安 蕓 翟光喜

1 山東大學(xué)藥學(xué)院，山東省濟(jì)南市 250012； 2 菏澤醫(yī)學(xué)?？茖W(xué)校

過敏性鼻炎，又稱應(yīng)急反應(yīng)性鼻炎，是呼吸系統(tǒng)常見病，同時(shí)也是居民常見的4種“疑難雜癥”之一。西醫(yī)治療藥物對(duì)于過敏性鼻炎這種一系列因素造成的疾病只能起到緩解病情的作用，并不能從深處治療疾病，且存在很大的副作用，遠(yuǎn)期治療效果不明顯。而中醫(yī)治療是以辨證論治的原則，對(duì)于疾病的發(fā)病特點(diǎn)，結(jié)合環(huán)境變化，可以祛除病灶，達(dá)到治療效果。中藥制劑具有多組分、多治療、多途徑的特點(diǎn)，前景廣闊，本課題新研制的樸術(shù)顆粒即用于治療過敏性鼻炎。樸術(shù)顆粒處方中含五味中藥，本文對(duì)其提取工藝進(jìn)行研究。

1 材料

高效液相色譜儀（日本島津，LC－2010A）；白術(shù)、厚樸、陳皮購自亳州藥材市場(chǎng)，經(jīng)鑒定為正品；厚樸酚對(duì)照品（上海原葉生物公司）；和厚樸酚對(duì)照品（上海原葉生物公司）

2 方法

2.1 測(cè)定方法

2.1.1 厚樸酚與和厚樸酚的含量測(cè)定。色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：以用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇∶異丙醇∶水（36∶21∶36）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為294nm，流速1.0ml／min，柱溫35℃。

供試品溶液制備：精密稱量取相當(dāng)于1g生藥的提取液或濃縮膏，放入磨口錐形瓶中；加入25ml甲醇溶液，振搖1h，密封保存24h，濾過，取續(xù)濾液10ml加入50ml容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻。

對(duì)照品溶液制備：取厚樸酚與和厚樸酚對(duì)照品，精密稱重，加甲醇分別制成每1ml含厚樸酚40μg、和厚樸酚24μg的溶液。

2.1.2 黃芪甲苷的含量測(cè)定。色譜條件和系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)：以十八烷基硅烷鍵合相硅膠為填充劑，乙腈∶水（30∶70）為流動(dòng)相，蒸發(fā)光檢測(cè)器作為檢測(cè)器，漂移管溫度：105℃，載氣流速為2.7L／min。柱溫：30℃，以黃芪甲苷計(jì)理論塔板數(shù)不得少于4000。

供試品溶液制備：精密稱量取相當(dāng)于1g生藥的提取液或濃縮膏，裝入磨口具塞錐形瓶中，加入25ml甲醇；稱重，超聲波超聲30min，精密稱重補(bǔ)足重量；濾過，蒸干濾液，殘?jiān)?0ml水溶解，先用水飽和正丁醇進(jìn)行萃取3次，20ml／次，合并正丁醇液；再用氨試液萃取正丁醇液2次，30ml／次，正丁醇液蒸干，加甲醇溶液轉(zhuǎn)移到25ml容量瓶至刻度，搖勻。

對(duì)照品溶液的配制：取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱重，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。

2.1.3 得膏率測(cè)定。得膏率＝（干膏量／所取藥材總量）×100%。

2.2 初步工藝研究 中藥復(fù)方在臨床應(yīng)用時(shí)多以湯劑為主，因此需要對(duì)本處方進(jìn)行全處方全水煎煮和水煎煮醇沉方法，考慮處方中白術(shù)、陳皮等有效成分的性質(zhì)，因此設(shè)計(jì)50%乙醇提取進(jìn)行比較。

方法一：取處方1倍量，加水8倍量，煎煮2次，每次煎煮1.5h。8層紗布濾過，合并濾液。加熱濃縮至相對(duì)密度為1.12（60℃）。

方法二：取處方1倍量，加水8倍量，煎煮2次，每次煎煮1.5h，濾過，合并濾液，加熱濃縮至相對(duì)為1.05～1.10（60℃），加乙醇至純度為70%，放置24h，濾過，減壓回收乙醇至無醇味，備用。

方法三：取處方1倍量，加入8倍量50%乙醇進(jìn)行回流，回流2次，1.5h／次，濾過，合并濾液，減壓濃縮至無醇味，備用。

分別對(duì)工藝一、二、三進(jìn)行得膏率、有效成分轉(zhuǎn)移率測(cè)定、比較。

2.3 醇提工藝篩選

2.3.1 單因素考察－乙醇濃度條件篩選。處方中陳皮中橙皮苷、白術(shù)中蒼術(shù)酮、厚樸木質(zhì)素類等有效成分為極性很弱的物質(zhì)，因此采用乙醇進(jìn)行提取以實(shí)現(xiàn)提取完全，同時(shí)為節(jié)約生產(chǎn)成本，對(duì)提取所用乙醇濃度做單因素考察。方法：分別取處方中陳皮、白術(shù)、厚樸各1倍量，分別加50%乙醇溶液，60%乙醇溶液，70%乙醇溶液，80%乙醇溶液，各8倍量，加熱回流1h，提取2次，濾過，合并濾液?；厥找掖贾寥芤簾o醇味。減壓低溫濃縮至濃度為1g（生藥）／ml（相對(duì)密度1.10g／ml，60℃）得清膏。

取上述清膏，分別測(cè)定得膏率，按照厚樸酚與和厚樸酚含量測(cè)定方法測(cè)定厚樸酚與和厚樸酚含量。

2.3.2 多因素考察－正交試驗(yàn)。（1）正交試驗(yàn)方法：以提取次數(shù)（A）、提取溶劑量（B）、提取時(shí)間（C）為因素，設(shè)置三因素3水平正交試驗(yàn)L9（34），提取次數(shù)設(shè)置1、2、3次3個(gè)水平，提取溶劑量設(shè)置藥材量的6／4／2倍（6／4／2表示第1次6倍量，第2次4倍量，第3次2倍量）、8／6／4倍、10／8／6倍3個(gè)水平，提取時(shí)間設(shè)置1、1.5、2h3個(gè)水平。按照以上方法進(jìn)行試驗(yàn)，以厚樸酚與和厚樸酚總含量、得膏率為指標(biāo)，以數(shù)值權(quán)重方法進(jìn)行折算，公式為綜合評(píng)分＝（有效成分／表中有效含量max）×0.8＋（得膏率／最大得膏率）×0.2。計(jì)算平均值（K）和極差（R），進(jìn)行方差分析，得出最佳提取工藝。（2）正交試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證：分別取處方1倍量，按照直觀分析和方差分析得出的最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，以厚樸酚與和厚樸酚含量、得膏率為指標(biāo)，比較其差異程度。

3 結(jié)果

3.1 初步工藝研究試驗(yàn)結(jié)果 不同提取工藝得膏率分別是：工藝一為35.13%，工藝二為27.76%，工藝三為32.04%。不同提取工藝的有效成分轉(zhuǎn)移率見表1。

3.2 單因素考察試驗(yàn)結(jié)果 乙醇濃度篩選試驗(yàn)結(jié)果：乙醇濃度為50%、60%、70%、80%時(shí)，得膏率分別為28.45%、26.06%、25.94%、25.87%，厚樸酚與和厚樸酚總量分別為 0.41g、1.34g、1.37g、1.41g。

表1 不同提取工藝的有效成分轉(zhuǎn)移率比較（%）

3.3 多因素考察試驗(yàn)及方差分析結(jié)果 見表2、3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 方差分析結(jié)果

3.4 正交試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證 見表4。

表4 正交試驗(yàn)驗(yàn)證結(jié)果

4 討論

初步工藝研究結(jié)果顯示，傳統(tǒng)工藝即全方水提取得膏較高，全處方水提醇沉方法和全方50%醇提雖然使得處方得膏下降，但是處方中有效成分轉(zhuǎn)移率較低，得膏增加表明處方中原藥保留量很大，造成后期制粒底物量增加，單位質(zhì)量顆粒所載有效物質(zhì)減少，不符合現(xiàn)代中藥中“精”的原則，即精制的要求。

全處方傳統(tǒng)水煎煮得到的水液含有大量的糖類與樹膠，造成水液黏稠，同時(shí)方中白術(shù)的蒼術(shù)素等揮發(fā)油，陳皮中的橙皮苷，厚樸中厚樸酚與和厚樸酚提取率很低，造成有效物質(zhì)損失嚴(yán)重，故為了提高全方中非極性有效成分如揮發(fā)油、黃酮、木質(zhì)素等提取效果，應(yīng)采用中等濃度的乙醇進(jìn)行提取。黃芪等含有黃芪甲苷等水溶性較好的有效成分，為了提高其提取率，可以單獨(dú)采取水回流提取。茯苓藥材主要以多糖含量為主，多糖在水中溶解度較高，可采用水提。采用分提工藝可以達(dá)到降低得膏的目的，因此，針對(duì)本處方中不同藥材可以設(shè)計(jì)以下提取方法：白術(shù)、陳皮、厚樸采用中度濃度乙醇提??；雖黃芪和茯苓都是水提，為了降低得膏，黃芪可以采用水回流提取，茯苓采用水煎煮提取，本文僅對(duì)白術(shù)、陳皮、厚樸合提工藝進(jìn)行了篩選、研究。

單因素考察結(jié)果顯示，采用50%乙醇提取時(shí)，厚樸酚與和厚樸酚提取率很低，得膏率較高，不能實(shí)現(xiàn)有效成分煎出，且雜質(zhì)較多。采用60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇提取時(shí)，得膏率和有效成分含量相差不大，考慮生產(chǎn)成本，可采用60%乙醇作為提取溶劑。

多因素考察結(jié)果直觀分析，影響程度大小依次為RA＞RC＞RB，A（提取次數(shù)）為主要影響因素，B（提取溶劑量）、C（提取時(shí)間）為次要因素。同時(shí)A3＞A2＞A1，因此最優(yōu)條件為A3即提取3次；B2＞B3＞B1，B2為最優(yōu)條件即加入乙醇量分別為藥材量的8倍、6倍、4倍；C3＞C2＞C1，因此C3為最優(yōu)溶劑條件即提取時(shí)間為2h，通過直觀分析得出最佳提取工藝為A3B2C3即采用60%乙醇提取3次，加入乙醇量分別為藥材量的8倍、6倍、4倍，提取時(shí)間為2h／次。

方差分析結(jié)果顯示，因提取次數(shù)即因素A為顯著條件，因此提取次數(shù)選擇A3即提取3次，而B和C為次要因素，因此為了考慮成分與工作試驗(yàn)關(guān)系，提取溶劑倍量選擇B2即加入乙醇量分別為藥材量的8倍、6倍、4倍，提取時(shí)間選擇C2即提取時(shí)間為1.5h。通過方差分析得出最佳提取工藝為A3B2C2即采用60%乙醇提取3次，加入乙醇量分別為藥材量的8倍、6倍、4倍，提取時(shí)間為1.5h／次。

優(yōu)選最佳工藝A3B2C2與直觀分析最優(yōu)條件進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)得出結(jié)果差異不大，故考慮成本與時(shí)間，選擇最佳工藝為A3B2C2，即60%乙醇提取3次，加入乙醇量分別為藥材量的8倍、6倍、4倍，1.5h／次。

［1］尚海花，肖學(xué)鳳，廖茂梁，等.中藥治療過敏性鼻炎作用機(jī)制的研究進(jìn)展〔J〕.藥物評(píng)價(jià)研究，2010，33（6）：467.

［2］文潔，朱建梅，李捷，等.玉屏風(fēng)顆粒治療過敏性鼻炎的實(shí)驗(yàn)研究〔J〕.中成藥，2011，33（6）：934.

［3］楊娥，鐘艷梅，馮毅凡.白術(shù)化學(xué)成分和藥理作用的研究進(jìn)展〔J〕.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，28（2）：218.

［4］李曉芳，張健康，王慧鸞，等.陳皮的研究進(jìn)展〔J〕.江西中醫(yī)藥，2014，（3）：76－78.

［5］凌宗全.白術(shù)化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展〔J〕.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2013，32（35）：105－106.

［6］朱培芳，孫海林，李文軍，等.HPLC測(cè)定云厚樸中厚樸酚及和厚樸酚含量〔J〕.光譜實(shí)驗(yàn)室，2013，30（5）：2155－2156.

［7］鄭禮娟，秦昆明，蔡皓，等.多指標(biāo)正交試驗(yàn)優(yōu)選白術(shù)芍藥散提取工藝〔J〕.中國中藥雜志，2013，38（10）：1504.

［8］吳昊，宗志敏，張贛道.響應(yīng)面法優(yōu)化陳皮黃酮提取工藝的研究〔J〕.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（28）：13985－13987.

［9］李銳，陳中蘭，肖宏，等.厚樸中厚樸酚及和厚樸酚提取工藝的優(yōu)化研究〔J〕.中國藥業(yè)，2011，20（10）：47－48.