劉保華，汪冬庚，周國梁

(1.南通大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南通 226001;2.安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院，安徽鳳陽 233100)

滁菊揮發(fā)油的抗炎實(shí)驗(yàn)研究

劉保華1，汪冬庚1，周國梁2

(1.南通大學(xué)藥學(xué)院，江蘇南通 226001;2.安徽科技學(xué)院食品藥品學(xué)院，安徽鳳陽 233100)

為研究滁菊揮發(fā)油的抗炎作用，采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹、大鼠紙片肉芽腫模型觀察滁菊揮發(fā)油對(duì)急、慢性炎癥的影響。結(jié)果表明，滁菊揮發(fā)油對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹和大鼠紙片肉芽腫等急、慢性炎癥均有明顯的抑制作用。

滁菊揮發(fā)油;抗炎;耳廓腫脹;足跖腫脹;紙片肉芽腫

滁菊，菊科多年生草本菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥頭狀花序［1］，為我國四大名菊(滁菊、杭菊、徽菊、亳菊)之一。滁菊性溫和，氣味清香，既可入藥，又可作清涼飲料。作為清涼鎮(zhèn)靜劑及眼科用藥，可輔助治療多種疾病，具有發(fā)散風(fēng)熱、清肝明目、平抑肝陽、清熱解毒等功效，臨床主要用于外感風(fēng)熱、發(fā)熱頭痛、目疾、眩暈和疔瘡腫毒的治療。

滁菊的主要成分為揮發(fā)油、黃酮類化合物、氨基酸、微量元素等。國內(nèi)外對(duì)菊花的分類、鑒定、有效成分、藥理、臨床等方面的研究較多。近年來，有關(guān)滁菊總黃酮的解熱抗炎的研究較多，而關(guān)于揮發(fā)油的研究較少，尤其是揮發(fā)油的抗炎作用研究。鑒于此，作者從急性實(shí)驗(yàn)和慢性實(shí)驗(yàn)入手，采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹、大鼠紙片肉芽腫模型對(duì)滁菊揮發(fā)油的抗炎作用進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 試劑與儀器

地塞米松磷酸鈉(批號(hào)1007043)，江蘇漣水制藥有限公司;戊巴比妥鈉(批號(hào)061206)，北京化學(xué)試劑公司;滁菊揮發(fā)油(VOCJ)注射液，自制;生理鹽水，安徽豐原藥業(yè)股份有限公司;二甲苯，淮南市化學(xué)試劑廠;80萬單位注射用青霉素鈉(批號(hào)1001247)，華北制藥股份有限公司;10%新鮮蛋清，自制。

直徑為6 mm的打孔器;PV-200型足跖容積測(cè)量?jī)x，成都泰盟科技有限公司;DHG-718型電熱恒溫培養(yǎng)箱，黃石市醫(yī)療器械廠;FA21048型電子天平，上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

Waster大鼠，雄性，體重150～190 g，80只;昆明種小鼠，雄性，體重18～22 g，40只，均購自安徽長(zhǎng)臨河醫(yī)藥有限公司。

1.3 滁菊揮發(fā)油的提取

取80～100目的滁菊50 g，精密稱量后，置于1 000 mL圓底燒瓶中［2］，加入700 mL飽和氯化鈉溶液浸泡10 h。振蕩，充分混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止［2-3］。將燒瓶置于電爐上加熱至沸，調(diào)溫并保持微沸13 h。停止加熱，放置片刻，開啟測(cè)定器下端活塞將水緩緩放出，收集揮發(fā)油，無水硫酸鈉脫水，得到綠色的滁菊揮發(fā)油［4］。

1.4 滁菊揮發(fā)油注射液的制備及劑量確定

向滁菊揮發(fā)油中加0.5%的吐溫80助溶，根據(jù)其在生理鹽水中的最大溶解度配成注射液。然后以2倍稀釋配制成系列濃度藥液，分別得到2%、1%、0.5%、0.25%、0.125%的滁菊揮發(fā)油注射液。

選擇健康小鼠，每組10只，按0.2 mL·(10 g)-1劑量腹腔注射給藥，觀察小鼠的中毒癥狀。發(fā)現(xiàn)在滁菊揮發(fā)油注射液濃度為2%時(shí)，小鼠仍然不會(huì)致死，而濃度低于0.25%時(shí)效果不明顯，表明滁菊揮發(fā)油注射液應(yīng)用安全可靠［5］。綜合考慮，選擇滁菊揮發(fā)油注射液濃度為1%。

1.5 抗炎實(shí)驗(yàn)

1.5.1 二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)

分組:選擇健康小鼠40只，隨機(jī)分為4組，即滁菊揮發(fā)油高劑量組、滁菊揮發(fā)油低劑量組、陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組，每組10只。均為腹腔注射給藥，陽性對(duì)照組按每10 g體重0.1 mL量給地塞米松磷酸鈉溶液;陰性對(duì)照組給等量的生理鹽水溶液，每日1次，連續(xù)3 d。

末次給藥后1 h，分別于每只小鼠左耳均勻涂抹二甲苯50μL，右耳作對(duì)照。1 h后頸椎脫臼處死小鼠，沿耳廓剪下兩耳，用6 mm直徑的打孔器在同一部位打下耳片［6］，電子天平稱量，按式(1)、(2)計(jì)算耳廓腫脹度和腫脹率。

1.5.2 蛋清致大鼠足跖腫脹實(shí)驗(yàn)

分組:陽性對(duì)照組按每100 g體重0.1 mL量給地塞米松磷酸鈉生理鹽水溶液，其它同1.5.1方法。

末次給藥后0.5 h，于大鼠右踝關(guān)節(jié)處標(biāo)記，采用容積法測(cè)定大鼠正常足跖的容積。然后分別于每只大鼠的右后足跖皮下注射10%新鮮蛋清生理鹽水溶液0.1 mL致炎［7］，再分別于致炎后30 min、60 min、90 min、120 min、180 min用容積法測(cè)定大鼠足跖容積，按式(3)、(4)計(jì)算大鼠足跖腫脹度和腫脹抑制率［8-9］。

1.5.3 大鼠紙片肉芽腫實(shí)驗(yàn)

分組:按1.5.1方法分成4組。將干燥至恒質(zhì)量的濾紙片經(jīng)高溫、高壓滅菌后，用1 mg·(0.1 mL)-1的80萬單位青霉素生理鹽水溶液浸泡，置于50℃烘箱內(nèi)烘干。將大鼠用2%戊巴比妥鈉生理鹽水溶液按3 mg·(100 g)-1麻醉后，在無菌條件下于脊柱正中切口，將紙片植入大鼠脊柱兩側(cè)皮下。術(shù)后當(dāng)日灌胃給藥，每日1次，連續(xù)7 d。

第7 d用戊巴比妥鈉將大鼠麻醉，將紙片連同周圍結(jié)締組織一起取出，除去脂肪組織，稱重(肉芽組織干質(zhì)量)。然后將紙片置于60℃烘箱內(nèi)干燥24 h，稱重(肉芽腫總干質(zhì)量)，減去原紙片質(zhì)量，即為肉芽腫凈干質(zhì)量(以100 g體重計(jì))，按式(5)、(6)計(jì)算干質(zhì)量抑制率，并進(jìn)行組間比較［10］。

2 結(jié)果與討論

2.1 滁菊揮發(fā)油對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響(表1)

表1 滁菊揮發(fā)油對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響Tab.1 Effects of Chrysanthemum morifolium volatile oil on xylene-induced mouse ear edema

由表1可知，與陰性對(duì)照組比較，滁菊揮發(fā)油高劑量組和低劑量組均有抑制二甲苯致小鼠耳廓腫脹的作用，而且高劑量組的腫脹率接近陽性對(duì)照組，抗炎效果明顯。

2.2 滁菊揮發(fā)油對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(表2)

表2 滁菊揮發(fā)油對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹的影響(n=10)Tab.2 Effects of Chrysanthemum morifolium volatile oil on egg white-induced rat paw edema(n=10)

由表2可知，與陰性對(duì)照組比較，滁菊揮發(fā)油高劑量組和低劑量組都有明顯的抑制蛋清致大鼠足跖腫脹的作用，高劑量組效果更明顯［10］。

2.3 滁菊揮發(fā)油對(duì)大鼠紙片肉芽腫的影響(表3)

表3 滁菊揮發(fā)油對(duì)大鼠紙片肉芽腫的影響Tab.3 Effects of Chrysanthemum morifolium volatile oil on rat paper granuloma

由表3可知，與陰性對(duì)照組比較，滁菊揮發(fā)油高劑量組和低劑量組均有明顯的抑制大鼠慢性炎癥的作用，并且高劑量組的效果明顯高于低劑量組(P＜0.05)。

2.4 討論

炎癥反應(yīng)可分為早期、中期和晚期，即血管反應(yīng)、細(xì)胞反應(yīng)和組織增生等3個(gè)階段。早期炎癥的主要表現(xiàn)有毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)、滲出和水腫;中期炎癥表現(xiàn)為白細(xì)胞向炎灶聚集;晚期炎癥主要特點(diǎn)是炎灶屏障形成和組織增生［11］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，滁菊揮發(fā)油有很強(qiáng)的抗炎作用，其抗炎機(jī)制可能與影響小鼠毛細(xì)血管的通透性、提高毛細(xì)血管抵抗力、抑制炎癥介質(zhì)組胺和羥色胺的釋放有關(guān)。

3 結(jié)論

滁菊揮發(fā)油對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹、蛋清致大鼠足跖腫脹和大鼠紙片肉芽腫有明顯的抑制作用，表明其對(duì)急、慢性炎癥均有一定的抑制作用，這與滁菊揮發(fā)油的清熱解毒、抗菌、抗炎等功效是一致的，為臨床應(yīng)用滁菊治療外感風(fēng)熱、發(fā)熱頭痛、目疾、眩暈和疔瘡腫毒的進(jìn)一步研究提供了理論依據(jù)，同時(shí)也說明滁菊揮發(fā)油是滁菊中不可忽視的有效成分之一［11］。

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Experimental Study on Anti-Inflammatory Effect of Chrysanthemum Morifolium Volatile Oil

LIU Bao-hua1，WANG Dong-gen1，ZHOU Guo-liang2
(1.College of Pharmacy，Nantong University，Nantong 226001，China; 2.School of Food and Drug，Anhui Science and Technology University，F(xiàn)engyang 233100，China)

To study anti-inflammatory effect of Chrysanthemum morifolium volatile oil，the effects of Chrysanthemum morifolium volatile oil on acute and chronic inflammation were investigated by xylene-induced mouse ear edema，egg white-induced rat paw edema and rat paper granuloma models.Results showed that，Chrysanthemum morifolium volatile oil had significant inhibitory effect to xylene-induced mouse ear edema，egg white-induced rat paw edema and rat paper granuloma.

Chrysanthemum morifolium volatile oil;anti-inflammatory;ear edema;paw edema;paper granuloma

R 284.2

A

1672-5425(2015)02-0057-03

10.3969/j.issn.1672-5425.2015.02.014

2014-10-27

劉保華(1990-)，女，安徽舒城人，碩士研究生，研究方向:中藥分析與藥理研究，E-mail:liubaohua19891203@163.com;通訊作者:汪冬庚，副教授，E-mail:wdg1228@126.com。