周 湧，黃少隆，王杰敏，楊衛(wèi)東，江俊兵

（東莞市第五人民醫(yī)院檢驗科，廣東東莞523905）

金黃色葡萄球菌，尤其是耐甲氧西林金黃色葡萄球菌、多重耐藥菌株所導致的感染死亡人數(shù)不斷增加［1］，傳統(tǒng)抗菌藥物治療已經(jīng)難以應對日益嚴峻的挑戰(zhàn)［2］，這迫使研究人員必須努力尋求新型的抗菌藥物。云南白藥是我國最著名的中藥之一，由多種中草藥植物組合而成［3］，即使不需要無菌條件保存，直接將其涂抹于傷口上也無需擔心引起感染。因此，筆者推測，云南白藥可能具有抑制金黃色葡萄球菌毒力的作用。本研究通過觀察云南白藥對金黃色葡萄球菌溶血現(xiàn)象和血漿凝固現(xiàn)象的影響，探討了云南白藥與金黃色葡萄球菌毒力表達間的內(nèi)在聯(lián)系。

1 材料與方法

1.1 材料 金黃色葡萄球菌標準菌株（ATCC29213）；云南白藥為云南白藥集團股份有限公司生產(chǎn)；哥倫比亞血瓊脂培養(yǎng)基購自廣州迪景微生物科技有限公司；無菌注射用水為安徽雙鶴藥業(yè)有限責任公司產(chǎn)品；卡尺（浙制01010235號）；人血漿由本研究的志愿者提供。

1.2 方法

1.2.1 取80g云南白藥（藥粉）溶于500mL的無菌水注射用水中，放于搖床上振蕩，24h后離心取上清液，此時上清液濃度為16%。將16%的藥液分別配制為8%、4%、2%的藥液備用。

1.2.2 取5 個9cm 血平板，編號1～5。將16%、8%、4%、2%的藥液各取200μL 加于1～4 號平板上，5 號平板加200 μL無菌注射用水，用無菌棉簽涂布均勻，待干。

1.2.3 金黃色葡萄球菌ATCC29213轉(zhuǎn)種培養(yǎng)24h后，配制為0.5麥氏濁度單位（MCF）的菌液。用接種針在5個含不同藥液濃度血平板上進行點種，24h后觀察并測量溶血環(huán)。重復以上試驗10次以減少誤差。

1.2.4 取試管加入3mL 注射用水和1mL 血漿，配成1∶4血漿備用。取5個不同濃度藥液作用的金黃色葡萄球菌分別用0.1MCF的菌液加20μL于備用血漿中，37℃溫育24h，觀察凝固現(xiàn)象，測凝固物的高度。重復以上試驗10 次以減少誤差。

1.3 統(tǒng)計學處理 采用SSPS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，組間比較用方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié) 果

2.1 云南白藥對金黃色葡萄球菌溶血環(huán)直徑的影響 不同濃度的云南白藥藥液對金黃色葡萄球菌的溶血作用效果不同。16%、8%、4%、2%、0%的藥液作用后的溶血環(huán)直徑分別為（2.97±0.39）、（5.00±0.53）、（6.03±0.25）、（6.51±0.25）、（7.15±0.30）mm，見表1。在16%的藥液作用下，基本上不出現(xiàn)溶血環(huán)，溶血直徑為菌落直徑。隨著藥液濃度的下降，溶血環(huán)隨之增大，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 不同濃度云南白藥作用后金黃色葡萄球菌的溶血環(huán)直徑（mm

表1 不同濃度云南白藥作用后金黃色葡萄球菌的溶血環(huán)直徑（mm

藥物濃度（%） 藥液作用后溶血環(huán)直徑0 7.15±0.30 2 6.51±0.25 4 6.03±0.25 8 5.00±0.53 16 2.97±0.39

2.2 云南白藥對金黃色葡萄球菌血漿凝固物高度的影響 在不同濃度的云南白藥藥液作用下，金黃色葡萄球菌對血漿凝固現(xiàn)象的影響沒有一定的規(guī)律性，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同濃度云南白藥作用后金黃色葡萄球菌的血漿凝固物高度（mm）

3 討 論

抗菌藥物是目前臨床治療細菌感染的首選方法，但易導致耐藥菌的產(chǎn)生。毒力是細菌致病的前提，但不是細菌生長的必要條件。抑制細菌毒力既能控制細菌感染，又不對細菌生長產(chǎn)生選擇壓力，從而可以避免引發(fā)耐藥性的風險，因此被認為是新型抗菌藥物研發(fā)的主要方向之一［4］。有研究表明，細菌的大部分毒力都受群體效應（QS）系統(tǒng)調(diào)控［5］，通過干擾QS的正常調(diào)控可能減弱甚至抑制細菌毒力表達，所以QS系統(tǒng)抑制劑（QSI）正成為抗菌藥物研究領(lǐng)域的一大熱點［6］。研究表明，許多長久以來廣泛使用的藥用和可食性植物，如田七、石榴和白茅等，被證明能夠抑制QS 系統(tǒng)從而抵抗毒力活性和減弱毒性［7－8］，具有止血、止痛等功效。云南白藥是我國最著名的中藥之一，由多種中草藥植物組合而成［3］，具有活血、消腫的功效，即使不需要無菌條件保存，直接將云南白藥涂抹于傷口上也無需擔心引起感染。在過去的100多年里沒有任何資料記載云南白藥具有殺菌或抑菌作用。目前，云南白藥已廣泛用于各種出血證，有少數(shù)研究報道云南白藥輔助治療急性痢疾和幽門螺桿菌相關(guān)性十二指腸潰瘍效果理想［9－10］。本研究表明，云南白藥可能具有抑制QS活性并導致β－溶血素釋放減少，但云南白藥是如何抑制金黃色葡萄球菌QS的活性導致毒力減弱的仍有待進一步探討。國內(nèi)已有報道，云南白藥治療后引起溶血反應［11］，云南白藥的成分中含有劇毒成分，本研究也發(fā)現(xiàn)用云南白藥的藥液配制血平板時，云南白藥本身就具有溶血作用，這也是沒有將藥液直接溶于瓊脂中來配制血平板的原因。

本研究表明，云南白藥藥液對多金黃色葡萄球菌的溶血能力有著較強的抑制作用，而對其血漿的凝固作用影響較小且沒有呈一定的規(guī)律性，不同藥液濃度間的差別也不明顯。這可能因為金黃色葡萄球的溶血素與凝固酶這兩種毒力表達機制不同［12］。同時，云南白藥對多金黃色葡萄球的生長過程也有存在著一定的影響。本研究發(fā)現(xiàn)，濃度越高的藥液作用下的菌落直徑越小，形狀扁平多樣不規(guī)則與正常菌落規(guī)整圓形的露滴狀有著明顯差異。因此筆者推測，雖然云南白藥沒有直接殺菌的作用，但能在一定情況下導致細菌生長不良。

在16%藥液作用下，菌落沒有出現(xiàn)溶血環(huán)，只在菌落邊緣出現(xiàn)一條透光邊，說明在此濃度下金黃葡萄球溶血素的產(chǎn)生受到抑制程度最大。隨著濃度的降低，溶血環(huán)也隨之擴大，2%濃度時菌落形態(tài)已經(jīng)與正常相近，溶血環(huán)直徑差別最小。而凝固酶試驗中，云南白藥的作用效果不明顯可能因為毒力的表達機制不同，而云南白藥并不能干擾這個機制的表達。其次，在藥液的作用下，菌落的形態(tài)發(fā)生了變化，可能對其細胞壁造成了破壞，使得菌落表面變得濕潤扁平，在平板上培養(yǎng)過程中凝固酶已經(jīng)大量的釋放出來，釋放的量受時間、溫度還有藥液等許多因素影響，因此血漿凝固現(xiàn)象沒有呈一定的規(guī)律性。

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