劉國華，楊愛崗，梅麗娟，海麗娜，秦文杰，張衛(wèi)東，李明花

(1. 山西中醫(yī)學(xué)院研究生部，山西 太原030024； 2. 第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433；3.北京振東光明藥物研究院，北京 100120； 4.山西振東制藥股份有限公司，山西 長治047100)

·藥學(xué)研究·

中藥白土苓中蘇鐵素的含量測定*

劉國華1，楊愛崗2，梅麗娟2，海麗娜3，秦文杰3，張衛(wèi)東2，李明花4

(1. 山西中醫(yī)學(xué)院研究生部，山西 太原030024； 2. 第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院，上海 200433；3.北京振東光明藥物研究院，北京 100120； 4.山西振東制藥股份有限公司，山西 長治047100)

目的: 對白土苓藥材中甲基氧化偶氮類成分蘇鐵素的含量進(jìn)行測定。方法:采用反相高效液相法對目標(biāo)成分進(jìn)行含量測定，具體的色譜條件：C18色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-1 mL/L甲酸水溶液(2∶98)，檢測波長為215 nm，流速為0.6 mL/min。結(jié)果:蘇鐵素在0. 033 2～ 0. 166 0 μg呈良好的線性關(guān)系(r=0. 999 9)，白土苓藥材中的蘇鐵素平均含量為0.177 mg/g， RSD 1.05%(n=9)，平均回收率為102.38%。結(jié)論: 測定了白土苓中蘇鐵素的含量，為白土苓藥材的定量控制提供了簡便、可靠的測試方法。

白土苓；短柱肖菝葜；蘇鐵素；高效液相色譜法；含量測定

中藥白土苓為百合科植物短柱肖菝葜、華肖菝葜或肖菝葜的干燥塊莖，主要分布在貴州、云南、四川、廣西和湖北等地，尤以短柱肖菝葜HeterosmilaxyunnanensisGagnep.為常用[1,2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白土苓具有抗炎鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、抑菌解毒、抗腫瘤等作用[3]。從白土苓中分離得到揮發(fā)油、三萜及皂苷類、蒽醌、酚酸類、黃酮，及其苷類等多種化合物[4]。有報(bào)道采用HPLC等方法從白土苓及復(fù)方苦參注射液中檢測出偶氮糖苷類化合物大澤明素[5-6]。偶氮糖苷蘇鐵素(Cycasin)口服可誘發(fā)肝癌和腎癌，腹腔注射又具有抗癌作用，表現(xiàn)為與給藥途徑有關(guān)的雙重性毒性[7-8]。為對藥材進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC法對白土苓中蘇鐵素進(jìn)行含量測定。

1 藥品、試劑與儀器

白土苓藥材于2013年7月份分別采自于貴州安順的平壩區(qū)、紫云縣，以及貴州黃平縣，經(jīng)中國中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所張思巨研究員鑒定為百合科植物短柱肖菝葜(HeterosmilaxyunnanensisGagnep.)的塊莖。方法學(xué)研究采用的白土苓藥材采自貴州安順的平壩區(qū)。蘇鐵素對照品，自制，純度>99.0%，批號20140701；色譜純甲醇， Fisher Chemical有限公司，批號144250；純凈水為自制，其余試劑均為分析純。Agilent 1100 系列高效液相色譜儀，美國安捷倫公司產(chǎn)品；BP211D 型電子分析天平，德國Sartorius公司產(chǎn)品；SK1200H型超聲波清洗器，上海科導(dǎo)超聲儀器公司產(chǎn)品。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

Agilent HC-C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm，5 μm )，流動(dòng)相為甲醇-1 mL/L甲酸水溶液(2∶98)，檢測波長215 nm，流速0.6 mL/min, 柱溫室溫，進(jìn)樣量為10 μL。結(jié)果圖1。

A. 對照品；B. 藥材供試品；1為蘇鐵素

2.2 供試品溶液的制備

取本品粉末(過四號篩) 約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入50 mL蒸餾水，稱定質(zhì)量，超聲處理(功率250 W，頻率50 kHz) 15 min，放冷后再以同等功率超聲15 min，室溫冷卻，加水補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對照品溶液的制備

蘇鐵素對照品精密稱取3.32 mg，置于100 mL的量瓶中，加水80 mL，超聲5 min使溶解, 放置至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，制成每毫升含0.033 2 mg的蘇鐵素對照品溶液。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取2.3項(xiàng)下對照品溶液1.0, 2.0, 3.0, 4.0和5.0 mL，分別置于10mL的容量瓶中，加水定容至刻度搖勻，按照之前所述的色譜條件，分別取10 μL進(jìn)樣測定，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo)，峰面積平均積分值(Y)為縱坐標(biāo)，得回歸方程為Y=2 030X+1.97 (r=0.999 9)。結(jié)果表明：蘇鐵素在0.033 2～0.166 0 μg的區(qū)間呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.3項(xiàng)下對照品溶液4.0 mL，置10 mL的容量瓶中，加水定容至刻度搖勻，取10 μL進(jìn)樣測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，以峰面積計(jì)算，結(jié)果蘇鐵素峰面積的RSD值為0.78%(n=6)。結(jié)果表明：儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一個(gè)批次的白土苓藥材粉末(過四號篩)6份，按2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液并檢測，測得的平均含量為0.177 mg/g，RSD值為 1.35% 。結(jié)果表明：該方法的重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取新鮮配制的供試品溶液，分別在0，2，4，6，12，24 h 進(jìn)樣，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算，顯示RSD值為0.58%。結(jié)果表明：供試品溶液中的穩(wěn)定性良好。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取已知含量的白土苓藥材粉末(與重復(fù)性試驗(yàn)同一批) 9 份，各1 g，每3份平行，置于25 mL容量瓶中。1～3號中精密加入2.3項(xiàng)下對照品溶液4 mL，4～6 號中精密加入上述對照品溶液5 mL，7～9號樣品中精密加入上述對照品溶液6 mL，加水定容至刻度，按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行制備并測試，計(jì)算回收率，測得平均回收率為102.38%，RSD值為1.05% 。結(jié)果見表1。結(jié)果表明：該方法回收率良好。

表1 蘇鐵素加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品測定

對分別采自貴州平壩、紫云和黃平的白土苓藥材樣品，按2.2項(xiàng)下方法進(jìn)行制備并測試，3批樣品中蘇鐵素的含量分別為0.177, 0.175和0.179 mg/g，綜合3批樣品的數(shù)據(jù)，確定白土苓藥材中蘇鐵素的平均含量為0.177 mg/g。

3 討 論

在對白土苓藥材的蘇鐵素進(jìn)行測試方法研究時(shí)，藥材的粉碎粒度、提取方式(冷浸、超聲以及回流)、提取溶劑(500 mL/L乙醇溶液、10 mL/L乙酸溶液和水),以及提取時(shí)間等實(shí)驗(yàn)參數(shù)也都進(jìn)行了考察，最終確定了論文中供試品溶液的制備方法。HPLC流動(dòng)相研究中，考察了乙腈-2 mL/L磷酸溶液(7∶193) 、甲醇-水(2∶98)、甲醇-1 mL/L甲酸溶液(2∶98)3 種流動(dòng)相系統(tǒng),結(jié)果表明:甲醇-1 mL/L甲酸溶液(2∶98)流動(dòng)相能達(dá)到基線分離，且保留時(shí)間適宜，從而確定其為流動(dòng)相。

該分析方法具有操作簡便，穩(wěn)定性和精密度高等特點(diǎn)，可作為白土苓藥材中蘇鐵素含量測試的一種分析手段。

[1]中國植物志編委會(huì).中國植物志： 第15 卷[M].北京:北京科學(xué)出版社，1978:212.

[2]湖南植物志編委會(huì).湖南植物志：第3卷[M].長沙：湖南科學(xué)技術(shù)出版社，2010.

[3]秦文杰，王鋼力，林瑞超.短柱肖菝葜化學(xué)成分的研究[J].中草藥, 2007, 38(10):1466-1468.

[4]喬蕾.中藥白土茯苓質(zhì)量控制方法研究[D].沈陽:沈陽藥科大學(xué)，2007.

[5]馬悅.復(fù)方苦參注射液化學(xué)成分及質(zhì)量控制研究[D].北京：中國中醫(yī)科學(xué)院，2012.

[6]李進(jìn)冉，張思巨，李琳，等.白土苓中大澤明素與總黃酮的含量測定[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2012,18(8):68-71.

[7]GL Laqueur, M Spatz.Toxicology of Cycasin [J].Cancer Research, 1968,28(11):2262-2267.

[8]Fumio Yagi, Kenjiro Tadera, Akira Kobayash.Simultaneous determination of azoxyglycosides by high performance liquid chromatography and their contents in growing leaves of Japanese cycad [J].Agricultural & Biological Chemistry，1983, 47(1): 137-139.

(編輯 陶 珠)

1001-6910(2015)11-0069-03

R284.4

B

10.3969/j.issn.1001-6910.2015.11.33

李明花，執(zhí)業(yè)藥師，研發(fā)總經(jīng)理，碩士生導(dǎo)師，1035448060@qq.com

科技部十一五重大新藥創(chuàng)制專項(xiàng)“超五億巖舒的大品種技術(shù)改造”(2008ZX09202-009)；中國博士后科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2015M572741)

2015-08-22；

2015-09-18