劉鴻飛，王明富，梁立春，張 濤

(佳木斯大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，黑龍江 佳木斯 154007)

山茱萸納米制劑對衰老小鼠腦組織akt基因mRNA表達的影響①

劉鴻飛，王明富，梁立春，張 濤

(佳木斯大學基礎(chǔ)醫(yī)學院，黑龍江 佳木斯 154007)

目的：探討山茱萸納米制劑對自然衰老小鼠腦組織akt基因mRNA表達的影響。方法：以衰老小鼠(11～12月齡)、青年小鼠(2～3月齡)為研究對象，灌服山茱萸納米制劑，采用 RT-PCR方法檢測 akt基因mRNA的表達。結(jié)果：衰老小鼠腦組織akt基因mRNA表達量較青年小鼠低，山茱萸納米制劑可以不同程度的提高衰老小鼠腦組織akt基因mRNA的表達。結(jié)論：山茱萸納米制劑顯著提高衰老小鼠腦組織akt基因mRNA的表達，使衰老小鼠腦組織akt基因 mRNA表達趨于年輕化。

山茱萸；衰老小鼠；akt基因

山茱萸具有補益肝腎、收斂固澀之功效，還具有抗菌、調(diào)節(jié)免疫、降血糖、降血脂、抗氧化、抗癌、抗衰老等功效[1～3]。akt基因表達為分子量60kDa絲/蘇氨酸蛋白激酶，后者具有多種生物學功能。前期我們實驗探討了山茱萸對衰老小鼠腦組織的p66shc表達及p-FoxO1蛋白表達的影響[6]，初步發(fā)現(xiàn)山茱萸抗腦衰老方面的作用及其機制。本實驗觀察山茱萸納米制劑對akt基因mRNA表達的影響，探討延緩腦衰老中akt基因的作用。

1 材料與方法

1.1 藥品和制劑

山茱萸購于佳木斯大學醫(yī)學院藥店，經(jīng)鑒定符合藥典標準。

1.2 實驗動物

1.2.1 人工飼養(yǎng)自然衰老小鼠(11～12月齡)90只，體重41～52g，隨機分成9組，每組10只，青年小鼠(2～3月齡)10只，體重20～25g，分1組，總計10組動物。同室分籠飼養(yǎng)，自由進食(基礎(chǔ)飼料)和水，室溫(24±2)℃飼養(yǎng)，相對濕度50%～60%。

1.2.2 自然衰老小鼠基礎(chǔ)飼養(yǎng)5d后再次稱重給藥，1)青年對照組、衰老對照組自由進食(基礎(chǔ)飼料)和水；2)給藥組：納米水提大劑量組、納米水提小劑量組、納米醇提大劑量組、納米醇提小劑量組、常藥水提大劑量組、常藥水提小劑量組、常藥醇提大劑量組、常藥醇提小劑量組 山茱萸大劑量組、小劑量組分別按照1.5g/kg·d、0.75g/kg·d體重劑量連續(xù)灌服30d。

1.3 實驗方法和指標測定

各組小鼠于實驗結(jié)束時斷頭處死，4℃條件下立即取出全腦，DEPC配置的鹽水沖洗去除雜質(zhì)，錫紙包裹后置于液氮備用。RT-PCR試劑盒測定腦組織akt基因mRNA轉(zhuǎn)錄活性，操作步驟按照試劑盒說明進行。

1.4 統(tǒng)計學方法

2 結(jié)果

山茱萸及其納米制劑對小鼠腦組織akt基因mRNA表達的影響見圖1，見表1。

圖1 山茱萸對小鼠腦組織akt基因mRNA和β-actin表達的影響

注：與CONTROL比*P<0.05，**P<0.01；與YOUNG比

△P<0.05，△△P<0.01；與NMWL相比▲▲P<0.01，與NMWS比◇P<0.05，◇◇P<0.01；與CWL比☆P<0.05，☆☆P<0.01；與CWS相比★P<0.05，★★P<0.01。

圖2 壽命相關(guān)信號轉(zhuǎn)導的干路與支路

3 討論

本實驗小鼠腦組織akt基因mRNA表達因衰老而顯著降低，山茱萸可以提高akt基因mRNA轉(zhuǎn)錄活性。實驗研究顯示：衰老小鼠腦組織akt-mRNA表達較青年組表達明顯降低，其中納米水提液大劑量組、納米水提液小劑量組腦組織Akt-mRNA表達有明顯升高。結(jié)果提示山茱萸除對衰老小鼠腦組織的p66shc-p-FoxO1蛋白途徑影響達到延緩小鼠腦衰老外[4～7]，還有可能通過PI3K-AKT途徑發(fā)揮延緩腦衰老作用(見圖2)。我們還將探討山茱萸對PI3-K表達的影響，進一步闡明山茱萸延緩腦衰老的作用機制。

[1]周京華．李春生．山茱萸有效化學成分的研究進展[J].中國新藥雜志，2001，10(11)：808-812

[2]勵建軍．山茱萸有效成分和藥理作用的研究進展及其在食品工業(yè)中的應用[J].食品科學，2003，24(3)：161-163

[3]歐芹，王雅麗．山茱萸多糖對HDF細胞β-半乳糖苷酶及p16表達的影響[J].中國老年學雜志，2007，27(4):325-327

[4]王晶，劉少君，王子仁．p66ShcA蛋白與機體衰老關(guān)系[J]．醫(yī)學分子生物學雜志,2007，4(1)：50-53

[5]Pandolfi S， BonafèM， Di Tella L， et al． P66shc is highly expressed in fibroblasts from center narians[J]． Mech Ageing Dev，2005,126：839-844

[6]王明富，歐芹，朱貴明，等. 山茱萸納米水提液對衰老小鼠腦組織p66shc表達的影響[J]. 中國老年學雜志，2010，9(30)： 1249-1250

[7]丁乙夫，江旭東，李晶，等. 山茱萸多糖對衰老小鼠肝組織中SIRT1基因表達的影響[J].黑龍江醫(yī)藥科學，2014,37(6)：6-8

The effects of Cornus nano preparation on the expression of mRNA of akt gene in brian tissue of aging mouse

LIUHong-fei，WANGMing-fu，LIANGLi-chun，ZHANGTao

(The Basic Medical College of Jiamusi University,Jiamusi 154007，China)

Objective: To investigate the effects of Cornus nano preparation on the expression of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mouse.Methods: Aging mice (11～12 months),young mice(2～3 months)was used as the research object, which were given Cornus nano preparation by gavage. Then the expression of mRNA of akt gene was examined by RT-PCR. Results: The expressions of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mice were lower than those in young mice, but the expression of mRNA of akt gene was increased in various degrees in brian tissus of aging mice given Cornus nano preparation. Conclusion: Cornus nano preparation significantly increased the expression of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mice, and it makes the expression level of mRNA of akt gene in brain tissue of aging mice close to that of the young mice.

Cornus; aging mouse; akt gene

佳木斯大學科研資助項目，編號：S2010-46。

劉鴻飛(1989～)男，河北邯鄲人，在讀碩士研究生。

張濤(1964～)女，黑龍江佳木斯人，博士，教授，碩士研究生導師。E-mail:jmstao@163.com。

R285.5

A

1008-0104(2015)01-0022-02

2014-09-13)