張先庚 曹冰 曹俊 龍芋君 謝汶倚 張輝 蔣曉靜

兩種創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙SD孕鼠造模方法的比較研究

張先庚 曹冰 曹俊 龍芋君 謝汶倚 張輝 蔣曉靜

目的 探討建立適用于SD孕鼠的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型的方法，為深入研究創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙的發(fā)病機(jī)制及調(diào)護(hù)干預(yù)提供科學(xué)依據(jù)。方法 將SD孕鼠隨機(jī)分為3組：低頻高強(qiáng)度組，高頻低強(qiáng)度組，空白對(duì)照組。前兩組采用不同的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙SD孕鼠造模方法，待SD孕鼠生產(chǎn)后，測(cè)量子代鼠第1天和第30天體質(zhì)量、身長(zhǎng)及翻身測(cè)試情況。結(jié)果 低頻高強(qiáng)度組體質(zhì)量、身長(zhǎng)值均小于高頻低強(qiáng)度組及空白對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；高頻低強(qiáng)度組和空白對(duì)照組體質(zhì)量、身長(zhǎng)值比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；3組翻身測(cè)試差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 SD孕鼠采用低頻高強(qiáng)度的造模方法更具有客觀性及可行性，可能更適合SD孕鼠的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙造模。

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙；應(yīng)激；動(dòng)物模型

創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)是指人體對(duì)創(chuàng)傷等嚴(yán)重應(yīng)激因素引起的一種延遲性、持續(xù)性心身反應(yīng)，是由威脅性、災(zāi)難性心理創(chuàng)傷導(dǎo)致延遲出現(xiàn)和長(zhǎng)期持續(xù)的心理、生理障礙[1]，其核心癥狀是創(chuàng)傷性記憶的不斷闖入導(dǎo)致恐懼、焦慮的一種精神創(chuàng)傷性事件，嚴(yán)重危害健康，對(duì)孕婦尤為突出。創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙作為一種精神創(chuàng)傷性事件后高發(fā)的、后果嚴(yán)重的精神疾病，其發(fā)病率高達(dá)20%，約1/3的患者終生不愈，1/2以上的患者常伴有物質(zhì)濫用和其他精神障礙，中位緩解期為14年[4-5]。其發(fā)生率高，嚴(yán)重影響患者身心健康，造成巨大社會(huì)負(fù)擔(dān)，已經(jīng)日益引起世界各國(guó)政府和軍隊(duì)的重視。作為研究PTSD的一種有效手段，動(dòng)物模型的建立一直為研究者所重視，適用于SD孕鼠的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙模型也仍有待探索。

目前創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙大鼠模型的方法各異[2]，其中單次延長(zhǎng)應(yīng)激(single prolonged stress，SPS)為國(guó)際公認(rèn)的大鼠PTSD造模方法之一。對(duì)于SD孕鼠的特殊性，本研究在將SPS法刺激強(qiáng)度減半，頻率提升，探索兩種不同造模方法對(duì)子代鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄鼠選用90日齡，體質(zhì)量350～400 g，雌鼠選用80～90日齡，體質(zhì)量為270～310 g，均無生育史。實(shí)驗(yàn)前置SD大鼠于室內(nèi)適應(yīng)環(huán)境1周，晝夜交替自然采光，室溫20～25℃，濕度40%～70%。

1.1.2 儀器 天平秤，直尺，自制束縛器，游泳缸，秒表等。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 將SD孕鼠放置于標(biāo)準(zhǔn)鼠籠中飼養(yǎng)，孕期第0天至第6天不予任何干預(yù)，孕中期即孕7 d隨機(jī)分為空白對(duì)照組、低頻高強(qiáng)度組、高頻低強(qiáng)度組。低頻高強(qiáng)度組SD孕鼠采用SPS法，即禁錮2 h后立即強(qiáng)迫游泳20 min(水深40 cm，水溫25℃)，每天干預(yù)1次，連續(xù)7 d；高頻低強(qiáng)度組SD孕鼠則禁錮1 h后，立即強(qiáng)迫游泳10 min(水深25 cm，水溫25 ℃)，每天干預(yù)2次，連續(xù)7 d。

1.2.2 觀察指標(biāo)及測(cè)定 測(cè)量子代鼠出生后第1天翻身情況；各組隨機(jī)選取子代鼠12只，測(cè)量第1天和第30天身長(zhǎng)、體質(zhì)量。身長(zhǎng)測(cè)量即將子代鼠平放桌上，背面向上，使身體伸直，用直尺量取鼠頭至鼠尾根部的長(zhǎng)度，單位以厘米(cm)計(jì)算。體質(zhì)量測(cè)量采用電子天平，以克(g)計(jì)數(shù)[3]。對(duì)各組新生子代鼠出生當(dāng)天均參與翻身測(cè)試，翻身測(cè)試是將子代鼠四腳朝上，30 s內(nèi)翻身成功記為陽性。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理。計(jì)量資料若滿足正態(tài)性和方差齊性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以±s)表示，組間采用單因素方差分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；方差不齊，采用Tamhane's T2法，計(jì)數(shù)資料采用χ2分析。

2 結(jié)果

2.1 造模方法對(duì)子代鼠體質(zhì)量的影響(表1)

表1 各組子代鼠體質(zhì)量比較±s，g，n＝12)

表1 各組子代鼠體質(zhì)量比較±s，g，n＝12)

注：#P為與空白對(duì)照組比較；*P為與高頻低強(qiáng)度組比較；&P為與高頻低強(qiáng)度組比較

組別 第1天 第30天 P1 P1 P30 P30低頻高強(qiáng)度組 5.99±0.39 66.11±9.30 0.002* 0.000# 0.000* 0.000#高頻低強(qiáng)度組 6.30±0.45 75.02±5.21 0.002& 0.265# 0.000& 0.187#空白對(duì)照組 6.40±0.39 78.35±10.09 0.000& 0.265* 0.000& 0.187*

從表1可見，3組子代鼠第1天及第30天體質(zhì)量比較，低頻高強(qiáng)度組＜高頻低強(qiáng)度組＜空白對(duì)照組，低頻高強(qiáng)度組與高頻低強(qiáng)度組及空白對(duì)照組兩組體質(zhì)量比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；高頻低強(qiáng)度組與空白對(duì)照組體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

2.2 造模方法對(duì)子代鼠身長(zhǎng)的影響(表2)

表2 各組子代鼠身長(zhǎng)比較(±s，cm，n＝12)

表2 各組子代鼠身長(zhǎng)比較(±s，cm，n＝12)

注：#P為與空白對(duì)照組比較；*P為與高頻低強(qiáng)度組比較；&P為與高頻低強(qiáng)度組比較

組別 第1天 第30天 P1 P1 P30 P30低頻高強(qiáng)度組 5.06±0.15 12.47±0.67 0.000* 0.000# 0.005* 0.000#高頻低強(qiáng)度組 5.25±0.16 12.88±0.38 0.000& 0.984# 0.005& 0.092#空白對(duì)照組 5.26±0.24 13.06±0.31 0.000& 0.984* 0.000& 0.092*

從表2可見，3組子代鼠第1天及第30天身長(zhǎng)比較，低頻高強(qiáng)度組＜高頻低強(qiáng)度組＜空白對(duì)照組，低頻高強(qiáng)度組與高頻低強(qiáng)度組及空白對(duì)照組兩組身長(zhǎng)比較，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；高頻低強(qiáng)度組與空白對(duì)照組身長(zhǎng)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

2.3 造模方法對(duì)子代鼠翻身能力的影響(表3，圖1) 如表3所示，對(duì)各組新生子代鼠出生當(dāng)天均參與翻身測(cè)試，其中低頻高強(qiáng)度組共102只，高頻低強(qiáng)度組145只，空白對(duì)照組154只。3組翻身測(cè)試結(jié)果，采用卡方檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α＝0.05。

2.4 各組子代鼠翻身成功率對(duì)比(表4)

表3 各組子代鼠翻身測(cè)試結(jié)果

表4 各組子代鼠翻身成功率

圖1 各組子代鼠翻身測(cè)試比較

如圖1所示，低頻高強(qiáng)度組、高頻低強(qiáng)度組以及空白對(duì)照組3組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低頻高強(qiáng)度組＜高頻低強(qiáng)度組＜空白對(duì)照組。

3 討論

3.1 尋找適合SD孕鼠PTSD造模方法，深入研究PTSD的發(fā)病機(jī)制及對(duì)子代生長(zhǎng)發(fā)育影響 有研究者對(duì)2008年汶川地震前后的13 003例新生兒進(jìn)行了一系列調(diào)查，結(jié)果發(fā)現(xiàn)震后的新生兒出生率較震前下降了4.29%，而早產(chǎn)兒的比率由震前的5.63%增長(zhǎng)到震后的7.41%，且新生兒的出生缺陷由震前的0.99%明顯升高到震后的1.18%[6]。對(duì)SD大鼠而言，當(dāng)時(shí)的地震也降低了交配和懷孕[7]。同期進(jìn)行的另一項(xiàng)隨訪研究表明，地震后18個(gè)月，震區(qū)孕婦仍具有較高的PTSD發(fā)病率[8]。也有相關(guān)研究數(shù)據(jù)表明，孕期應(yīng)激對(duì)子代也具有較為長(zhǎng)遠(yuǎn)的負(fù)面影響，例如，孕期暴露于應(yīng)激條件下可使母代妊娠周期縮短[9-10]，子代出生體質(zhì)量下降、可出現(xiàn)認(rèn)知或情感障礙(如焦慮，抑郁，注意力缺陷，學(xué)習(xí)能力下降等)[11]；并對(duì)子代的神經(jīng)行為發(fā)育有著長(zhǎng)期的影響，如軀體感覺運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)功能障礙、記憶力減退等[12]。因此，PTSD消耗著巨大的醫(yī)療資源和社會(huì)資源，患者多伴有失業(yè)、家庭不穩(wěn)定、健康等問題，具有嚴(yán)重的社會(huì)危害性，已引起了全社會(huì)的關(guān)注。因此尋找一種適合孕鼠的PTSD造模方法，為深入研究PTSD影響子代生長(zhǎng)發(fā)育等各方面的機(jī)制進(jìn)行研究，已成為一個(gè)迫切需要解決的科學(xué)與社會(huì)問題。

3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示空白對(duì)照組及高頻低強(qiáng)度組的子代鼠在體質(zhì)量以及身長(zhǎng)的身長(zhǎng)發(fā)育方面，其結(jié)果均優(yōu)于低頻高強(qiáng)度組，體質(zhì)量、身長(zhǎng)分布趨勢(shì)為：低頻高強(qiáng)度組＜高頻低強(qiáng)度組＜空白對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；但在高頻低強(qiáng)度組與空白對(duì)照組兩組比較中，子代鼠生長(zhǎng)發(fā)育均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。3組翻身測(cè)試結(jié)果雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但由表4可得知，各組翻身成功率，低頻高強(qiáng)度組為88.2%，高頻低強(qiáng)度組為92.4%，空白對(duì)照組為96.1%，低頻高強(qiáng)度組＜高頻低強(qiáng)度組＜空白對(duì)照組。綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，可能與高頻低強(qiáng)度組的造模方法刺激強(qiáng)度未能達(dá)到PTSD造模標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)，故未與空白對(duì)照組以及低頻高強(qiáng)度產(chǎn)生差異。然而相對(duì)高頻低強(qiáng)度組而言，低頻高強(qiáng)度組的刺激強(qiáng)度達(dá)到PTSD閾值，因此其子代鼠在生長(zhǎng)發(fā)育方面比其他兩組較為滯后，子代鼠因PTSD損傷較為嚴(yán)重而產(chǎn)生的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異較明顯。由此可見，SD孕鼠采用低頻高強(qiáng)度的造模方法更具有客觀性及可行性，可能更適合SD孕鼠的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙造模。

本研究用兩種不同的造模方法重點(diǎn)對(duì)孕中期母鼠進(jìn)行PTSD造模以及子代鼠的生長(zhǎng)發(fā)育方面進(jìn)行探討，在造模方法以及對(duì)子代鼠檢測(cè)方面具有一定的局限性。在以后的研究中力求更深入探索適用于不同妊娠階段SD孕鼠PTSD造模方法，以及子代鼠各生長(zhǎng)階段的生長(zhǎng)發(fā)育情況，并擴(kuò)展子代鼠的檢測(cè)范圍，包括行為測(cè)試及神經(jīng)生物學(xué)檢測(cè)、遺傳機(jī)制等。進(jìn)一步探索適合SD孕鼠的PTSD造模，為深入研究PTSD發(fā)病機(jī)制以及對(duì)子代遺傳影響研究具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

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Objective To probe and establish suitable model replicating methods of pregnant SD rats with post-traumatic stress disorder，so as to provide scientific basis for intensive study on pathogenesis and nursing intervention of post-traumatic stress disorder.Methods Pregnant SD rats were randomly divided into three groups：group of low frequency and high intensity，group of high frequency and low intensity，and blank control group.The first two groups adopted different model replicating methods of pregnant SD rats with post-traumatic stress disorder.After production of pregnant SD rats，the offspring rats were measured in terms of body mass，body length，and turn-over test on the 1st day and the 30th day.Results The body mass and body length in the group of low frequency and high intensity were lower than those in the group of high frequency and low intensity，and blank control group，with differences of statistical significance(P＜0.05).The comparison of body mass and body length between the group of high frequency and low intensity and the blank control group showed differences without statistical significance(P＞0.05).Turn-over tests among the three groups had no difference of statistical significance(P＞0.05).Conclusion The model replicating method of low frequency and high intensity for pregnant SD rats is more objective and feasible，which is more suitable for pregnant SD rats modeling of post-traumatic stress disorder.

Post-traumatic stress disorder；Stress；Animal model

2015-03-09)

1005-619X(2015)04-0680-03

10.13517/j.cnki.ccm.2015.07.003

611137 成都中醫(yī)藥大學(xué)護(hù)理學(xué)院

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81373710)；四川省教育廳資助項(xiàng)目(13ZA0273)