進(jìn)行對儀器進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)，設(shè)置好試劑參數(shù)，用羅氏公司CFAS多項校準(zhǔn)品進(jìn)行校準(zhǔn)，室內(nèi)質(zhì)控在控后再檢測樣品。

1.2 .2樣品檢測 (1)最大稀釋度實驗樣品檢測：選取2個濃度稍微高于AST檢測范圍高限1000U/L的標(biāo)本，用0.9g/dl生理鹽水對這2個樣本分別進(jìn)行 2、4、8、32、64、128 倍稀釋。兩樣本分別測定 3次，取均值，計算稀釋回收率，稀釋回收率=(實測值均值／理論濃度值)×100%，以重復(fù)性CV值小于5%、回收率在90%～110%以內(nèi)為可接受，確定最大稀釋倍數(shù)。(2)功能靈敏度實驗樣品檢測 ：選取低濃度AST的樣本，用0.9g/dl生理鹽水對該樣本進(jìn)行不同倍數(shù)稀釋，使最大稀釋倍數(shù)濃度接近于0。在7600儀器上對不同倍數(shù)稀釋樣本連續(xù)測定20次，計算平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差及變異系數(shù)。查看各樣本的變異系數(shù)(CV%)，樣本的變異系數(shù)最接近20%所對應(yīng)的濃度即為功能靈敏度。(3)分析測量范圍樣品檢測：參考EP6-A文件，設(shè)定實驗重復(fù)性和線性允許誤差分別為5%和10%。收集低AST濃度和高AST濃度的新鮮患者血清標(biāo)本若干份，將濃度稍微超出廠家聲明的分析測量范圍上線1000U/L的高AST濃度樣本作為分析測量范圍試驗中的高值樣本(H),將低AST濃度標(biāo)本稀釋為濃度接近功能靈敏度后作為分析測量范圍試驗中的低值樣本(L)。將樣本H與樣本L按照 L，0.8L+0.2H，0.6L+0.4H，0.4L+0.6H，0.2L+0.8H，H的比例配制成6個系列活性濃度樣品，充分混勻，各樣品重復(fù)檢測2次。記錄檢測結(jié)果。應(yīng)用SPSSl9.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行重復(fù)性誤差和多項式回歸分析。將所得數(shù)據(jù)擬合為一次多項式模型Y=b0+b1X、二次多項式模型Y=b0+b1X+b2X2和三次多項式模型Y=b0+blX+b2X2+b3X3多項式。用t檢驗判斷擬合二次回歸多項式模型的非線性系數(shù)b2及三次回歸多項式模型的非線性系數(shù)b2和b3與0的差異是否具有統(tǒng)計學(xué)意義。如有則判斷為非線性，否則為線性。

1.2 .3臨床可報告范圍的建立 將功能靈敏度作為臨床可報告范圍的下限，將分析測量范圍的上限乘最大稀釋倍數(shù)作為臨床可報告范圍的上限。

2 結(jié)果

2.1 AST稀釋回收率實驗結(jié)果 濃度值為1 165U／L(標(biāo)本 1)，l 607 U ／L(標(biāo)本 2)的兩標(biāo)本稀釋后測定結(jié)果重復(fù)性CV%，稀釋倍數(shù)在1:128內(nèi)時，均在5%以內(nèi)，當(dāng)稀釋倍數(shù)延伸至1:128時，濃度值為1009U/L的標(biāo)本回收率超出90%～110%的實驗設(shè)定范圍，所以其最大稀釋倍數(shù)為64倍。檢測數(shù)據(jù)見表1。

表1 AST稀釋回收率結(jié)果(%)

2.2 功能靈敏度實驗結(jié)果 從表中數(shù)據(jù)可以看出樣本號3的CV值最接近20%，故本實驗室7600生化檢測系統(tǒng)檢測AST的功能靈敏度可確認(rèn)為2.9U／L。 見表 2。

表2 AST功能靈敏度試驗結(jié)果

2.3 分析測量范圍實驗結(jié)果 應(yīng)用CLSI的EP6-A文件對AST的分析測量范圍進(jìn)行驗證，6個系列濃度樣本AST的重復(fù)測定，每個濃度2次測量結(jié)果的重復(fù)測量誤差遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于設(shè)定的允許不精密度5%，重復(fù)測定誤差符合實驗要求。測定數(shù)據(jù)進(jìn)行多項式回歸分析，結(jié)果見表3。從表3可知二次多項式與三次多項式雖有較小的回歸標(biāo)準(zhǔn)誤，但在α=0.05水平時無有統(tǒng)計意義的顯著性系數(shù)(P>0.05,表次t=1.91,小于查表的2.262，三次t=1.64及t=-1.33小于查表的2.306)，所以AST為一次線性，線性方程為Y=209.21X-209.67。本次實驗證實AST檢測方法在3~1057.5U/L范圍成直線線性，由于低濃度AST不具有重要的臨床意義，本范圍涵蓋了廠家提供的0~1000U/L的線性范圍。

2.4 臨床可報告范圍實驗結(jié)果 根據(jù)稀釋回收率結(jié)果實驗結(jié)果確定AST的最大稀釋度為1：64，功能靈敏度為2.9U/L，分析測量范圍為3~1057.5U/L，所以本實驗室日立7600測定AST的臨床可報告范圍為2.9~67680U/L。

表3 AST多項式回歸分析結(jié)果

3 討論

ISO 15189醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則、CAP認(rèn)證標(biāo)準(zhǔn)以及CLIA’88都對醫(yī)學(xué)實驗室在引進(jìn)或改變檢測系統(tǒng)時需要進(jìn)行性能評價作出了規(guī)定[1],要求各實驗室定期對包括精密度、準(zhǔn)確度、分析測量范圍、臨床可報告范圍及參考區(qū)間在內(nèi)的檢測系統(tǒng)性能進(jìn)行評價[2]。

臨床可報告范圍 (clinical reportable range,CRR)是指對臨床、診斷有意義的待測物濃度范圍。此范圍如果超出了AMR(分析測量范圍)，可將樣本通過稀釋、濃縮等預(yù)處理使待測物濃度處于分析測量范圍內(nèi)，最后乘以稀釋或濃縮的倍數(shù)。AMR是指患者標(biāo)本不經(jīng)稀釋或濃縮等任何處理由檢驗方法或檢測系統(tǒng)得到可靠測量結(jié)果的范圍[3],AMR評價的方法主要有目測法,平均斜率法和CLSI評價方案[4],在本次AST的AMR驗證實驗中我們采用了CLSI的EP6-A[5]多項式回歸分析方法,從統(tǒng)計學(xué)理論得出各濃度點的最適多項式為一次多項式，AST在3~1057.5U/L范圍內(nèi)成一次線性，由于低濃度AST沒有重要的臨床意義，我們可以認(rèn)為AST濃度在0~1057.5U/L范圍內(nèi)成一次線性，這就涵蓋了廠家提供的0~1000的線性范圍。

在本次驗證AST的臨床可報告范圍實驗中由于在功能靈敏度實驗和分析測量范圍實驗都需對標(biāo)本進(jìn)行稀釋處理，所以在實驗設(shè)計時，我們先做了稀釋回收率實驗然后再做其他實驗，保證標(biāo)本的稀釋倍數(shù)在最大稀釋度范圍內(nèi)，以確保標(biāo)本稀釋后測定結(jié)果的準(zhǔn)確性[6，7]。通過最大稀釋度實驗，功能靈敏度實驗及分析測量范圍實驗結(jié)果我們確定了日立7600生化分析儀測定AST的最大稀釋度為1：64，臨床可報告范圍為2.9~67680U/L。

在我們的日常臨床檢驗工作中我們經(jīng)常會碰到高濃度的標(biāo)本需要我們稀釋后才能準(zhǔn)確測定，但高濃度標(biāo)本經(jīng)稀釋后由于基質(zhì)效應(yīng)或其他原因可能會對測定結(jié)果的準(zhǔn)確性造成影響，如何處理高濃度的標(biāo)本才能得到準(zhǔn)確的結(jié)果，如何保證稀釋程序的規(guī)范，這就要求我們對每個檢驗項目的臨床可報告范圍進(jìn)行驗證。

[1]U.S Department of Health and Human Services.Medicare,Medicaid and CLIA programs,Laboratory requirements relating to quality systems and certain personnel qualifications.Final rule[J].Federal Register,2003,68(16):3639-3714.

[2]畢波,呂元.定量檢測系統(tǒng)的方法學(xué)性能驗證實驗結(jié)果的評價[J].中華檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2007,30(12):1332-1335.

[3]楊有業(yè),張秀明.臨床檢驗方法學(xué)評價[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:168-195.

[4]鄭松柏,張秀明,莊俊華,等.化學(xué)發(fā)光免疫法檢測甲胎蛋白臨床可報告范圍的建立[J].中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2008,18(14):2069-2071.

[5]Clinical and Laboratory Standards Institute．Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures[S].EP6-A2.CLSI,2003．

[6]李俊立,彭長華,王昌富.BACKMAN LX20生化檢測系統(tǒng)ALT可報告范圍的評價[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學(xué)雜志,2010,25(6):71-73.

[7]陳斌鴻,羅恒,李煒煊,等.奧林巴斯AU5400全自動生化分析儀檢測尿素氮臨床可報告范圍的建立與評價 [J].實驗與檢驗醫(yī)學(xué),2011,29(2):117-120.