孔慶東

110101遼寧省沈陽市蘇家屯區(qū)婦嬰醫(yī)院PCR實驗室

小兒肺炎支原體感染1079例及耐藥分析

孔慶東

110101遼寧省沈陽市蘇家屯區(qū)婦嬰醫(yī)院PCR實驗室

目的：考察沈陽地區(qū)小兒肺炎支原體(Mycoplasma pneumomae，MP)感染及耐藥情況，為臨床抗菌藥物選擇提供依據(jù)。方法：2012年9月-2014年9月收治小兒肺炎患者1079例，采血進行MP-IGM檢測，采集咽拭子進行MP培養(yǎng)及藥敏試驗。結果：1079例小兒肺炎患者MP培養(yǎng)陽性327例，陽性率30.3%，MP-IGM陽性388例，陽性率36.0%，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。分離出的MP對紅霉素、羅紅霉素及乙酰螺旋霉素耐藥率較高，而對加替沙星及司帕沙星等氟喹諾酮類藥物普遍敏感。結論：建議經驗型用藥同時盡早采集咽拭子做MP培養(yǎng)及藥敏試驗，根據(jù)藥敏結果調整用藥，高度警惕耐藥肺炎支原體肺炎的存在，避免不合理使用抗生素。

肺炎；咽拭子；肺炎支原體；藥敏試驗

肺炎支原體是一種缺乏細胞壁結構、革蘭陰性、可以獨立生存的最小微生物。MP是引起間質性肺炎的常見致病菌，受MP感染的患兒常發(fā)生細菌性或病毒性呼吸道感染類似的臨床表現(xiàn)，導致延誤小兒肺炎的有效治療，并引起嚴重并發(fā)癥[1]。所以對MP引起的小兒肺炎及時診斷及治療尤為重要。由于缺乏細胞壁，常用治療藥物為大環(huán)內酯類及四環(huán)素類抗生素，但由于近年來廣譜抗生素的不合理使用，紅霉素和阿奇霉素等藥物治療支原體肺炎有效率明顯降低，醫(yī)療機構頻繁分離到臨床耐藥菌株。2011年9月-2014年9月收治急性呼吸道感染患兒1079例，檢測MP-IGM、MP快速培養(yǎng)及藥敏試驗，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

2012年9月-2014年9月收治急性呼吸道感染患者1079例，男658例，女421例，年齡0.5～13周歲，中位年齡4周歲，體重10～53 kg，平均17.2 kg?；颊吲R床癥狀為咳嗽、氣喘、發(fā)熱等急性呼吸道感染癥狀，符合《實用兒科學》第7版呼吸道診斷標準。

檢驗方法：①靜脈血采集：采集患兒2 mL靜脈血于促凝采血管中，1 h內分離血清進行MP-IGM間接免疫熒光法檢測呼吸道感染病原體IGM。②咽拭子采集：咽拭子采集采用無菌操作，嚴格按照說明書操作，在室溫下平衡半小時后的咽拭子，在患者咽部用力擦拭幾次，去除咽拭棉簽以外部分，置于培養(yǎng)液內，蓋緊瓶蓋置于37℃生化培養(yǎng)24 h。培養(yǎng)液顏色由紅色轉為黃色判定為陽性。③藥敏試驗：本研究采用系列稀釋法測定最低抑菌濃度(MIC)?；純貉适米优囵B(yǎng)物連續(xù)培養(yǎng)觀察7 d，即完全不能生長的抗生素濃度即為MIC。分別測定阿奇霉素、紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素、左氧氟沙星、司帕沙星、環(huán)丙沙星等11種抗生素對分離出的MP的MIC，藥物敏感性判定標準參照美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)2001版標準[2]。

統(tǒng)計學分析：各組計數(shù)資料比較采用卡方檢驗，統(tǒng)計軟件采用SPSS 16.0，P＜0.05認為差異具有統(tǒng)計學意義。

結果

MP感染患兒年齡分布：3～6歲組在MP-IGM檢測及MP培養(yǎng)陽性率均高于其他年齡組，而≤1歲組兩種檢測方法陽性率均最低。

MP快速培養(yǎng)與MP-IGM檢測比較：1079例患者中，MP培養(yǎng)陽性327例，陽性率30.3%，MP-IGM檢測陽性388例，陽性率36.0%，顯著高于MP培養(yǎng)(χ2= 62.5，P＜0.05)。1079例患者中，患者年齡分組情況比較，見表1。

MP感染患兒季節(jié)分布：從表2可見，MP發(fā)病在四個季度均可發(fā)病，其中第四季度最高，MP培養(yǎng)陽性率35.9%，第一季度次之，MP培養(yǎng)陽性率35.9%，第二季度最低，MP培養(yǎng)陽性率15.9%，與第一、三及四季度陽性率相比，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。327例MP發(fā)病患兒發(fā)病季節(jié)分布，見表2。

327株MP對11種常見抗生素藥物耐藥率：對分離出的327株MP進行耐藥性試驗，藥敏試驗選用支原體肺炎常用抗生素共11種。藥敏結果表明，327株MP對司帕沙星、加替沙星、強力霉素及多西環(huán)素高度敏感，敏感率分別為91.13%、84.71%、85.02%和89.60%。而對紅霉素、羅紅霉素及乙酰螺旋霉素高度耐藥，耐藥率分別達到79.80%、60.24%及62.69%，見表3。

表1 1079例患者MP-IGM檢測及MP培養(yǎng)陽性率比較

表2 不同季節(jié)MP培養(yǎng)陽性率比較

表3 327株MP對11種抗生素藥物耐藥率

討論

MP形成的氣溶膠可以通過飛沫傳播，支原體肺炎是一種具有很強傳染性的呼吸道疾病。最近研究表明，MP導致的呼吸道感染占急性呼吸道感染比例顯著上升。然而由于支原體感染與細菌性或病毒性上呼吸道感染臨床表現(xiàn)類似，臨床癥狀不明顯，所以需要對支原體本身的分離、血清學抗體檢測或PCR核酸檢測才能可靠地確診MP。近年來臨床常用的MP診斷方法主要有MP快速培養(yǎng)，MP-IGM血清抗體檢測，MP基因PCR檢測[3]。但由于PCR技術對檢驗人員技術水平要求較高，傳統(tǒng)PCR容易造成假陽性，熒光定量PCR成本又過高，限制了其使用范圍。目前還是以MP培養(yǎng)作為檢測MP的金標準。但MP培養(yǎng)液質量良莠不齊，陽性率較低，需要采樣人員在采集咽拭子時，注意不要使咽拭子接觸到舌等部位，以免出現(xiàn)細菌或真菌污染，當培養(yǎng)液中某些細菌大量生長時，也會改變pH值，造成假陽性。本研究中MP快速培養(yǎng)陽性率30.3%，與國內相關研究結果一致[4]。

血清學MP-IGM檢測由于檢測時間短，靈敏度高，目前是基層醫(yī)院首選的檢測技術，本研究結果顯示，學齡前組兒童MP-IGM檢出陽性率最高，且隨著年齡增大，MP感染率增加，二嬰幼兒組MP-IGM陽性率最低，可能原因為嬰兒時期免疫系統(tǒng)尚未完善，對MP應答產生抗體能力不足。

我國文獻報道，我國北方地區(qū)MP流行期以冬季為主，MP流行期具有明顯的地域特異性。沈陽地區(qū)氣候類型為溫帶大陸性季風氣候，主要特點是：冬冷夏暖，寒冷期長，氣候干燥，有利于支原體傳播繁殖。本次研究表明，MP感染率在冬季顯著高于夏季，與國內相關研究結果一致[5]。

由于MP沒有細胞壁結構，對青霉素等干擾細胞壁結構的藥物不敏感，所以對MP多采用大環(huán)內酯類、喹諾酮類等藥物。在MP耐藥性方面，本研究結果顯示，分離得到的MP對紅霉素、羅紅霉素及乙酰螺旋霉素等傳統(tǒng)大環(huán)內酯類藥物高度耐藥，而且左氧氟沙星和克林霉素耐藥率上升，當然，目前對新一代的加替沙星及司帕沙星等氟喹諾酮類藥物普遍敏感，耐藥率均低于10%。由于目前治療感染性肺炎首選大環(huán)內酯類抗生素，耐藥性較高，可見其藥物療效值得關注。

本研究顯示，沈陽地區(qū)兒童MP感染以冬季為主，學齡前小兒感染MP陽性率較高，分離得到的MP對經驗型選擇的紅霉素、羅紅霉素及乙酰螺旋霉素耐藥率較高，而對加替沙星及司帕沙星等氟喹諾酮類藥物普遍敏感，所以在治療小兒MP感染時，經驗型用藥同時建議盡早采集咽拭子做MP培養(yǎng)及藥敏試驗，根據(jù)藥敏結果調整用藥，高度警惕耐藥肺炎支原體肺炎的存在，避免不合理使用抗生素。

[1]姜越,劉禧杰,秦選光,等.2011年北京地區(qū)兒童肺炎支原體耐藥情況及其耐藥機制研 究 [J].中 國 全 科 醫(yī) 學,2013,16(11): 3778-3782.

[2]Gerchman I,Lysnyansky I,Perk S,et al.In vitro susceptibilities to fluoroquinolones in current and archived Mycoplasma gallisepticum and Mycoplasma synoviae isolates from meat-type turkeys[J].Vet Microbiol,2008,131 (3):266-276.

[3]歐興義,林琦云.肺炎支原體快速培養(yǎng)與肺炎支原體抗體檢測的比較[J].中國誤診學雜志,2011,11(31):7637-7638.

[4]陽愛梅,宋建輝,黃榕,等.1026例兒童肺炎支原體感染及耐藥情況分析[J].中國當代兒科雜志,2013,15(7):522-525.

[5]邱麗,王旭,衛(wèi)星,等.2147例小兒感染肺炎支原體抗體情況的調查[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2010,7(6):538.

1079 cases of mycoplasma pneumoniae infection in children and drug resistance analysis

Kong Qingdong
PCR Laboratory,Maternity and Infant Hospital of Sujiatun District,Shenyang City,Liaoning Province 110101

Objective:To study the infantile pneumonia mycoplasma infection and drug resistance in Shenyang area,and provide the basis for the clinical selection of antibacterial drugs.Methods:1079 cases of infantile pneumonia patients were selected from September 2012 to September 2014.They were given MP-IGM detected by blood.Throat swab was collected for MP culture and drug sensitivity test.Results:In 1079 cases of pediatric patients with pneumonia,327 cases of MP culture were positive,and the positive rate was 30.3%;388 cases of MP-IGM were positive,and the positive rate was 36%;the difference had statistical significance(P＜0.05).MP resistance rate was higher for erythromycin,roxithromycin and acetyl spiramycin,which was sensitive to gatifloxacin and sparfloxacin and other fluoroquinolones drugs.Conclusion:We recommend the use of experience medicine,at the same time,we proposed as early as the throat swabs collect for MP culture and drug sensitive test,and we adjusted medication according to the results of drug sensitivity,we should be alert to the presence of drug resistance of mycoplasma pneumoniae,and avoided the irrational use of antibiotics.

Pneumonia;Throat swab;Mycoplasma pneumoniae;Drug sensitivity test

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.7.8