李玲華，袁少靜，劉杰，王敏，駱嵐，隋晨輝，朱濟(jì)英(山東大學(xué)第二附屬醫(yī)院，濟(jì)南500;山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院;蒙陰縣中醫(yī)院)

復(fù)方紅景天對2型糖尿病腎病大鼠尿微量白蛋白、血晚期氧化蛋白產(chǎn)物水平的影響

李玲華1，袁少靜2，劉杰3，王敏2，駱嵐2，隋晨輝2，朱濟(jì)英2
(1山東大學(xué)第二附屬醫(yī)院，濟(jì)南250031;2山東中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院;3蒙陰縣中醫(yī)院)

摘要:目的觀察復(fù)方紅景天喂食2型糖尿病腎病大鼠尿微量白蛋白(mALB)和血晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPPs)的變化，并探究其保護(hù)腎臟的作用機(jī)制。方法將SPF級8周齡雄性Wistar大鼠50只隨機(jī)分為正常對照組5只和模型組45只。將成功制作的43只糖尿病腎病模型再隨機(jī)分為模型對照組10只、小劑量紅景天組11只、中劑量紅景天組11只、大劑量紅景天組11只。小、中、大劑量紅景天組分別給予復(fù)方紅景天3、6、12 g/(kg·d )，模型對照組給予等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃4周。治療前后尾靜脈取血檢測FBG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、AOPPs 及12 h尿mALB水平，并觀察大鼠體質(zhì)量(BW)的變化。結(jié)果治療前，糖尿病腎病模型大鼠BW低于正常對照組，F(xiàn)PG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、mALB、AOPPs水平均高于正常對照組(P＜0.05或＜0.01)。治療4周后，小、中、大劑量紅景天組BW均高于模型對照組，F(xiàn)PG、AOPPs、mALB水平低于模型對照組(P均＜0.01)，小、中、大劑量紅景天組BW、AOPPs、mALB水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。結(jié)論復(fù)方紅景天可能通過降低T2DN大鼠尿mALB、血AOPPs水平，從而發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。

關(guān)鍵詞:糖尿病腎病;復(fù)方紅景天;尿微量白蛋白;晚期氧化蛋白產(chǎn)物;大鼠

糖尿病腎病是糖尿病最常見、最主要的慢性并發(fā)癥之一，也是導(dǎo)致終末期腎衰竭的主要原因之一。研究顯示，我國糖尿病患者中2型糖尿病腎病患病率達(dá)34.7%［1］，病程10年以上的糖尿病患者有50%并發(fā)腎病，新增終末期腎病患者中糖尿病腎病所占的比例逐年升高［2］。2011年7月～2014年7月，我們應(yīng)用中藥復(fù)方紅景天治療糖尿病腎病大鼠，觀察其對大鼠尿微量白蛋白(mALB)、血晚期氧化蛋白產(chǎn)物(AOPPs)水平的影響，并探討其發(fā)揮腎臟保護(hù)作用的機(jī)制。

1　材料與方法

1.1材料SPF級8周齡雄性Wistar大鼠50只，體質(zhì)量200～220 g，購自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心。鏈脲佐菌素(STZ)為美國Sigma公司生產(chǎn); AOPPs 的ELISA試劑盒為美國Invitrogen生命技術(shù)公司產(chǎn)品，購自北京奇松生物科技有限公司;日立7600系列全自動生化分析儀。復(fù)方紅景天組方主要為紅景天、黃芪，購自山東省中醫(yī)院藥劑科，將藥品制成散劑，水溶成為復(fù)方紅景天藥液。高糖高脂飲食由普通鼠飼料加蔗糖、煉豬油和蛋黃按比例加工制成，其比例為豬油18%、蔗糖20%、蛋黃3%、基礎(chǔ)飼料59%。

1.2建立動物模型將50只大鼠隨機(jī)分為正常對照組5只、模型組45只。正常對照組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，模型組給予高糖高脂飲食喂養(yǎng)。8周后，禁食12 h，模型組空腹?fàn)顟B(tài)下給予STZ 30 mg/kg左側(cè)腹腔快速注射，正常對照組注射等體積枸櫞酸鈉緩沖溶液。1周后，尾靜脈取血檢測空腹血糖(FPG)及空腹胰島素(FINS)，計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR) (HOMA-IR=FPG×FINS/22.5) ;模型組FBG≥7.0 mmol/L，且HOMA-IR高于對照組為糖尿病造模成功。糖尿病造模成功后，繼續(xù)飼養(yǎng)4周，檢測尿mALB ≥30 mg/L即為糖尿病腎病模型。模型組45只大鼠中，43只糖尿病腎病造模成功。

1.3治療方法將糖尿病腎病模型大鼠43只隨機(jī)分為模型對照組10只、小劑量紅景天組11只、中劑量紅景天組11只、大劑量紅景天組11只。小、中、大劑量紅景天組分別給予復(fù)方紅景天3、6、12 g/(kg ·d )灌胃，均為復(fù)方紅景天散劑量;模型對照組給予等體積生理鹽水灌胃，各組均治療4周。

1.4尿mALB、血AOPPs及相關(guān)指標(biāo)檢測復(fù)方紅景天治療前各組大鼠禁食12 h，測體質(zhì)量(BW)，尾靜脈取血測定FPG及FINS、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)和AOPPs，留取12 h尿液測定尿mALB。復(fù)方紅景天治療4周后，各組大鼠禁食12 h，再次測BW，尾靜脈取血測FPG、FINS、TG、TC、AOPPs，收集12 h尿液測mALB。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料用珋x±s表示，多組間比較采用方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1復(fù)方紅景天治療前正常對照組與糖尿病腎病模型組各指標(biāo)比較糖尿病腎病模型大鼠BW低于正常對照組，F(xiàn)PG、FINS、HOMR-IR、TG、TC、mALB、AOPPs水平均高于正常對照組(P＜0.05或＜0.01)。見表1。

表1　治療前正常對照組與糖尿病腎病模型組各指標(biāo)比較(±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.05，＊＊P＜0.01。

組別　n　BW(g)　FPG(mmol/L) FINS(mU/L)　HOMR-IR　TG (mmol/L) TC(mmol/L) mALB(mg/L) AOPPs(pmol/L)正常對照組　5　420.1±20.2　4.5±1.8　21.35±5.32　3.58±1.02　0.93±0.42　1.42±0.51　7.1±5.9　37.7±27.8模型組　43　320.6±33.7*　25.9±3.3＊＊28.70±6.29＊＊12.16±2.34＊＊3.16±1.29＊＊2.59±1.01＊＊101.9±17.8＊＊952.7±69.9＊＊

2.2復(fù)方紅景天治療后各組BW、FPG、尿mALB及血AOPPs水平比較復(fù)方紅景天治療4周后，糖尿病腎病模型大鼠最終存活35只(模型對照組9只、小劑量紅景天組9只、中劑量紅景天組9只、大劑量紅景天組8只)。小、中、大劑量紅景天組BW均高于模型對照組，F(xiàn)PG、AOPPs、mALB水平低于模型對照組(P均＜0.01)，小、中、大劑量紅景天組BW、AOPPs、mALB水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均＞0.05)。見表2。

3　討論

表2　復(fù)方紅景天治療4周后各組BW、FPG、尿mALB及血AOPPs水平比較(±s)

注:與模型對照組比較，*P＜0.01。

組別　n　BW(g)　FPG(mmol/L)　mALB(mg/L)　AOPPs(pmol/L)對照組460.3±55.5　4.5±1.8　7.1±5.9　37.7±27.8模型對照組　9　320.6±33.7　25.9±3.3　101.9±17.8　952.7±69.9小劑量紅景天組　9　475.5±79.5*　18.1±7.0*　33.2±12.4*　60.5±12.2*中劑量紅景天組　9　476.6±47.0*　19.5±7.4*　29.9±12.8*　73.4±15.0*大劑量紅景天組　8　441.4±43.0*　20.0±2.8*　40.9±11.7*　46.9±13.5 5 *

糖尿病腎病緣于消渴，屬“消渴病”范疇，根據(jù)其臨床表現(xiàn)的不同，可類屬于古代中醫(yī)的“虛勞”“水腫”“消渴”“癃閉”“關(guān)格”等。糖尿病腎病多與先天稟賦不足、素體陰虛，加之后天失養(yǎng)、飲食失節(jié)、勞欲過度、情志失調(diào)等因素有關(guān)。本病多在陰津虧虛、燥火熱盛的基礎(chǔ)上逐步發(fā)展而成，其病位主要在腎臟，涉及心、肝、脾、肺等臟腑，病機(jī)多為陰虛血熱、脾腎虧虛、瘀血阻滯。西醫(yī)認(rèn)為糖尿病腎病是以腎小球動脈硬化為主要病變的疾病，早期表現(xiàn)為尿mALB增加［3］。尿mALB是糖尿病腎病早期診療的敏感指標(biāo)［4，5］，是目前臨床應(yīng)用比較廣泛的篩查糖尿病腎病的指標(biāo)。有研究認(rèn)為，氧化應(yīng)激與糖尿病微血管病變有關(guān)［6］，糖尿病腎病患者體內(nèi)自由基清除系統(tǒng)明顯受損，機(jī)體產(chǎn)生大量氧自由基。AOPPs具有很強(qiáng)的促氧化及促炎癥作用，是蛋白質(zhì)被氧化的特異性標(biāo)志之一。

紅景天為景天科紅景天屬植物，性甘、苦、平，有益氣活血、通脈平喘的功效，可用于氣虛血瘀、胸痹心痛、中風(fēng)偏癱和倦怠氣喘等。有研究認(rèn)為，紅景天可降低實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的血糖，并具有劑量依賴性;同時(shí)紅景天提取液可明顯抑制大鼠腎小球基底膜增厚，對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟結(jié)構(gòu)病變具有保護(hù)作用［7］。趙文等［8］研究認(rèn)為，薔薇紅景天對糖尿病模型小鼠的胰腺具有保護(hù)作用。另有研究顯示，圣地紅景天可明顯降低大鼠尿蛋白排泄率及腎小球高濾過，延緩腎衰竭，對腎臟足細(xì)胞有保護(hù)作用［9］。

本研究應(yīng)用SLZ制作糖尿病腎病大鼠造模，使糖尿病腎病大鼠胰島細(xì)胞受損，其血液中FPG、FINS、TG、TC、AOPPs及尿mALB水平升高，BW明顯下降。給予復(fù)方紅景天治療后，大鼠胰島功能得到不同程度的恢復(fù)，與模型對照組比較，復(fù)方紅景天治療組血液中FPG、FINS、TG、TC、AOPPs及尿mALB水平均降低，BW升高。提示復(fù)方紅景天可降低糖尿病腎病大鼠尿蛋白，具有抗氧化及改善胰島細(xì)胞功能的作用［10，11］，佐證了復(fù)方紅景天對糖尿病腎病具有很好的臨床療效。本研究中小、中、大劑量紅景天組BW、血AOPPs、尿mALB水平盡管存在差異，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，此可能與樣本量較小及測量誤差有關(guān)。因此，未來有必要加大樣本量進(jìn)一步研究不同劑量復(fù)方紅景天對糖尿病腎病大鼠血AOPPs、尿mALB水平的影響。

綜上所述，復(fù)方紅景可降低糖尿病腎病大鼠血AOPPs、尿mALB水平，從而發(fā)揮腎臟保護(hù)作用。此為中醫(yī)藥治療糖尿病腎病提供了新的理論和實(shí)踐依據(jù)。

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Effects of compound rhodiola sachalinensis on microalbuminuria and advanced oxidation protein products of rats with type 2 diabetic nephropathy

LI Ling-huan1，YUAN Shao-jing，LIU Jie，WANG Min，LUO Lan，SUI Chen-hui，ZHU Ji-ying
(1 The Second Affiliated Hospital of Shandong University，Jinan 250031，China)

Abstract:ObjectiveTo observe the changes of microalbuminuria (mALB) and advanced oxidation protein products (AOPPs ) of rats with type 2 diabetic nephropathy (T2DN) by feeding compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjintian) and to investigate its mechanism of protecting the kidney.Methods Fifty male 8-week-old Wistar rats were randomly divided into the normal control group (A group，n=5) and model group (n=45).During the 45 rats，43 rat models with DN were successfully made.Then，they were randomly divided into the model control group (group B，n=10)，low dose compound rhodiola sachalinensis group (group C)，medium-dose compound rhodiola sachalinensis group (group D，n=11)，and high-dose compound rhodiola sachalinensis group (group E，n=11).Rats in the groups C，D and E were treated by 3，6 and 12 g/(kg·d) compound rhodiola sachalinensis and rats in the group B was treated by intragastric administration of the same amount of normal saline for 4 weeks.The FBG，F(xiàn)INS，HOMR-IR，TG，TC，AOPPs and 12-hour mALB level in the caudal vein of rats were detected before and after treatment and the body weight (BW) was also observed.Results Before treatment，the BW of group B was significantly lower than that of group A，but FPG，F(xiàn)INS，HOMR-IR，TG，TC，mALB and AOPPs level was higher than that of group A (P＜0.05 or P＜0.01).After treatment of 4 weeks，the BW of groups C，D and E was higher than that of group B，but FPG，AOPPs and mALB was lower than that of the group B (all P＜0.01).No statistical difference was found in FPG，AOPPs and mALB among groups C，D and E (all P＞0.05).Conclusion Compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjingtian) has the protective effect on kidney of T2DN rats by reducing the levels of mALB and AOPPs.

Key words:diabetic nephropathy; compound rhodiola sachalinensis (Fufang Hongjingtian) ; urinary microalbumin; advanced oxidation protein products; rats

(收稿日期:2014-02-12)

基金項(xiàng)目:山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011-109)。

文章編號:1002-266X(2015)21-0023-03

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

中圖分類號:R587.1; R-322

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.21.008