張銳　曾萬勇　郭煥中　李金華

摘 要 比較了不同提取方法對香菇多糖得率的影響。結(jié)果表明，以0.4mol/l的鹽酸為浸提液提取未純化的香菇多糖，提取率為24%，0.8mol/L NaOH為浸提液提取的未純化的香菇多糖，提取率為15.58%，較熱水提法提取率7.56%有大量提高，而其活性則有待進(jìn)一步研究。

關(guān)鍵詞 提取方法 香菇多糖 苯酚硫酸法 提取率

中圖分類號：Q539 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI：10.16400/j.cnki.kjdkz.2015.06.029

The Study of Extration Effect on Lentinan by

Different Extration Methods

ZHANG Rui， ZENG Wanyong， GUO Huanzhong， LI Jinhua

（School of Biology and Pharmaceutical Engineering， Wuhan Polytechnic University， Wuhan， Hubei 430023）

Abstract Different extraction methods for leninan contents were compared. The results show that the raw extration rate reaches 24% by 0.4mol/l of hydrochloric acid， while it is 15.58% by 0.8mol/l of NaOH. Both of the methods are far better than hot water extration method， which is 7.56% in the study. The activity of the extrations should be investigated futhermore.

Key words extraction method; Lentinan; PhenolSulphate colorimetry; rate of extraction

香菇（Lentinus edodes）是一種集營養(yǎng)、保健和藥用功效于一體的可直接利用的藥食兩用菌類，廣泛地分布于我國各省區(qū)，在我國有悠久的食用歷史。香菇中含多種活性成分，其中香菇多糖具有抗病毒、抗腫瘤、降血糖等生物活性，是非特異免疫刺激劑，并且在臨床上得到廣泛應(yīng)用。①

大量工作證明香菇多糖能增強腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬能力，提高機體抗腫瘤功能且無毒副作用，是理想的免疫促進(jìn)劑。香菇多糖的抗腫瘤活性與分子量有關(guān)，而且其硫酸酯化合物具有抑制愛滋病毒的作用。②林桂蘭等對香菇多糖抗食用油脂的氧化作用、清除羥基自由基的作用、清除超氧陰離子自由基的作用以及在模擬胃液條件下清除的作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，香菇多糖提取物具有體外抗氧化性能（林桂蘭等，2006）。

香菇多糖的提取方法一直是研究的熱點。前人采用了高壓熱水浸提法、③超聲波分步酶解法④等提取香菇多糖。本實驗以神農(nóng)架產(chǎn)香菇為材料，比較了不同提取方法對香菇多糖得率的影響。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

實驗材料 干香菇購自神農(nóng)架。

蛋白酶K為Merck公司產(chǎn)品;無水酒精，濃鹽酸，氫氧化鈉，苯酚，濃硫酸，正丁醇，氯仿，30%雙氧水，磷酸二氫鈉，磷酸氫二鈉，氯化鈉，鐵氰化鉀，三氯乙酸，六水氯化鐵，三羥甲基氨基甲烷，鄰苯三酚，七水硫酸亞鐵，水楊酸等，以上試劑均為分析純。

1.2 香菇多糖的提取

1.2.1 香菇粉的制備

將干香菇在烘箱內(nèi)80℃烘干至恒重，粉碎機磨碎成粉，過60目篩，備用。

1.2.2 香菇多糖提取

（1）熱水浸提法：⑤取香菇粉10g于錐形瓶，加入200ml蒸餾水，在80℃恒溫水浴上回流浸提2h。用濾布過濾，分離濾液和殘渣（濾渣在水中反復(fù)浸取2次，最后合并濾液）;合并濾液，以3000r/min離心20min。取部分上清液，稀釋60倍，用苯酚硫酸法測多糖濃度。⑥

（2）酸浸提法：分別取香菇粉10g于5個錐形瓶中，水浴加熱溫度為80℃，冷凝回流，料液比1：20，按照鹽酸濃度0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mol/L加熱2h。后續(xù)步驟同（1）。

（3）堿浸提法：分別取香菇粉10g于5個錐形瓶中，水浴加熱溫度為80℃，冷凝回流，料液比1：20，按照氫氧化鈉溶液濃度0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mol/L加熱2h。后續(xù)步驟同（1）。

1.2.3 香菇多糖的分離、純化

取香菇粉10g于錐形瓶，加入200ml蒸餾水，在80℃恒溫水浴上回流浸提2h。用濾布過濾，分離濾液和殘渣（濾渣在水中反復(fù)浸取2次，最后合并濾液）;合并濾液，以3000r/min離心20min。收集全部上清液，經(jīng)蛋白酶k處理、Sevag法去蛋白、雙氧水漂白、⑦醇沉、復(fù)溶，苯酚硫酸法測香菇多糖含量。

1.3 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

稱取無水葡萄糖14.8mg，加水溶解，定容至100mL。分別取0ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml、1.4ml，加水至2.0ml，再加lml 5%苯酚溶液，迅速加入濃硫酸5ml，搖勻，靜置20min，在490nm波長處測定吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。⑧

2 結(jié)果與分析

2.1 不同提取方法獲得多糖溶液顏色

實驗發(fā)現(xiàn)，不同提取方法得到的溶液顏色存在很大差別，總體來說，浸提后原液顏色較深，醇沉后溶液顏色變淺。堿法提取的溶液顏色較酸提和水提法獲得的溶液顏色深，而酸提和水提的顏色較淺（見表1）。endprint

表1 不同提取方法得到的多糖溶液外觀

2.2 苯酚硫酸法測定總糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

根據(jù)1.3的方法獲得的結(jié)果繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線如下（見圖1）。該標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為： = 0.0067+0.0879，R2= 0.9967 ，線性范圍：0～150 g。

圖1 苯酚硫酸法測定總糖含量標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.3 不同提取方法對香菇多糖提取率的影響

比較了不同提取方法獲得溶液的吸光值，發(fā)現(xiàn)鹽酸濃度及NaOH濃度對提取率都有很大影響。鹽酸濃度在0～0.4mol/l區(qū)間隨濃度升高提取率升高，但進(jìn)一步提高酸濃度則提取率下降。NaOH濃度則在0～0.8mol/l區(qū)間與提取率呈正相關(guān)，堿濃度進(jìn)一步提高則提取率下降。

比較酸堿提取法的最適濃度發(fā)現(xiàn)，鹽酸浸提時，0.4mol/l HCl提取率最高，吸光值為0.8246，折算提取率為24.0%（見圖1）;NaOH浸提時，0.8 mol/l NaOH提取率最高，吸光值為0.5940，折算提取率為15.5%（見圖2）;而熱水法提取的吸光值為0.3104，折算提取率為7.56%。因此，從提取率來看，酸浸提法>堿浸提法>水浸提法，酸浸提時，鹽酸最適濃度為0.4mol/l，堿提時，NaOH最適濃度為0.8mol/l。

圖2 酸浸提法及熱水浸提法提取液吸光值

圖3 堿浸提法及熱水浸提法提取液吸光值

3 結(jié)論與討論

近年來，香菇多糖因具有增強免疫能力，抗癌等活性受到消費者的青睞，已經(jīng)有很多研究者對其提取工藝進(jìn)行過研究，提取率也各有不同。王廣慧等（2014）超聲波協(xié)同高壓熱水浸提法，提取率為7.83%。本文采用普通熱水浸提法得率為7.56%，與前人報道結(jié)果基本一致。

本文研究結(jié)果表明，不同提取方法對香菇多糖提取率影響較大，酸提法和堿提法的提取率都大大高于熱水浸提法，這可能是因為酸堿溶解了大量的單糖及其他物質(zhì)有關(guān);相同的提取方法，提取液溶劑的濃度對香菇多糖提取率及抗氧化活性有一定影響。在提取率為主要考慮因素時，酸浸提法有較大優(yōu)勢;在綜合考慮提取率和提取的香菇多糖的抗氧化活性時（另文敘述），堿浸提法較好。而酸提法和堿提法獲得的香菇多糖的其它活性有待進(jìn)一步研究。

不同地區(qū)香菇多糖含量存在很大差異。本實驗采用神農(nóng)架產(chǎn)香菇，采用水提法獲得多糖提取率為7.56%，同已有文獻(xiàn)報道相比，初步認(rèn)為其多糖含量較高，不同產(chǎn)地香菇多糖含量比較仍需進(jìn)一步研究證實。

*通訊作者：李金華

武漢輕工大學(xué)大學(xué)生科研項目

注釋

① 郝強.酸提香菇多糖的提取分離、結(jié)構(gòu)鑒定及抗氧化活性研究.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文，2008.

② 張俐納，張平義等.香菇多糖的成分及其分子量研究[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報，1998.19（9）：1513-1517.

③ 王廣慧，于德涵.高壓熱水浸提法提取香菇多糖工藝優(yōu)化[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014.42（6）：272-272.

④ 金小花，司文會，張野等.超聲波—分步酶解法提取香菇多糖的研究.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014.42（25）：8756，8759.

⑤ 徐懷德.天然產(chǎn)物提取工藝學(xué)[M].中國輕工業(yè)出版社，2013.2.

⑥ 田光輝.香菇多糖提取工藝的優(yōu)化[J].延安大學(xué)學(xué)報，2002.21（2）：46-48.

⑦ 陳靜，耿安靜，徐曉飛.香菇多糖的過氧化氫脫色工藝研究[J].工藝技術(shù)，2010（3）：293-295.

⑧ 陳曉光，韋藤幼等.內(nèi)部沸騰法提取香菇多糖的工藝優(yōu)化[J].食品科學(xué)，2011.32（10）：31-34.endprint