黃紅芳

[摘 要] 目的：研究轉(zhuǎn)錄因子 Foxd3、Sox2在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中表達(dá)，為臨床診斷治療提供參考。方法：46例不同級別宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）患者組織標(biāo)本，采用免疫組織化學(xué)法檢測Foxd3和Sox2的表達(dá)情況，與正常宮頸組織進(jìn)行對比。結(jié)果：Foxd3在CIN組織中表達(dá)水平顯著高于正常宮頸組織（P<0.05），Sox2蛋白在CIN組織表達(dá)水平（91.30%）顯著高于正常宮頸組織水平（P<0.05）；隨著CIN分級的提高，Sox2蛋白表達(dá)呈遞增的趨勢，Sox2在CIN I 為13.33%，CIN II 為29.41%，CIN III為57.14%。結(jié)論：轉(zhuǎn)錄因子 Foxd3在CIN組織中高表達(dá)、Sox2在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的表達(dá)與CIN分級呈正相關(guān)，檢測Foxd3、Sox2表達(dá)情況對了解CIN生物學(xué)行為和評估預(yù)后具有重要臨床價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] 轉(zhuǎn)錄因子；Foxd3；Sox2；宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變

中圖分類號：R737.33 文獻(xiàn)標(biāo)識碼： A 文章編號：2095-5200（2015）03-077-03

宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）為宮頸癌癌前病變。CIN分為3個(gè)等級[1-2]，I～I(xiàn)I級可以治愈、保持穩(wěn)定或者逆轉(zhuǎn)的，但是也可能發(fā)展成III級或者浸潤癌，甚至宮頸癌[3]。CIN級別越高，瘤變的逆轉(zhuǎn)率就越低，進(jìn)展率就越高。CIN的盡早發(fā)現(xiàn)、治療、和隨訪監(jiān)控對防治宮頸癌有重要作用[4]。轉(zhuǎn)錄因子 Foxd3、Sox2能在胚胎干細(xì)胞、胚胎腫瘤細(xì)胞、胚胎生殖細(xì)胞、成長組織祖細(xì)胞、多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)[5-6]。本研究分析轉(zhuǎn)錄因子 Foxd3、Sox2在CIN中表達(dá)，探討其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料

46例宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變（CIN）組織標(biāo)本，標(biāo)本選自2010年～2014年本院宮頸活檢及手術(shù)切除標(biāo)本，標(biāo)本經(jīng)病理證實(shí)為宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變。其中CINI 15例、CIN II 17例、CIN III 14例；另取20例正常宮頸組織標(biāo)本為對照組?；颊呤中g(shù)前均未經(jīng)過放化療等方式治療。標(biāo)本處理：經(jīng)10%的中性福爾馬林固定，石蠟包埋標(biāo)本，以5 um厚度切片。

1.2 儀器與試劑

鼠抗人Fox3單克隆抗體由美國R&D公司提供，羊抗鼠多克隆抗體由美國Pierce公司提供；濃縮型鼠抗人Sox2單克隆抗體由美國SantaCruz公司提供；氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色試劑盒、鏈素抗生物素-過氧化物酶（SP）免疫組化試劑盒由武漢博士德生物有限公司提供。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 Fox3檢測方法 免疫組化法：均在組織芯片上進(jìn)行，經(jīng)脫蠟（二甲苯）、水化（梯度酒精）后，用3%過氧化氫抑制內(nèi)源性過氧化酶活性，采用枸櫞酸鈉（濃度：0.01mol/L，PH6.0，100℃）修復(fù)抗原10min，采用PBS沖洗4遍，10%BSA封閉非特異性位點(diǎn)10min。4℃孵育鼠抗人Fox3單克隆抗體12h，采用PBS沖洗3遍，20℃孵育羊抗鼠多克隆抗體1h，采用PBS沖洗3次，DAB顯色觀察。細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒作為陽性表達(dá)。

1.3.2 Sox2檢測 采用免疫組化染色法：均在組織芯片上進(jìn)行，經(jīng)脫蠟（二甲苯）、水化（梯度酒精）后，用3%過氧化氫抑制內(nèi)源性過氧化酶活性，采用枸櫞酸鈉（濃度：0.01mol/L，PH6.0）修復(fù)抗原10min，滴加非免疫性動(dòng)物血清，在室溫下孵育10min；再滴加第一抗體100μL，在室溫下孵育1h，再滴加第二抗體（經(jīng)生物素標(biāo)記）100μL，在室溫下孵育10min，滴加SP溶液，在室溫下孵育10min，最后滴加DAB顯色劑顯色5min，鏡下觀察。隨機(jī)選取5塊高倍視野，計(jì)算出平均陽性細(xì)胞占比進(jìn)行評分，0，陽性細(xì)胞占0%；1，陽性細(xì)胞占<25%；2，陽性細(xì)胞占25%～50%；3，陽性細(xì)胞占50.1%～75% ；4，陽性細(xì)胞占>75%；根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度分級評分，0級，無著色；1，弱染色；2，中等強(qiáng)度染色；3，強(qiáng)染色；組織學(xué)評分為陽性細(xì)胞數(shù)占比評分×染色強(qiáng)度評分。根據(jù)組織學(xué)評分判斷陽性強(qiáng)度，0分為（-），1～4分為（+），5～8分為（++），9～12分為（+++），5～12分判定為Sox2陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P<0.05為顯著性差異。

2 結(jié)果

2.1 Foxd3在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的表達(dá)

Foxd3蛋白在正常宮頸組織中未見陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為0（見圖1a）；Foxd3蛋白在CIN組織表達(dá)主要位于胞漿中，少數(shù)表達(dá)于單個(gè)癌細(xì)胞中，46例CIN組織中有42例可見陽性表達(dá)，陽性表達(dá)率為91.30%（見圖1b）。Foxd3蛋白在CIN組織表達(dá)水平顯著高于正常宮頸組織水平（P<0.05）。

a為正常宮頸組織，b為CIN組織

圖1 Foxd3蛋白在正常宮頸組織與CIN組織中的表達(dá)

2.2 Sox2在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的表達(dá)

CIN級別不同，Sox2蛋白呈不用程度的陽性表達(dá)（見圖2），隨著CIN分級的提高，Sox2表達(dá)呈遞增的趨勢。

a為正常宮頸組織，b為 CIN I級組織，c為 CIN II級組織，

d為CIN III級組織

圖2 Sox2在正常宮頸組織、CIN組織的表達(dá)

46例CIN組織中Sox2陽性表達(dá)率為32.61%，其中CIN I 為13.33%，CIN II 為29.41%，CIN III為57.14%，Sox2在CIN III級組織中陽性表達(dá)率顯著高于I級和II級，且有顯著性差異（P<0.05）。見表1。

3 討論

Foxd3為一種轉(zhuǎn)錄因子，又名翼狀螺旋蛋白，擁有翼狀螺旋DNA結(jié)合區(qū)域，能表達(dá)于胚胎干細(xì)胞或者胚胎瘤細(xì)胞等細(xì)胞中 [7-8]。

轉(zhuǎn)錄因子Sox2基因是一種性別決定區(qū)因子，對胚胎干細(xì)胞維持多向性發(fā)展和自我更新起決定性作用，是膠質(zhì)瘤祖細(xì)胞維持增殖和遺傳特性的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[9]。Sox2異常表達(dá)直接關(guān)系到肺癌、口腔腫瘤、乳腺癌、睪丸干細(xì)胞腫瘤、腦膜瘤、食管癌等許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[10]。Sox家族的代表性特征是具有高度保守的HMGDNA結(jié)合區(qū)域[11]。Sox的蛋白是重要的調(diào)控因子，對早期神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)言、性別的決定和分化、多種組織器官的形成有重要作用。不但能在胚胎干細(xì)胞、胚胎生殖細(xì)胞、胚胎生殖腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，還在部分成人組織的祖細(xì)胞、多種腫瘤細(xì)胞中表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，Sox2是一個(gè)干細(xì)胞誘導(dǎo)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，能調(diào)控干細(xì)胞。腫瘤干細(xì)胞極少存在于腫瘤組織內(nèi)，具有無限增殖及基因突變的潛能，決定著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。Sox2蛋白的檢測有助于評價(jià)CIN疾病的生物學(xué)行為，為臨床生物學(xué)治療腫瘤提供理論依

據(jù)[12]。本研究提示，正常宮頸組織中僅存在極少的干性基因細(xì)胞，而CIN組織中干細(xì)胞的表達(dá)率顯著升高，可推測正常宮頸組織中的干細(xì)胞積累的大量突變基因變異干細(xì)胞失去自控，轉(zhuǎn)化為宮頸癌干細(xì)胞[13]。

本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)oxd3蛋白在CIN組織表達(dá)水平（91.30%）顯著高于正常宮頸組織水平（0%），F(xiàn)oxd3這個(gè)特性為研究和評估CIN的生物學(xué)活性和預(yù)后提供了潛在的靶點(diǎn)；隨著CIN分級的提高，Sox2蛋白表達(dá)呈遞增趨勢，Sox2蛋白在CIN組織表達(dá)率CIN I 為13.33%，CIN II 為29.41%，CIN III為57.14%，表達(dá)與CIN呈正相關(guān)。

綜上所述，轉(zhuǎn)錄因子 Foxd3、Sox2在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變中的表達(dá)與CIN分級呈正相關(guān)，檢測轉(zhuǎn)錄因子 Foxd3、Sox2的表達(dá)情況，對了解CIN生物學(xué)行為和評估預(yù)后具有重要的臨床價(jià)值。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 劉彩艷， 曲芃芃. 宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變的治療進(jìn)展[J]. 國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志， 2010， 37（1）：62-63.

[2] Lu D， Yang X， Jiang N Y， et al. IMP3， a new biomarker to predict progression of cervical intraepithelial neoplasia into invasive cancer[J]. The American journal of surgical pathology， 2011， 35（11）： 1638-1645.

[3] 賀桂芳， 李華軍， 卞美璐， 等. 宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變在宮頸分布特征的研究[J]. 中國婦幼保健， 2013， 28（09）： 1408-1411.

[4] Ronco G， Giorgi-Rossi P， Carozzi F， et al. Efficacy of human papillomavirus testing for the detection of invasive cervical cancers and cervical intraepithelial neoplasia： a randomised controlled trial[J]. The lancet oncology， 2010， 11（3）： 249-257.

[5] 陽麗， 錢德英， 陳觀娣， 等. 宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變病患變化趨勢研究[J]. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2013， 29（24）： 4092-4094.

[6] 效小莉， 宋茜. 兩種模式治療宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變3級的療效對比[J]. 中國婦產(chǎn)科臨床雜志， 2012， 13（5）： 362-363.

[7] 王旭， 張陽. 干細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子Foxd3在宮頸癌組織中的臨床表達(dá)[J]. 中國婦幼保健， 2012， 27（5）： 746-748.

[8] 羅志明， 劉堅(jiān)， 蔣豐慧， 等. 宮頸環(huán)形電切術(shù)治療Ⅱ～Ⅲ級宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變 178 例[J]. 中國生育健康雜志， 2012， 23（6）： 451-452.

[9] 蔡春芳， 譚國勝， 俞奇， 等. 轉(zhuǎn)錄因子SOX2在宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變及宮頸癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2013， 33（1）： 128-130.

[10] 谷冀暉， 王心， 胡春艷， 等. 宮頸癌組織中Sox-2的表達(dá)變化及意義[J]. 山東醫(yī)藥， 2012， 52（30）： 36-38.

[11] 李景賀， 王麗萍， 金立方， 等. 轉(zhuǎn)錄因子Sox2在人肺癌中的表達(dá)及其臨床意義[J]. 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2013， 17（8）： 1437-1439.

[12] 鄧新， 劉書童， 車廣華， 等. SOX-2和OCT-4在宮頸鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J]. 中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2013， 16（11）： 2018-2021.

[13] Wang F， Li Y， Zhou J， et al. miR-375 is down-regulated in squamous cervical cancer and inhibits cell migration and invasion via targeting transcription factor SP1[J]. The American journal of pathology， 2011， 179（5）： 2580-2588.