徐俊，張思敏Δ，薛軍，張萬里，郭建榮

(1.武漢市兒童醫(yī)院 重癥醫(yī)學(xué)科，湖北 武漢 430016；2.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院 腫瘤中心，湖北 武漢 430023)

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黃芪多糖抑制糖原合成酶激酶3β活性與核轉(zhuǎn)位及其調(diào)控糖穩(wěn)態(tài)的作用研究

徐俊1，張思敏1Δ，薛軍2，張萬里2，郭建榮2

(1.武漢市兒童醫(yī)院 重癥醫(yī)學(xué)科，湖北 武漢 430016；2.華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院 腫瘤中心，湖北 武漢 430023)

目的 觀察黃芪多糖(astragalus polysaccharide，APS)對糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)作用，研究糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK3β)活性及其亞細(xì)胞定位(核轉(zhuǎn)位)情況。方法 體外培養(yǎng)HepG2人肝癌細(xì)胞，用不同濃度高糖(30、40 mM)誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型，選擇最佳工作糖濃度，用不同濃度的APS(50、100、200、400 μg/mL)處理肝細(xì)胞以選擇最大有效濃度。按照不同處理方法將細(xì)胞分為：陰性對照組(C)、陽性對照組(Tm)、30 mM高糖誘導(dǎo)組(G30)、45 mM高糖誘導(dǎo)組(G45)、陰性對照+APS處理組 (CA)、陽性對照+APS處理組(TA)與高糖應(yīng)激+APS處理組(GA)，共7組。采用MTT法檢測不同濃度APS對HepG2細(xì)胞增殖的影響，實時定量PCR反應(yīng)檢測HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPl mRNA的剪切水平與轉(zhuǎn)錄水平，免疫印跡技術(shù)檢測組胞漿和胞核內(nèi)GSK3β磷酸化水平。結(jié)果 選擇30 mM高糖作為工作糖濃度，APS最大有效濃度200 μg/mL，對細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)處理。GA組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細(xì)胞XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平均顯著低于G30組(P<0.05)，但TA組與Tm組XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義。與G30組比較，GA組胞漿和胞核內(nèi)GSK3β磷酸化水平均顯著增加(P<0.05)，但TA組與Tm組組胞漿和胞核內(nèi)GSK3β無顯著性變化。結(jié)論 APS能顯著改善肝臟脂肪變性，其機理與APS減少肝臟GSK3β的活性特別是核定位并減輕肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激有關(guān)。

黃芪多糖；糖原合成酶激酶3β；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激；HepG2細(xì)胞；糖穩(wěn)態(tài)

黃芪是目前臨床常用的中藥材，新近的研究表明黃芪中的提取物黃芪多糖(astragalus polysaccharide，APS)具有降糖及抗癌等作用[1]，但目前APS對肝癌的抑制作用尚無相關(guān)研究且具體作用機制研究也較少[2-4]。本研究對體外HepG2人肝癌細(xì)胞給予不同處理方式，研究APS 對于糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β，GSK3β)活性和亞細(xì)胞定位的影響，并進(jìn)一步探討了GSK3 的活性和核轉(zhuǎn)位增強與高糖誘導(dǎo)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激共同存在的可能性，及不同濃度APS對高糖的調(diào)控及其作用機制，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器 黃芪(北京同仁堂飲片責(zé)任有限公司，產(chǎn)品批號皖Y20050032)自制黃芪多糖，制備方法參照趙魯杭的提取方法[5]中水煎提取工藝的改良法與SephadexG-150柱層相配合提取，多糖含量測定參考文獻(xiàn)[6]的方法，細(xì)胞培養(yǎng)前使用0.22 μm無菌濾器過濾。

HepG2人肝癌細(xì)胞購自中國科學(xué)院典型培養(yǎng)物細(xì)胞庫，葡萄糖、DMSO、衣霉素(tunicamycin)(美國Sigma)，普通高糖、低糖和液體無糖DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(美國Invitrogen-GIBCO)，PCR引物(上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)公司合成)。

1.2 方法

1.2.1 HepG2人肝癌細(xì)胞培養(yǎng)：取HepG2人肝癌細(xì)胞接種于24孔板內(nèi)DMEM完全培養(yǎng)基)，培養(yǎng)基為含3%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基，每孔1 mL，培養(yǎng)條件為37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱。待細(xì)胞長滿后繼續(xù)培養(yǎng)48 h，進(jìn)行后續(xù)試驗。

1.2.2 建立高糖誘導(dǎo)的肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型：將對數(shù)期生長期的細(xì)胞接種到含3%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(FBS)的DMEM培養(yǎng)基中：30 mM高濃度葡萄糖[G30，30 mM高糖+]及45 mM高濃度葡萄糖[G45，45 mM 高糖+含3% FBS的DMEM培養(yǎng)基)]，同時設(shè)置陰性對照組[C，25 mM標(biāo)準(zhǔn)高糖+含3% FBS的 DMEM 培養(yǎng)基]，各組置37 ℃、5%CO2條件下分別培養(yǎng)5 h及陽性對照組衣霉素[Tm，10 μg/mL tunicamycin+含3% FBS的 DMEM培養(yǎng)基]置37 ℃、5%CO2條件下4 h處理細(xì)胞16 h，每組設(shè)置6個復(fù)孔。通過檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中X 盒結(jié)合蛋白l(X-box binding protein 1,XBP1)表達(dá)量評價高糖誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型。

1.2.3 APS對內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的肝細(xì)胞模型的影響：選取30 mM高糖誘導(dǎo)肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激模型作為研究對象，分別加入不同濃度的APS(50、100、200與400 μg/mL)，將細(xì)胞按5000～10000個/孔接種到96孔板中,每組設(shè)置6個復(fù)孔，置于37 ℃ 5%CO2條件下常規(guī)培養(yǎng)24 h后,棄上清。MTT法檢測APS對細(xì)胞增殖的影響：加入5 mg/mL MTT(用pH7.4PBS配制)20 μL/孔,再置37 ℃ 5%C02條件下4 h,棄去上清液,加入DMSO 200 μL/孔,混勻30 min后,在酶聯(lián)檢測儀(美國Bio Tek公司，型號ELx808)上570 nm波長處測吸光度值,計算各處理因素對肝細(xì)胞生長的影響,尋找對細(xì)胞不造成損傷的情況下APS的最佳濃度。

1.2.4 肝細(xì)胞核酸的提取及實時定量PCR反應(yīng)：采用Trizol法提取肝細(xì)胞RNA，引物設(shè)計，按照一步法RT-PCR反應(yīng)試劑盒要求稍作改動進(jìn)行操作。RT-PCR反應(yīng)體系為50 μL。具體組成如下：AWV/Tfi 5x反應(yīng)緩沖液10 μL；引物(上游及下游)5 μL；25 mM MgS042 μL，dNTP混合物(每種dNTP 10 mM)1 μL，Tfi DNA 聚合酶(5 U/μL)1 μL；RNA樣品10 μL；AWY 反轉(zhuǎn)錄酶(5 U/μL)1μL；無核酸酶水12 μL。RT-PCR實驗步驟：將反應(yīng)體系混勻→48 ℃反轉(zhuǎn)錄45 min→94 ℃滅活A(yù)WV活性后，引物變性2 min→循環(huán)開始(94 ℃變性30 s、退火1 min、68 ℃延伸2 min)40個循環(huán)，>68 ℃最終延伸7 min→4 ℃保存。200 μg/mLAPS對30 mM高糖處理后HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA剪切水平(PstⅠ消化法)與XBPlmRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響。

1.2.5 肝細(xì)胞核漿蛋白的提取及免疫印跡技術(shù)：細(xì)胞用PBS換液,在冰上加裂解液裂解,離心取蛋白沉淀，Lowry法測蛋白濃度。取20 μg蛋白于10%SDS-PAGE分離后,轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜。然后5%脫脂奶粉封閉硝酸纖維素膜lh,洗膜后加入兔抗人GSK3β一抗(購自Santa Cruze公司)(1:1000),4 ℃反應(yīng)過夜，次日洗膜后,加入1:2500辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗,室溫孵育1 h，加入ECL顯色劑，X片顯影用QualityOne圖象分析軟件(Bio-Rad公司),根據(jù)光密度定量分析。200 μg/mLAPS對30 mM高糖處理后HepG2細(xì)胞胞漿及細(xì)胞核內(nèi)GSK3的磷酸化表達(dá)檢測，選擇β-actin為內(nèi)對照。

1.3 實驗分組與處理

① 陰性對照組(C)：3%標(biāo)準(zhǔn)胎牛血清(FBS)的標(biāo)準(zhǔn)高糖 (25 mM) DMEM 培養(yǎng)基作用5 h作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激陰性對照細(xì)胞；②陽性對照組(Tm): 使用衣霉素(tunicamycin，10 μg/mL)處理細(xì)胞16 h作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激陽性對照細(xì)胞；③30 mM 高糖誘導(dǎo)組(G30)：3% FBS的30 mM 高糖DMEM培養(yǎng)液，作用5 h；④45 mM高糖誘導(dǎo)組(G45)：3% FBS的45 mM 高糖 DMEM培養(yǎng)液，作用5 h；⑤陰性對照+APS 處理組 (CA)：含200 μg/mLAPS 3%FBS的標(biāo)準(zhǔn)高糖 (25 mM)DMEM 培養(yǎng)基作用24 h；⑥陽性對照+APS 處理組(TA)：含200 μg/mLAPS 3%FBS的標(biāo)準(zhǔn)高糖 (25 mM)DMEM 培養(yǎng)基預(yù)處理24 h，更換培養(yǎng)基并加入tunicamycin(10 μg/mL)繼續(xù)處理細(xì)胞16 h；⑦高糖應(yīng)激+APS處理組(GA)：含200 μg/mLAPS 3%FBS 的高糖 (30mM)DMEM培養(yǎng)基預(yù)處理24 h，換高糖培養(yǎng)基繼續(xù)處理細(xì)胞5 h。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行實驗數(shù)據(jù)分析，正態(tài)計量資料組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高糖處理建立HepG2 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細(xì)胞模型

2.1.1 不同濃度高糖對HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA的剪切水平與轉(zhuǎn)錄水平的影響：與陰性對照組(C)比較，30 mM和45 mM高糖處理細(xì)胞5 h，XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平顯著升高(P<0.05)，尤其30 mM 高糖誘導(dǎo)組(G30)XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平顯著升高(P<0.05)，其作用與衣霉素處理組接近(見圖1、圖2)。后續(xù)試驗選擇30 mM高糖作為工作糖濃度進(jìn)一步研究APS的作用。

圖1 不同濃度高糖對HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA的剪切水平的影響(PstⅠ消化法，n=6)*P<0.05，與C組比較；#P<0.05，與G45組比較Fig.1 Effect of different concentrations of high glucose on shear levels of XBPlmRNA in HepG2 cells (Pst I digestion，n=6)*P<0.05，compared with group C；#P<0.05，compared with group G45

圖2 不同濃度高糖對HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響(n=6)*P<0.05，與C組比較；#P<0.05，與G45組比較Fig.2 Effect of different concentrations of high glucose on transcription levels of XBPlmRNA in HepG2 cells(n=6)*P<0.05，compared with group C；#P<0.05，compared with group G45

2.1.2 不同濃度高糖對HepG2胞漿及細(xì)胞核內(nèi)GSK3β的活性和核定位的影響：與陰性對照組(C)比較，30 mM高糖誘導(dǎo)組(G30)和45 mM高糖誘導(dǎo)組(G45)，胞漿內(nèi)GSK3β的磷酸化表達(dá)增強及核內(nèi)定位增強 (P<0.05)，尤其G30組GSK3β的磷酸化表達(dá)及核內(nèi)定位增強最明顯(P<0.05)，其作用與衣霉素處理組接近(見圖3)。

圖3 不同濃度高糖對HepG2細(xì)胞胞漿及細(xì)胞核內(nèi)GSK3β的磷酸化表達(dá)影響(n=6)*P<0.05，與C組比較；#P<0.05，與G45組比較Fig.3 Effect of different concentrations of high glucose on GSK3β phosphorylation expression in cytoplasm and nucleus of HepG2 cells(n=6)*P<0.05，compared with group C；#P<0.05，compared with group G45

2.2 不同濃度APS對HepG2細(xì)胞增殖的影響 MTT實驗結(jié)果提示，APS 在50～200 μg/mL范圍內(nèi)無明顯細(xì)胞毒性和促進(jìn)細(xì)胞增殖作用，而400 μg/mL 的APS輕度抑制細(xì)胞生長。因此后續(xù)試驗選擇最大有效濃度200 μg/mL對細(xì)胞進(jìn)行干預(yù)處理。見圖4。

圖4 不同濃度APS對HepG2細(xì)胞增殖的影響(MTT法，n=6)*P<0.05，與對照組相比Fig.4 Effect of different concentrations of APS on the proliferation of HepG2 cells (MTT，n=6)*P<0.05，compared with group C

2.3 200 μg/mL APS對高糖處理HepG2 細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的影響

2.3.1 200 μg/mL APS對HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA剪切水平與轉(zhuǎn)錄水平的影響：與C組相比，CA組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)標(biāo)志物XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平無顯著變化。GA組細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激細(xì)胞XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平顯著低于30 mM高糖誘導(dǎo)組(G30)(P<0.05)，但TA組與Tm組XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義，即APS對Tm 組的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激無顯著影響(見圖5、6)。

圖5 200 μg/mL APS對30 mM高糖處理后HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA的剪切水平的影響(n=6)*P<0.05，與C組比較；△P<0.05，與GA組比較Fig.5 Effect of 200 μg/mL APS on shear levels of XBPlmRNA in HepG2 cells after high glucose treatment of 30mM(n=6)*P<0.05，compared with group C；△P<0.05，compared with group GA

圖6 200 μg/mL APS對30 mM高糖處理后HepG2細(xì)胞內(nèi)XBPlmRNA的轉(zhuǎn)錄水平的影響(n=6)*P<0.05，與C組比較；△P<0.05，與GA組比較Fig.6 Effect of 200 μg/mL APS on transcription levels of XBPlmRNA in HepG2 cells after high glucose treatment of 30mM(n=6)*P<0.05，compared with group C；△P<0.05，compared with group GA

2.3.2 200 μg/mL APS對高糖處理HepG2細(xì)胞胞漿及核內(nèi)GSK3β 表達(dá)的影響：與G30組比較，GA組胞漿和胞核內(nèi)GSK3β9 位絲氨酸磷酸化水平顯著增加(P<0.05)，從而抑制GSK3β活性。但與Tm組比較，TA組胞漿和胞核內(nèi)GSK3β無顯著性變化，見圖7。

圖7 200 μg/mL APS對30 mM濃度高糖處理后HepG2細(xì)胞胞漿及核內(nèi)GSK3β 表達(dá)的影響(n=3)*P<0.05，與C組比較；△P<0.05，與GA組比較Fig.7 Effect of 200 μg/mL APS on GSK3β phosphorylation expression of in cytoplasm and nucleus of HepG2 cells after high glucose treatment of 30 mM(n=3)*P<0.05，compared with group C；#P<0.05，compared with group GA

3 討論

黃芪在我國的藥用迄今已有2000多年的歷史，傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為其具有增強機體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應(yīng)激、降壓和較廣泛的抗菌作用[6]，但表實邪盛，氣滯濕阻，食積停滯，癰疽初起或潰后熱毒尚盛等實證，陰虛陽亢者均須禁服。隨著現(xiàn)代醫(yī)藥科技的發(fā)展及體外實驗研究，黃芪中的藥用成分包括黃芪多糖及黃芪皂苷等對腫瘤具有抑制作用，在臨床應(yīng)用中聯(lián)合化療藥物等治療腫瘤可顯著提高療效并改善患者預(yù)后，但其具體作用機制尚無明確報道[7-8]。臧文華等[9]構(gòu)建人肝癌裸鼠原位移植瘤模型，同時給予黃芪-莪術(shù)配伍以及聯(lián)合順鉑處理，發(fā)現(xiàn)黃芪-莪術(shù)配伍對人肝癌裸鼠原位移植瘤的生長有抑制作用，且抑制作用與劑量有一定的正相關(guān)性，其機制可能與對HIF-1α、VEGF表達(dá)的抑制有關(guān)，與順鉑合用表現(xiàn)為協(xié)同增效和相加作用。陳卓等[10]研究發(fā)現(xiàn)黃芪多糖可顯著提高非小細(xì)胞肺癌患者放療后T細(xì)胞亞群，認(rèn)為黃芪多糖通過提高機體免疫力而增強非小細(xì)胞肺癌三維適形放射治療療效?；谶@些證據(jù)，目前臨床工作中黃芪包括APS在內(nèi)的提取物治療惡性腫瘤的應(yīng)用越來越廣泛，故純化其中抗腫瘤成分并闡明具體抗腫瘤機制對黃芪多糖的進(jìn)一步應(yīng)用具有重要意義。

為了明確高糖是否作為獨立的危險因素引起肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，本研究使用不同濃度高糖誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，30 mM高糖可作為體外工作濃度誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞出現(xiàn)明顯內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，其作用程度與衣霉素相似。在使用APS預(yù)處理細(xì)胞24 h后，肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)明顯減輕，APS治療組肝細(xì)胞XBP1的轉(zhuǎn)錄和剪切減少(均P<0.05)。

本研究結(jié)果顯示，與G組比較，GA組胞漿和胞核內(nèi)GSK3β磷酸化水平顯著增加(P<0.05)。推測GSK3β的活性和核定位改變是為了適應(yīng)體內(nèi)代謝需要的改變，特別是當(dāng)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)對體內(nèi)未折疊蛋白的處理不足時，GSK3β作為下游信號激酶參與調(diào)節(jié)細(xì)胞調(diào)亡、下調(diào)蛋白的合成以滿足能量代謝的需要。但是GSK3β活化的同時抑制胰島素信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，加重糖代謝紊亂的發(fā)生，這可能是GSK3β所介導(dǎo)的體內(nèi)一種代償?shù)绞Т鷥數(shù)倪^程。關(guān)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激時GSK3β活性和核轉(zhuǎn)位增強的具體機理還有待于進(jìn)一步研究?；诒狙芯康陌l(fā)現(xiàn)，推測APS抑制肝癌細(xì)胞增殖可能與其抑制GSK3β蛋白質(zhì)表達(dá)而降低其活性有關(guān)，這對闡明APS抑制腫瘤的作用機制具有重要價值。胰島素抵抗時肝臟GSK3β活性和核轉(zhuǎn)位增強伴隨肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)增強。而高糖作為獨立的誘導(dǎo)因素在體外不僅可引起肝細(xì)胞發(fā)生內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，同時本實驗也證實GSK3β 活性和核轉(zhuǎn)位隨內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)的活化而增強。

綜上所述，肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)促進(jìn)高糖情況下肝臟GSK3β的活性及核轉(zhuǎn)位。經(jīng)過APS處理后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的減輕也伴隨著GSK3β 活性和核轉(zhuǎn)位的抑制。本研究結(jié)果表明:APS 抑制GSK3β 的活性及核轉(zhuǎn)位在糖穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)中意義重大，而其活性和核轉(zhuǎn)位的調(diào)節(jié)與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的激活有關(guān)，2者在作用上的交叉和協(xié)同是引起高糖毒性的關(guān)鍵。

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(編校：王儼儼)

Antagonism of astragalus polysaccharide on activity and nuclear translocation of glycogen synthase kinase 3β involved in regulation of glucose homeostasis

XU Jun1, ZHANG Si-min1Δ, XUE Jun2, ZHANG Wan-li2, GUO Jian-rong2

(1.Department of Severe Medicine, The Children’s Hospital of Wuhan City, Wuhan 430016, China; 2.Cancer Center, Union Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430023, China)

ObjectiveTo observe the effect of astragalus polysaccharides (APS) on glucose homeostasis regulation and focus on glycogen synthase kinase 3 beta (GSK3 beta) activity and subcellular localization (nuclear translocation).MethodsHepG2 human hepatoma cells were cultured in vitro and treated with high glucose of different concentrations (30, 40 mM) to induce hepatocyte endoplasmic reticulum stress model, then acquire optimum operating concentration.The HepG2 cells were treated with APS of different concentrations (50, 100, 200, 400 μg/mL) to select the most effective concentration.The HepG2 cells were divided into seven groups with different treatment: negative control group (C), positive control group (Tm), 30 mM high glucose-induced group (G30), 45 mM high glucose-induced group (G45), negative control+APS group (CA), positive control+APS group (TA) and high glucose-induced+APS group (GA).Effect of APS at different concentrations on proliferation activity of HepG2 cells were detected by MTT assay, transcription and shear levels of XBPlmRNA in HepG2 cells by quantitative real-time PCR, and phosphorylation levels of GSK3β in cytoplasm and nucleus by immunoblotting techniques.ResultsThe optimum operating glucose concentration was 30 mM.The most effective APS concentration was 200 μg/mL.The transcription and shear levels of XBPlmRNA in HepG2 cells of GA group were lower than those of G30group (P<0.05), respectively, but there were no significant differences between TA and Tm group.The phosphorylation levels of GSK3β in cytoplasm and nucleus of GA group were higher than those of G group(P<0.05), respectively, but there were no significant differences between TA and Tm group.ConclusionAPS could improve hepatic steatosis, and its mechanism might be that APS inhibits the activity and nuclear localization of GSK3β, then alleviate endoplasmic reticulum stress.

astragalus polysaccharide; glycogen synthase kinase 3β; endoplasmic reticulum stress; HepG2 cells；glucose homeostasis

湖北省自然科學(xué)基金面上項目(2012FFB02423)

徐俊，男，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：兒童重癥疾病診斷與治療，E-mail：xj18571518088@163.com；張思敏，通訊作者，男，本科，住院醫(yī)師，研究方向：兒科重癥疾病診斷與治療，E-mail：1468578028@qq.com。

Q591.4

A

1005-1678(2015)06-0035-05