胡曉波，姚怡婷，王青，熊立凡

(1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第三人民醫(yī)院，上海201900; 2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院，上海200050;3.上海市臨床檢驗(yàn)中心，上海200126; 4.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院，上海200001)

2014版ICSH體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀性能和驗(yàn)證指南介紹

胡曉波1，姚怡婷2，王青3，熊立凡4

(1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第三人民醫(yī)院，上海201900; 2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬同仁醫(yī)院，上海200050;3.上海市臨床檢驗(yàn)中心，上海200126; 4.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院，上海200001)

編者按:實(shí)驗(yàn)室所面臨的諸多難題之一是如何驗(yàn)證自動(dòng)血液分析儀計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的性能。與手工法相比，儀器法提高了計(jì)數(shù)的準(zhǔn)確度、精密度和效率。在加拿大、美國、英國和日本的實(shí)驗(yàn)室展開了一項(xiàng)實(shí)踐調(diào)查，以確定使用儀器計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)室數(shù)量和儀器計(jì)數(shù)的性能指標(biāo)。根據(jù)調(diào)查結(jié)果，國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)成立了體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀性能和驗(yàn)證國際工作組。為了提供自動(dòng)體液細(xì)胞計(jì)數(shù)準(zhǔn)確可靠的結(jié)果，工作組制定了一套有助于實(shí)驗(yàn)室規(guī)劃和實(shí)施自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證的指南，經(jīng)ICSH大會(huì)討論并通過國際專家組審核后，進(jìn)一步形成了共識(shí)。

介紹了2014年國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)關(guān)于體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀的性能評(píng)價(jià)指南。指南中就實(shí)驗(yàn)室對(duì)儀器的正確度、精密度、相關(guān)性、攜帶污染、檢出限和分析測(cè)量范圍等方面的性能驗(yàn)證提出了具體的方法和要求，尤其是明確規(guī)定了實(shí)驗(yàn)室對(duì)采用的各類體液標(biāo)本均應(yīng)做性能驗(yàn)證。

自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù);體液;腦脊液;驗(yàn)證

“2014版國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(International Committee for Standardization in Hematology，ICSH)體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀性能和驗(yàn)證指南”的預(yù)期目的是建議自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀準(zhǔn)確計(jì)數(shù)體液細(xì)胞的驗(yàn)證方法[1]。目前，市場(chǎng)上有多種類型儀器適用于體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)。因手工體液細(xì)胞計(jì)數(shù)需強(qiáng)勞力、重復(fù)性差，且需較高專業(yè)水平，許多實(shí)驗(yàn)室已采用自動(dòng)計(jì)數(shù)方法，或開始驗(yàn)證其測(cè)量系統(tǒng)。雖然發(fā)表了很多驗(yàn)證的文章，但多數(shù)內(nèi)容并不完整。少數(shù)文章研究了制造商未提供的細(xì)胞計(jì)數(shù)性能特征。因此，實(shí)驗(yàn)室有責(zé)任對(duì)儀器進(jìn)行完整的確認(rèn)，而不只是限于驗(yàn)證。為此，ICSH成立了體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀性能和驗(yàn)證國際工作組(簡(jiǎn)稱工作組)。為了讓自動(dòng)體液細(xì)胞計(jì)數(shù)儀提供、準(zhǔn)確、可靠的結(jié)果，工作組制定了一套有助于實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃和實(shí)施自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證的指南。

一、實(shí)驗(yàn)室體液檢驗(yàn)現(xiàn)狀

為了評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室體液檢驗(yàn)的現(xiàn)狀，由加拿大質(zhì)量管理能力驗(yàn)證－實(shí)驗(yàn)室服務(wù)(Quality Management Proficiency－Laboratory Services，QMP－LS)機(jī)構(gòu)制定調(diào)查問卷，分發(fā)到參加加拿大QMP－LS、美國病理學(xué)家學(xué)會(huì)(College of American Pathologists，CAP)、英國血液室間質(zhì)量評(píng)價(jià)[United Kingdom that participate in the National External Quality Assessment Service for General Hematology，UKNEQAS(H)]的實(shí)驗(yàn)室以及參加日本實(shí)驗(yàn)血液學(xué)學(xué)會(huì)(Japanese Society of Laboratory Hematology，JSLH)性能驗(yàn)證計(jì)劃的實(shí)驗(yàn)室。

調(diào)查問卷的目的是確定實(shí)驗(yàn)室是否使用自動(dòng)儀器計(jì)數(shù)腦脊液(cerebrospinal fluid，CSF)和其他體液的細(xì)胞以及如何確定這些儀器的性能特征。實(shí)驗(yàn)室需說明儀器的性能特征，以確定儀器是否符合體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的質(zhì)量要求。各國對(duì)儀器性能進(jìn)行評(píng)估的實(shí)驗(yàn)室比例有很大差異，見圖1。與精密度和正確性相比，對(duì)靈敏度、特異度和可報(bào)告范圍進(jìn)行評(píng)估的實(shí)驗(yàn)室較少。北美地區(qū)驗(yàn)證這些儀器性能的實(shí)驗(yàn)室比例高于英國和日本。

調(diào)查問卷中還詢問了實(shí)驗(yàn)室采用何種程序來保證結(jié)果的質(zhì)量。這些程序包括實(shí)驗(yàn)室是否做體液質(zhì)控標(biāo)本、檢測(cè)標(biāo)本前是否做背景計(jì)數(shù)以及對(duì)假性檢測(cè)結(jié)果有無處理的程序。調(diào)查結(jié)果見圖2。須注意的是，僅有少數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立的體液細(xì)胞計(jì)數(shù)質(zhì)控品。

市場(chǎng)上多數(shù)新型的血液分析儀具有體液檢測(cè)模式，因此，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)驗(yàn)證制造商聲稱的每一類型體液的檢測(cè)性能特征，包括CSF、漿膜液(心包腔、胸腔、腹腔)和滑膜液。由于低值細(xì)胞計(jì)數(shù)常見于各種體液，尤其是CSF，因此必須驗(yàn)證儀器準(zhǔn)確計(jì)數(shù)低值細(xì)胞的性能。

二、自動(dòng)系統(tǒng)的確認(rèn)/驗(yàn)證

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)了解“確認(rèn)”和“驗(yàn)證”之間的區(qū)別?！按_認(rèn)”通常由制造商實(shí)施，并提供儀器的性能特征。如制造商未對(duì)儀器進(jìn)行確認(rèn)，則必須由實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確認(rèn)時(shí)應(yīng)遵循地區(qū)性有關(guān)實(shí)驗(yàn)室自建試驗(yàn)(laboratory－developed testing，LDT)的指南和建議。

驗(yàn)證是對(duì)制造商已確認(rèn)的儀器進(jìn)行證實(shí)，并提供置于指定檢測(cè)地點(diǎn)的儀器能滿足特定性能的證據(jù)。在儀器用于檢測(cè)前，必須由使用實(shí)驗(yàn)室實(shí)施驗(yàn)證。用于檢測(cè)臨床標(biāo)本的每臺(tái)儀器均須進(jìn)行驗(yàn)證或進(jìn)行轉(zhuǎn)移驗(yàn)證(見下述)。本指南的建議即用于驗(yàn)證制造商的聲明。

(一)制造商預(yù)期用途

制造商須聲明儀器的預(yù)期用途，表明已確認(rèn)儀器的體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的類型。每類體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的分析測(cè)量范圍(analytical measurement range，AMR)均由供應(yīng)商提供。實(shí)驗(yàn)室的責(zé)任就是關(guān)注這些聲明。若實(shí)驗(yàn)室要檢測(cè)制造商聲明中未包含的其他體液，則須確認(rèn)儀器計(jì)數(shù)這些體液的性能。此試驗(yàn)即為L(zhǎng)DT。表1列出的是最常用于體液計(jì)數(shù)的血液分析儀，包括了制造商確認(rèn)的體液類型和參數(shù)。

(二)標(biāo)本處理－分析前變異

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)注意標(biāo)本采集過程的分析前變異，包括影響可報(bào)告結(jié)果的容器類型、標(biāo)本運(yùn)送和儲(chǔ)存。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室須有標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，此規(guī)程應(yīng)遵循所在地區(qū)建議的指南。

(三)樣品穩(wěn)定性

很多文獻(xiàn)報(bào)道標(biāo)本采集后數(shù)小時(shí)內(nèi)就會(huì)發(fā)生細(xì)胞退化、溶解和細(xì)菌生長(zhǎng)。是否會(huì)發(fā)生這種情況取決于檢測(cè)所用時(shí)間、貯存條件和標(biāo)本類型。因此，應(yīng)在標(biāo)本穩(wěn)定的時(shí)間內(nèi)檢測(cè)標(biāo)本，而兩種方法之間的相關(guān)性比較則應(yīng)在2 h內(nèi)完成。

(四)性能指標(biāo)

提供儀器有能力報(bào)告可靠結(jié)果的證據(jù)是規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的做法，在有些國家這已列入相關(guān)法規(guī)中。與外周血相比，體液有不同于全血的基質(zhì)，所含細(xì)胞種類也不同。因此，確保實(shí)驗(yàn)室對(duì)準(zhǔn)備分析的每種體液類型的結(jié)果具有真實(shí)性和可靠性很重要。外周血標(biāo)本不能用于確認(rèn)或驗(yàn)證。許多儀器有專用的體液模式，因此，對(duì)全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(complete blood count，CBC)的驗(yàn)證不能滿足體液細(xì)胞計(jì)數(shù)報(bào)告的要求。每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)確定自己的體液細(xì)胞計(jì)數(shù)模式的可接受性。

如實(shí)驗(yàn)室有多臺(tái)儀器，或是醫(yī)療大集團(tuán)整體健康網(wǎng)絡(luò)的一部分，可對(duì)其中一個(gè)地點(diǎn)的一臺(tái)儀器進(jìn)行完整驗(yàn)證，其他儀器則可進(jìn)行轉(zhuǎn)移驗(yàn)證;若儀器均來自同一制造商且型號(hào)相同，也只需對(duì)一臺(tái)儀器進(jìn)行完整驗(yàn)證，對(duì)其他儀器進(jìn)行轉(zhuǎn)移驗(yàn)證即可。但當(dāng)其他地點(diǎn)開展實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可時(shí)，須提供可用的完整的驗(yàn)證數(shù)據(jù)。完整驗(yàn)證和轉(zhuǎn)移驗(yàn)證應(yīng)做的研究項(xiàng)目見表2。只要標(biāo)本在運(yùn)送過程中能保證完整性，就可在不同地點(diǎn)之間共享標(biāo)本。

1.正確性正確性可用兩種不同的方法進(jìn)行驗(yàn)證。(1)可使用分割標(biāo)本進(jìn)行比對(duì)試驗(yàn)，通常至少有40例均勻覆蓋可報(bào)告范圍的患者標(biāo)本，結(jié)果與實(shí)驗(yàn)室定義的限值進(jìn)行比較，以判斷差異有無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;若以手工計(jì)數(shù)為比較方法，則難度較大; (2)可使用定值的參考物質(zhì)，如商品化質(zhì)控品的預(yù)期回收值，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)定可接受范圍的限值。

2.精密度(可重復(fù)性)必須對(duì)儀器的精密度進(jìn)行評(píng)價(jià)，其方式是盡可能的對(duì)所有可能影響儀器的變異因素進(jìn)行評(píng)價(jià)。用于精密度評(píng)價(jià)的測(cè)試標(biāo)本應(yīng)與臨床標(biāo)本具有相同的特性。建議檢測(cè)2個(gè)或多個(gè)濃度的標(biāo)本，通常采用1個(gè)高濃度和1個(gè)低濃度，包括一個(gè)任意的醫(yī)學(xué)決定水平的標(biāo)本。建議所有標(biāo)本應(yīng)至少測(cè)定10次，以確定批內(nèi)精密度。如測(cè)定10次有困難時(shí)應(yīng)視可用的標(biāo)本量而定，但為了能有效統(tǒng)計(jì)，至少應(yīng)檢測(cè)5次。還應(yīng)測(cè)定一段時(shí)間的再現(xiàn)性(reproducibility)。因患者標(biāo)本不穩(wěn)定，故不可能在不同的日期測(cè)定同一標(biāo)本，但可用體液質(zhì)控品代替。

3.相關(guān)性相關(guān)性評(píng)價(jià)應(yīng)按實(shí)驗(yàn)室可接受的程序和制造商建議的方法來處理和檢測(cè)標(biāo)本，可用實(shí)驗(yàn)室當(dāng)前使用的、制造商聲稱的方法或參考方法進(jìn)行研究。應(yīng)注意的是，在大多數(shù)情況下，由制造商提供的用于確認(rèn)的方法是基于手工計(jì)數(shù)法。建議至少檢測(cè)40例標(biāo)本，且應(yīng)覆蓋AMR，特別是醫(yī)學(xué)決定水平。每一類型體液應(yīng)做相關(guān)性確認(rèn)。要確定AMR限值的偏倚，體液計(jì)數(shù)標(biāo)本須有高值和低值，這對(duì)小型實(shí)驗(yàn)室來說可能有一定難度，但標(biāo)本數(shù)越多，相關(guān)性越好，且對(duì)抗系列濃度干擾物的機(jī)會(huì)就越大。如參考方法是手工計(jì)數(shù)法，則建議對(duì)同一標(biāo)本計(jì)數(shù)2次，以提高手工計(jì)數(shù)的精密度。應(yīng)考慮標(biāo)本的穩(wěn)定性，為了避免標(biāo)本儲(chǔ)存成為可變因素，標(biāo)本應(yīng)在相同條件下儲(chǔ)存，并在2 h內(nèi)檢測(cè)完畢。

4.攜帶污染要確保高濃度標(biāo)本不會(huì)對(duì)隨后檢測(cè)的標(biāo)本造成正偏倚，從而導(dǎo)致結(jié)果假性增高，這對(duì)CSF標(biāo)本尤為重要。建議在檢測(cè)體液標(biāo)本前先做空白測(cè)試。要確保在分析體液標(biāo)本前吸入非血液的液體不會(huì)引起體液標(biāo)本的稀釋，從而造成假陰性結(jié)果。應(yīng)先檢測(cè)高值標(biāo)本，隨后測(cè)定低值標(biāo)本。高值標(biāo)本應(yīng)測(cè)定3次，記為A1、A2和A3，隨后測(cè)定低值標(biāo)本3次，記為B1、B2和B3。用下列公式計(jì)算攜帶污染:攜帶污染(%)=×100。有些實(shí)驗(yàn)室在分析體液標(biāo)本前先檢測(cè)空白標(biāo)本，要確保此做法不會(huì)因預(yù)稀釋而造成結(jié)果假性減低。如按實(shí)驗(yàn)室的可接受性標(biāo)準(zhǔn)，當(dāng)攜帶污染不可接受時(shí)，應(yīng)要求儀器進(jìn)行維修或保養(yǎng)，然后再重復(fù)進(jìn)行攜帶污染研究。

5.檢測(cè)下限(lower limits of detection，LLD) LLD是最關(guān)鍵的驗(yàn)證步驟之一，尤其是CSF細(xì)胞計(jì)數(shù)。制造商須規(guī)定總有核細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞計(jì)數(shù)的下限，且此下限不應(yīng)低于制造商建議的限值。實(shí)驗(yàn)室計(jì)劃分析的所有體液類型均應(yīng)做LLD的驗(yàn)證，以證明標(biāo)本的基質(zhì)效應(yīng)。驗(yàn)證時(shí)無須使用不同批號(hào)的試劑。了解各種低濃度的不同限值之間的關(guān)系很重要:(1)空白限(limit of blank，LOB):是多個(gè)空白標(biāo)本經(jīng)重復(fù)測(cè)量，所獲得的空白標(biāo)本最高測(cè)量值;(2)檢出限(limit of detection， LOD)或分析靈敏度:是標(biāo)本中能檢出的分析物的最低測(cè)量值，一般通過重復(fù)檢測(cè)至少4～6個(gè)低濃度細(xì)胞計(jì)數(shù)的標(biāo)本而獲得，標(biāo)本濃度通常在LOB到4倍LOB范圍內(nèi);(3)定量限(limit of quantitation，LOQ):是在可接受的精密度和正確度下，可檢出的標(biāo)本分析物最低測(cè)量值，須符合實(shí)驗(yàn)室對(duì)準(zhǔn)確度或總允許誤差的要求。各限值之間的關(guān)系是LOB＜LOD≤LOQ。LOD和LOQ常為相同的值，但必須高于LOB。那么如何驗(yàn)證制造商聲明的LOB和LOD?(1)LOB的測(cè)定:如可能，應(yīng)重復(fù)測(cè)定一種類型以上、不含任何細(xì)胞的體液。建議使用體液標(biāo)本，以避免基質(zhì)效應(yīng)，如無法使用體液標(biāo)本，則可用稀釋液代替。每個(gè)標(biāo)本應(yīng)至少重復(fù)檢測(cè)10次?？紤]到實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不同，此項(xiàng)研究至少應(yīng)進(jìn)行2～3 d。由于此類標(biāo)本難以獲取，所以可根據(jù)標(biāo)本獲取的時(shí)間來決定評(píng)估的天數(shù)。如制造商有特定的LOB，而重復(fù)測(cè)定的結(jié)果中最少有3次≤制造商LOB，則可接受制造商聲明的LOB。(2)LOD的測(cè)定:如制造商有特定的LOD，則采用等同于制造商聲稱的低濃度標(biāo)本和相同的程序;如95%的結(jié)果一致，則可使用制造商聲稱的LOD;否則，實(shí)驗(yàn)室須建立自己的LOD。(3)LOQ的測(cè)定:無論觀察到的LOD精密度是否符合實(shí)驗(yàn)室設(shè)定的可接受精密度目標(biāo)，均需做LOQ;可采用與檢測(cè)LOD相同的方法測(cè)定LOQ。LOD或LOQ是能可靠檢測(cè)的最低細(xì)胞計(jì)數(shù)值，故符合實(shí)驗(yàn)室不確定度即偏倚和不精密度的目標(biāo)。

6.分析特異性(包括干擾因素)制造商應(yīng)確定任何可能會(huì)導(dǎo)致結(jié)果錯(cuò)誤的干擾物。體液中的干擾物可以是小凝塊、結(jié)晶等任何物質(zhì)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)查出這些干擾物對(duì)結(jié)果的影響。研究應(yīng)預(yù)先確定考慮實(shí)驗(yàn)室的特定患者群體，應(yīng)涵蓋各種體液類型，包括有干擾物的體液和來自各種疾病狀態(tài)患者的體液。此項(xiàng)研究可納入患者的相關(guān)性研究。

7.AMR和線性AMR是指細(xì)胞計(jì)數(shù)的范圍，是儀器能準(zhǔn)確測(cè)量未經(jīng)任何預(yù)處理(如稀釋)的標(biāo)本的能力。應(yīng)使用和體液基質(zhì)相似的標(biāo)本進(jìn)行相關(guān)研究。建議實(shí)驗(yàn)室對(duì)儀器預(yù)期要檢測(cè)的每一類型體液均做線性研究。制造商必須確定AMR，實(shí)驗(yàn)室有責(zé)任驗(yàn)證這些聲明。線性可通過檢測(cè)制造商聲明的線性范圍內(nèi)的5～7個(gè)濃度予以證明，每個(gè)濃度應(yīng)重復(fù)測(cè)定3次。試驗(yàn)中應(yīng)使用制造商建議的稀釋液。重要的是，線性驗(yàn)證濃度須包含醫(yī)學(xué)決定值、最高濃度和檢測(cè)下限值的細(xì)胞計(jì)數(shù)濃度，尤其是CSF標(biāo)本。在驗(yàn)證期間可能很難收集到高濃度的標(biāo)本。因此，可在日后收集到高值標(biāo)本時(shí)再復(fù)做線性驗(yàn)證，并更新實(shí)驗(yàn)室方案，以反映更高的檢測(cè)上限。

(五)標(biāo)本數(shù)量限制

大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行驗(yàn)證或確認(rèn)研究時(shí)，面臨的最大障礙可能是標(biāo)本的可利用性。一旦決定做自動(dòng)體液計(jì)數(shù)，就應(yīng)將數(shù)據(jù)收集整合到每天的常規(guī)工作中。每次收到標(biāo)本時(shí)，應(yīng)采用兩種方法檢測(cè)，即當(dāng)前方法和驗(yàn)證方法，并保存數(shù)據(jù)以供日后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)比較。累積的數(shù)據(jù)應(yīng)定期進(jìn)行審核，以確保各類體液都能得到驗(yàn)證。如兩種方法的相關(guān)性較差，應(yīng)在標(biāo)本中查找各種常見原因。

對(duì)小型實(shí)驗(yàn)室而言，要收集到能滿足驗(yàn)證研究所需的標(biāo)本數(shù)量會(huì)很困難。但只有有足夠的標(biāo)本量才能做到有效統(tǒng)計(jì)，并確保儀器能提供真實(shí)的結(jié)果，特別是在醫(yī)學(xué)決定值處。在QMP－LS的實(shí)際問卷調(diào)查中也涉及了驗(yàn)證標(biāo)本用量問題。結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)室使用的標(biāo)本量各不相同，有的為1～10份，有的甚至＞80份。為了能有效統(tǒng)計(jì)，對(duì)每一種標(biāo)本類型建議至少使用40份標(biāo)本進(jìn)行研究。

三、自動(dòng)體液分析

用于自動(dòng)計(jì)數(shù)的體液標(biāo)本的處理過程不同于外周血標(biāo)本。因此，體液標(biāo)本自動(dòng)計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程應(yīng)包括標(biāo)本處理、儀器模式更改和標(biāo)本檢測(cè)等所有步驟。

1.標(biāo)本前處理制造商聲明的預(yù)期用途必須表明標(biāo)本檢測(cè)前是否須做特殊處理，如滑膜液標(biāo)本需用透明質(zhì)酸酶進(jìn)行預(yù)處理，以降低其黏度。

2.背景核查在檢測(cè)任何標(biāo)本、尤其是CSF標(biāo)本前，應(yīng)確保吸樣通道清潔，以避免標(biāo)本受污染。如在開蓋模式下檢測(cè)，對(duì)進(jìn)樣針外部進(jìn)行清潔也是規(guī)范實(shí)驗(yàn)室的做法。背景計(jì)數(shù)必須≤空白值下限，否則應(yīng)重做;如復(fù)做后背景計(jì)數(shù)仍很高，則需對(duì)儀器應(yīng)進(jìn)行清洗或維護(hù)。

3.處理假性結(jié)果的程序陽性檢測(cè)結(jié)果必須進(jìn)一步復(fù)核，否則不應(yīng)當(dāng)接受。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果陽性時(shí)，大多數(shù)檢測(cè)系統(tǒng)會(huì)報(bào)警。實(shí)驗(yàn)室操作程序應(yīng)規(guī)定體液標(biāo)本發(fā)生報(bào)警時(shí)應(yīng)如何進(jìn)行調(diào)查以及采取的措施。這些程序應(yīng)包括如何檢出造成假性結(jié)果的各種碎片或細(xì)胞團(tuán)塊以及表明是否有必要使用替代的計(jì)數(shù)方法。調(diào)查方法可以是外觀檢查或濕片顯微鏡檢查。如實(shí)驗(yàn)室操作程序檢測(cè)不可替代的標(biāo)本(如CSF、關(guān)節(jié)腔積液等)，則報(bào)告中應(yīng)有對(duì)異常情況(如肉眼可見的凝塊、鏡下細(xì)胞退變)和對(duì)結(jié)果準(zhǔn)確性影響程度的描述。

4.結(jié)果超出報(bào)告范圍的處理程序?qū)嶒?yàn)室必須確定每種體液的可報(bào)告上限和下限(見“AMR和線性”部分)。當(dāng)檢測(cè)結(jié)果超出實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證的AMR時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有處理超出可報(bào)告范圍上限和下限標(biāo)本的書面程序，包括結(jié)果超出AMR后實(shí)施稀釋的程序。

5.測(cè)量單位QMP－LS的調(diào)查結(jié)果顯示參與調(diào)查的實(shí)驗(yàn)室使用了不同的測(cè)定單位，這可能會(huì)造成臨床醫(yī)生的困惑。因此，實(shí)驗(yàn)室須表明用于報(bào)告體液細(xì)胞計(jì)數(shù)的單位，建議自動(dòng)體液計(jì)數(shù)使用與全血細(xì)胞計(jì)數(shù)相同的測(cè)量單位，這樣還可以消除可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果的計(jì)算過程。在患者報(bào)告中也應(yīng)明確標(biāo)明所用測(cè)量單位。

四、質(zhì)量控制

1.室內(nèi)質(zhì)量控制須對(duì)定量檢測(cè)體液標(biāo)本的分析系統(tǒng)進(jìn)行質(zhì)量控制。雖然有可用的商品化體液質(zhì)控品，但也存在一些困惑，即有無必要做獨(dú)立的質(zhì)控或是否可接受日常使用的商品化CBC質(zhì)控品。新型的血液分析儀均具有特定的體液檢測(cè)模式。重要的是要了解此模式的檢測(cè)通道、吸樣路徑、標(biāo)本稀釋、報(bào)告模式、計(jì)數(shù)體積或細(xì)胞分析是否與CBC模式不同。如體液標(biāo)本采用不同于CBC計(jì)數(shù)的檢測(cè)方法，就要有獨(dú)立的質(zhì)控品;也有用于檢測(cè)儀器體液AMR下限的商品化質(zhì)控品。其他還應(yīng)考慮的是細(xì)胞分類計(jì)數(shù)是否由儀器報(bào)告。有些儀器報(bào)告兩分類細(xì)胞，則商品化體液質(zhì)控品也應(yīng)包含此類成分。

2.能力驗(yàn)證能力驗(yàn)證是實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的要求。對(duì)實(shí)驗(yàn)室而言，如無來自外部能力驗(yàn)證計(jì)劃的標(biāo)本，則須用其他方式來證明其檢測(cè)能力，如采用盲樣檢測(cè)或?qū)嶒?yàn)室之間的標(biāo)本交換檢測(cè)及比對(duì)，以達(dá)到法規(guī)的要求。

綜上所述，除儀器所分析的體液類型不同外，對(duì)體液細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)儀進(jìn)行的確認(rèn)/驗(yàn)證應(yīng)與外周血細(xì)胞標(biāo)本自動(dòng)計(jì)數(shù)儀的確認(rèn)/驗(yàn)證一樣，其中最重要的是要確定體液細(xì)胞低值計(jì)數(shù)的正確性和精密度。驗(yàn)證/確認(rèn)的目的就是確定儀器是否適合其預(yù)期用途，并識(shí)別任何潛在的誤差。此誤差可導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果，有可能會(huì)影響患者的診療。

[1]BOUMER G，DE LA SALLE B，GEORGE T.et al.ICSH guidelines for the verification and performance of automated cell counters for body fluids[J].Int J Lab Hematol，2014，36(6):598－612.

Introduction of the ICSH guidelines for the verification and performance of automated cell counters for body fluids，2014 edition

HU Xiaobo1，YAO Yiting2，WANG Qing3，XIONG Lifan4.(1.No.3 People's Hospital Affiliated to Shanhai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 201900，China;2.St.Luke's Hospital Affiliated to Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200050，China;3.Shanghai Centre for Clinical Laboratory，Shanghai 200126，China;4.Renji Hospital，Shanghai Jiaotong University School of Medicine，Shanghai 200001，China)

This article introduces the 2014 edition of International Committee for Standardization in Hematology (ICSH)guidelines for the verification and performance of automated cell counters for body fluids.This guideline provides the particular methods and requirements for laboratories to verify the performance of automated cell counters in the aspects of accuracy，precision，patient correlation，carryover，limits of detection，analytical measurement range，etc.Meanwhile they specify that laboratories should execute the verification of their automated cell counters for different body fluids.

Automated cell counts;Body fliuds;Cerebrospinal fluid;Verification

1673－8640(2015)03－0209－05

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.001

2015－02－16)

(本文編輯:龔曉霖)

胡曉波，男，1969年生，碩士，主任技師，主要從事臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)研究。