黃顯峰，馬香芹，張琨，盧澤愷，唐滋貴，胡新輝(河南醫(yī)學高等?？茖W校，鄭州451191)

替米沙坦與貝那普利對腎性高血壓大鼠左心室重構(gòu)及RAAS的影響

黃顯峰，馬香芹，張琨，盧澤愷，唐滋貴，胡新輝
(河南醫(yī)學高等專科學校，鄭州451191)

摘要:目的觀察替米沙坦與貝那普利對腎性高血壓大鼠左心室重構(gòu)及腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)(RAAS)、心鈉素(ANP)的影響。方法將40只健康雄性SD大鼠隨機分為4組各10只，A、B、C組建立兩腎一夾高血壓模型，造模后4周，B、C組分別給予替米沙坦、貝那普利1 mg/100 g灌胃，連續(xù)用藥16周; D組只分離左腎動脈而不結(jié)扎。各組于給藥16周后行超聲心動圖檢查，采用酶聯(lián)免疫法檢測血漿和心肌組織腎素活性(PRA)、血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)、醛固酮(ALD)、ANP，計算左心室重量指數(shù)(LVMI)。結(jié)果A組左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左心室射血分數(shù)和短軸縮短率均低于其他組，左心室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)、左心室舒張末期后壁厚度(LVPWD)、舒張末期室間隔厚度(IVSD)、LVMI均高于其他組，P均＜0.01;其他各組上述指標比較，P均＞0.05。各組血漿和心肌組織AngⅡ比較，B組＞A組＞D組、C組;各組血漿和心肌組織PRA比較，A組＞C組＞B、D組;各組血漿和心肌組織ALD、ANP比較，A組＞B、C、D組; P均＜0.05。結(jié)論替米沙坦與貝那普利通過不同途徑影響RAAS，均能有效改善腎性高血壓大鼠的左心室重構(gòu)。

關鍵詞:腎性高血壓;替米沙坦;貝那普利;左心室重構(gòu);腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)

長期高血壓會引起左心室重構(gòu)，出現(xiàn)心肌間質(zhì)纖維化、心室?guī)缀螛?gòu)型的改變等嚴重的心臟損害，而左心室重構(gòu)已被確認是高血壓患者發(fā)生心力衰竭、腦血管意外、腎功能損害等嚴重并發(fā)癥的獨立危險因素［1］。腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)(RAAS)激活，可引起血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)生成增加，從而加重高血壓和左心室重構(gòu)［2，3］。2012年3月～2012 年8月，我們觀察了替米沙坦和貝那普利對腎性高血壓大鼠左心室重構(gòu)及RAAS的影響，以期為臨床防治高血壓左心室重構(gòu)提供依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料健康雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量150～180 g，購自河南省實驗動物中心; XH100型清醒大鼠血壓測量裝置購于北京新航公司，GE vivid 7超聲診斷儀購于美國GE公司。大鼠心鈉素(ANP)、腎素活性(PRA)、AngⅡ醛固酮(ALD)、心鈉素(ANP)酶聯(lián)免疫試劑盒購于北京瑞格博公司;替米沙坦片購于天津華津制藥有限公司，鹽酸貝那普利片購于成都地奧制藥集團有限公司，均以蒸餾水配制成10 mg/L溶液。

1.2方法

1.2.1造模與分組處理將40只雄性SD大鼠適應性飼養(yǎng)10 d，隨機分成A組、B組、C組和D組各10只。4組均以6%水合氯醛腹腔注射麻醉，從腹部左側(cè)切口并分離左腎動脈。A、B、C均參照Weber等［4］的方法建立兩腎一夾高血壓模型，D組只分離左腎動脈而不結(jié)扎。造模后4周，B、C組分別給予替米沙坦、貝那普利1 mg/100 g灌胃，A、D組給予等量生理鹽水灌胃，連續(xù)用藥16周。

1.2.2收縮壓和左心室結(jié)構(gòu)檢查4組均于造模前、給藥前及給藥16周后，檢測收縮壓。并于給藥16周后，應用GE vivid 7超聲診斷儀行超聲心動圖檢查，測量左心室舒張末期內(nèi)徑(LVEDD)、左心室收縮末期內(nèi)徑(LVESD)、左心室舒張末期后壁厚度(LVPWD)、舒張末期室間隔厚度(IVSD)，測定5個連續(xù)心動周期后取均值。計算左心室射血分數(shù)(LVEF)和短軸縮短率(LVFS)。

1.2.3血漿PRA、AngⅡ、ALD、ANP檢測采用酶聯(lián)免疫法。6%水合氯醛腹腔注射麻醉后，腹主動脈取血2 mL。將檢測ALD的血液迅速注入放在冰水浴冷卻的抗凝管中，檢測ANP的血液迅速注入放在冷水浴冷卻的酶抑制劑抗凝管中。離心后取血漿，－25℃保存，嚴格按照酶聯(lián)免疫試劑盒說明書操作。

1.2.4左心室重量指數(shù)(LVMI)測算大鼠灌胃給藥第16周末，稱取體質(zhì)量(BW)后處死，迅速取出心臟，放入預冷的生理鹽水中洗凈血液;剪掉左、右心房及主、肺動脈，剪掉右心室游離壁，保留左心室及室間隔，濾紙吸水后用電子天平稱取左心室重量(LVM)。LVMI=LVM/BW。

1.2.5心肌組織PRA、AngⅡ、ALD、ANP檢測采用酶聯(lián)免疫法，嚴格按照試劑盒說明書操作?？偟鞍自噭┖袡z測每組樣品總蛋白(TP)水平，其結(jié)果用來校正大鼠心肌組織勻漿上清液中的PRA、AngⅡ、ALD和ANP。校正公式:大鼠心肌組織中PRA(AngⅡ、ALD、ANP)水平(ng/g)=組織上清液中PRA(AngⅡ、ALD、ANP)水平(ng/L)/組織上清液TP水平(g/L)。

1.2.6心肌超微結(jié)構(gòu)觀察大鼠LVMI檢測后，立即在冰蠟板上切取1 mm×1 mm×1mm的左心室組織塊，放入戊二醛固定液中; 4℃冰箱放置4 h后，清洗、固定、包埋、超薄切片、電子染色后，于10 000倍透射電鏡下觀察心肌超微結(jié)構(gòu)。

1.2.7統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。計量資料以珋x±s表示，采用單因素方差分析;相關性采用雙變量相關分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.14組各時點收縮壓變化比較見表1。

表1　4組各時點收縮壓變化比較(n=10，±s)

注:與D組比較，*P＜0.01;與A組比較，#P＜0.01。

組別　收縮壓(mmHg)周后A組　114.13±6.47　186.00±6.74*　186.45±7.24造模前　給藥前　給藥16 * B組　113.56±3.68　182.81±9.22*　115.47±3.49#C組　116.68±6.53　183.46±7.89*　116.17±3.83#D組115.71±3.63　115.44±3.74　115.54±3.71

2.24組左心室結(jié)構(gòu)指標和LVMI比較見表2。

表2　4組左心室結(jié)構(gòu)指標和LVMI比較(n=10，±s)

注:與D組比較，*P＜0.01;與A組比較，#P＜0.01。

組別　LVEDD(mm)　LVPWD(mm)　IVESD(mm)　LVEF(%)　LVFS(%)　LVMI(mg/g) A組　5.60±0.17*　3.23±0.10*　3.23±0.09*　85.5±1.7*　42.2±3.3*　2.10±0.17*B組　6.17±0.10#　2.73±0.12#　2.74±0.09#　89.1±2.3#　46.6±2.2#　1.55±0.05#C組　6.19±0.12#　2.75±0.14#　2.76±0.08#　89.6±1.6#　46.8±2.6#　1.54±0.07#D組　6.25±0.11　2.83±0.10　2.42±0.11　89.7±1.5　46.1±2.6　1.47±0.07

2.34組血漿PRA、AngⅡ、ALD和ANP比較見表3。

表3　4組血漿PRA、AngⅡ、ALD、ANP比較(n=10，ng/g，±s)

注:與D組比較，*P＜0.01;與A組比較，#P＜0.05，##P＜0.01;與B組比較，△P＜0.01。

組別　PRA　AngⅡALD　ANP A組　234.19±5.12*　268.47±4.95*　444.81±47.47*295.67±9.69*B組　214.58±1.59##　273.98±5.26* #349.33±6.45##254.61±9.48##C組　219.77±5.43* ##△230.12±4.86* ##△353.55±7.35##256.52±9.26##D組　212.08±2.12　256.38±5.50　318.26±13.77　246.48±10.17

2.44組心肌組織PRA、AngⅡ、ALD和ANP比較見表4。

表4　4組心肌組織PRA、AngⅡ、ALD和ANP比較(n=10，ng/g，±s)

注:與D組比較，*P＜0.01;與A組比較，#P＜0.01，##P＜0.05;與B組比較，△P＜0.01。

組別　PRA　AngⅡALD　ANP A組　9.75±0.45*　9.26±0.79*　11.29±1.16*　9.90±0.63*7.37±0.45　7.26±0.52　7.70±0.40　7.56±0.37 B組　6.96±0.27##　9.93±0.47* #　8.60±0.56##△7.60±0.68##△C組　8.00±0.90##△6.88±0.54##△　8.99±0.76##　7.36±0.90##D組

2.54組心肌超微結(jié)構(gòu)比較A組可見大量肌絲排列紊亂、斷裂嚴重，線粒體腫脹、空泡樣變，細胞核固縮成鋸齒狀，異染色質(zhì)邊集，核周隙增寬; B組可見線粒體排列稍整齊，核稍固縮; C組可見大部分肌纖維斷裂減輕、排列趨于一致，線粒體嵴突增多，排列較為適當; D組可見心肌肌絲排列整齊、連續(xù)，線粒體等細胞器間距適當，結(jié)構(gòu)完整，細胞核染色質(zhì)分布較均勻。

3　討論

本研究觀察了AngⅡ受體拮抗劑替米沙坦與ACE抑制藥貝那普利對兩腎一夾高血壓大鼠左心室重構(gòu)的影響。其中，A組心肌電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示大量肌絲排列紊亂，線粒體腫脹，細胞核固縮成鋸齒狀，說明已形成很明顯的左心室重構(gòu)。心臟超聲檢查發(fā)現(xiàn)，A組LVEDD、LVEF和LVFS均低于其他組，LVESD、LVPWD、IVSD、LVMI均高于其他組(P均＜0.01)，而其他各組上述指標比較無明顯差異(P均＞0.05)。表明替米沙坦與貝那普利這兩種藥物均能有效改善高血壓左心室重構(gòu)，與已有文獻研究結(jié)果一致［5～7］。

本研究結(jié)果顯示，通過16周的治療后，C組血漿與心肌組織中AngⅡ水平顯著降低，而B組不僅未見下降反而明顯上升。其原因可能是替米沙坦阻斷AngⅡ受體，AngⅡ與其受體結(jié)合減少而使游離水平增加;而貝那普利是ACE抑制藥，因此減少了AngⅡ的生成。本研究同時發(fā)現(xiàn)，替米沙坦與貝那普利均可降低腎性高血壓大鼠血漿和心肌組織中的PRA、ALD和ANP，而替米沙坦對PRA的降低作用比貝那普利更為明顯，與文獻研究結(jié)果不一致［8］。可能是因為替米沙坦通過阻斷AngⅡ受體發(fā)揮作用，而貝那普利是通過抑制ACE起效，其具體原因需進一步探討。

AngⅡ和ALD在高血壓左心室重構(gòu)中起重要作用，AngⅡ與受體結(jié)合不僅能引起左心室重構(gòu)、血管收縮，直接導致血壓升高，還能刺激ALD釋放增多。而ALD不僅參與心肌肥厚，刺激心肌膠原和成纖維細胞增生，加重左心室重構(gòu);還能引起水鈉潴留，加重高血壓［9～11］。因此，阻斷AngⅡ介導的病理作用和減少ALD的生成是逆轉(zhuǎn)左心室重構(gòu)的關鍵。ANP具有強大的排鈉利尿、擴張血管功能，高血壓左心室重構(gòu)時ANP表達增加，心肌損害加重［12］。兩給藥組血漿與心肌組織中ANP水平均明顯降低，可能是二者防止或逆轉(zhuǎn)高血壓左心室重構(gòu)的原因之一。

綜上所述，替米沙坦與貝那普利能從不同環(huán)節(jié)抑制RAAS，均能有效改善腎性高血壓大鼠的左心室重構(gòu)。但有研究指出，貝那普利不能抑制ACE外途徑產(chǎn)生的AngⅡ，從而在治療的過程中發(fā)生醛固酮逃逸現(xiàn)象，增加心血管意外發(fā)生幾率［13～15］。因此，本研究提倡在臨床治療中二者聯(lián)用，通過不同途徑影響RAAS，達到有效防止或逆轉(zhuǎn)腎性高血壓大鼠左心室重構(gòu)的目的。

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·臨床研究·

(收稿日期:2014-01-04)

通信作者:馬香芹，E-mail: baoanbo@126.com

基金項目:河南省高等學校青年骨干教師資助計劃(2010300)。

文章編號:1002-266X(2015) 20-0031-03

文獻標志碼:A

中圖分類號:R544.1

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.20.010