趙嬌嬌，劉 靜，周益峰

（中國(guó)計(jì)量學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310018）

二十二烷醇是由Avanir公司開(kāi)發(fā)的2000年世界首次上市的廣譜抗病毒藥物［1］.同年其乳膏劑被FDA批準(zhǔn)用作非處方藥治療復(fù)發(fā)性口腔炎及面部皰疹［2］.目前我國(guó)正在開(kāi)發(fā)研究二十二烷醇的合成工藝，常見(jiàn)的合成方法是原料二十二烷酸經(jīng)酯化再進(jìn)一步還原得到二十二烷醇，而國(guó)內(nèi)市售的二十二烷酸純度多為80%左右，將購(gòu)買(mǎi)的二十二烷酸純化是控制二十二烷醇質(zhì)量的關(guān)鍵步驟.目前高級(jí)脂肪酸氣相含量測(cè)定方法多采用衍生化法［3］，二十二烷酸不用衍生化的氣相色譜法尚未見(jiàn)到相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，建立一個(gè)二十二烷酸不用衍生化的氣相方法，可以快速有效地測(cè)定二十二烷酸含量，并且可避免衍生化不完全或副反應(yīng)造成的定量不準(zhǔn)確.此法操作簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性好，計(jì)算簡(jiǎn)便，可有效控制產(chǎn)品質(zhì)量［4］.

1 儀器與試劑

儀器：Agilent 6890N氣相色譜儀；正二十二烷酸對(duì)照品（日本 TCI公司，CAS：12－85－6，含量99%）；樣品由本實(shí)驗(yàn)室自制；色譜柱DB－530m×0.32mm×0.25μm（－60～325℃）毛細(xì)管柱；檢測(cè)器FID；柱溫200℃保持3min，10℃·min－1升溫至300℃，保持15min；進(jìn)樣口溫度320℃；檢測(cè)器溫度320℃；載氣為N2；進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣；分流比1∶20；進(jìn)樣量1μL.

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備

精密稱取對(duì)照品1.0g，置于100mL容量瓶中，加DMF（N，N－二甲基甲酰胺）適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液.

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取樣品0.06g，置于10mL容量瓶中，加DMF（N，N－二甲基甲酰胺）適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液.

2.3 線性關(guān)系考察

分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液2、4、6、8、10mL置于10mL容量瓶中，加入DMF稀釋至刻度，搖勻，質(zhì)量濃度分別為2、4、6、8、10mg·mL－1，將對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣3次，記錄色譜圖，如圖1.以對(duì)照品溶液質(zhì)量濃度對(duì)二十二烷酸峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［5］ 如圖2.計(jì)算得回歸方程y＝578.7x－805.6，R2＝0.999.結(jié)果表明，二十二烷酸在2～10mg·mL－1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.

圖1 二十二烷酸GC色譜圖Figure 1 GC chromatogram of behenic acid

圖2 對(duì)照品溶液標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Figure 2 Standard curve of the reference solution

2.4 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為6mg·mL－1的供試品試液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算RSD＝0.39%.

2.5 精密度試驗(yàn)

取質(zhì)量濃度為6mg·mL－1的二十二烷酸對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，計(jì)算RSD＝0.8%.

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

同一批號(hào)的樣品（批號(hào)：20150506），依法“2.2”平行制備6份供試品溶液，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，算其平均含量為96.56%，RSD＝0.55%.

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)供試品溶液（批號(hào)：20150506）分別于配制后0、1、2、4、6、8、10、12、24小時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得二十二烷酸峰面積平均值為2499.920，RSD＝1.84%，表明供試品溶液在24h內(nèi)基本穩(wěn)定.

2.8 回收率試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下已測(cè)知含量的二十二烷酸樣品3份，分別稱取0.04g，0.06g，0.08g，精密稱定，置于10mL容量瓶中，加DMF稀釋至刻度，振搖使溶解，在上述色譜條件下進(jìn)樣測(cè)定，各進(jìn)樣三針［6］，測(cè)得量由公式得到，計(jì)算二十二烷酸的平均回收率為99.8%（RSD＝0.53%，n＝9），結(jié)果見(jiàn)表1和表2.

表1 對(duì)照品溶液峰面積Table 1 Peak areas of the reference solution

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 2 Results of the recovery rate

2.9 樣品分析

取3批樣品（批 號(hào)：20150505，20150506，20150507），依“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別按以上色譜條件測(cè)試，記錄色譜圖，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中二十二烷酸的平均含量為96.56%，平行測(cè)3次，計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表3.

表3 二十二烷酸含量測(cè)試結(jié)果Table 3 Analytical results of behenic acid

3 討 論

常見(jiàn)的高級(jí)飽和脂肪酸檢測(cè)方法有：方法一，蒸發(fā)光散射檢測(cè)法（ELSD）.此方法靈敏度高，但穩(wěn)定性受環(huán)境影響比較大［7］，且二十二烷酸溶解度差，難以找到適合流動(dòng)相進(jìn)行檢測(cè).方法二，滴定法.滴定法操作復(fù)雜，且難以直觀了解純化過(guò)程中其它雜質(zhì)的變化情況［8］.方法三，氣相色譜法.二十二烷酸作為高級(jí)飽和脂肪酸，沸點(diǎn)較高（305℃），一般的氣相色譜多采用衍生化法［9］，如酯化、?；蚬柰榛?但衍生化反應(yīng)存在難以反應(yīng)完全、容易發(fā)生副反應(yīng)等問(wèn)題，以致影響檢測(cè)結(jié)果.同時(shí)過(guò)量的衍生化試劑對(duì)毛細(xì)管柱也會(huì)產(chǎn)生損害.

所以，本文的檢測(cè)采用非衍生化的氣相色譜法，來(lái)避免上述弊端.二十二烷酸在氣相色譜中響應(yīng)良好，保留時(shí)間適宜.從回收率及樣品測(cè)定結(jié)果來(lái)看，本方法具有準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、簡(jiǎn)便易行的優(yōu)點(diǎn)［10］.

二十二烷酸溶解度較差，超過(guò)一定濃度的二十二烷酸易結(jié)晶析出，影響檢測(cè)，所以需要控制其質(zhì)量濃度在一定響應(yīng)范圍（2～10mg·mL－1）.

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