陳 佩， 王奇軍， 羅建平

(寧波市鄞州人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江寧波315040)

2007年針對(duì)急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的文件［1］指出:如果心肌肌鈣蛋白(cardiac troponin，cTn)檢測(cè)值高于參考區(qū)間第99百分位值［要求檢測(cè)方法不精密度(CV)在第99百分位值處≤10%］，并有相應(yīng)的臨床癥狀或心電圖的改變，可考慮診斷為AMI。隨著臨床應(yīng)用需求和科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，cTn檢測(cè)方法不斷更新［2］。我們參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)評(píng)價(jià)方案對(duì) VIDAS熒光免疫分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)VIDAS)檢測(cè)cTnI的性能進(jìn)行了分析驗(yàn)證。

一、材料與方法

1.對(duì)象 (1)疑似AMI組:收集寧波市鄞州人民醫(yī)院以胸痛入院的疑似或確診AMI患者新鮮樣本46例，要求無(wú)溶血、黃疸、脂濁;(2)表面健康人組:收集寧波市鄞州人民醫(yī)院常規(guī)健康體檢者20名，男12名，女8名，年齡18～78歲，實(shí)驗(yàn)室及心電圖檢查均正常，無(wú)急性炎癥，半年內(nèi)均無(wú)輸血和大手術(shù)史，排除心腦血管疾病。

2.儀器與試劑 VIDAS及原裝配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品。DXI800化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(簡(jiǎn)稱(chēng)DXI800)及原裝配套試劑、校準(zhǔn)品，BIO-RAD心肌標(biāo)志物質(zhì)控品。

3.精密度評(píng)估 參考CLSI EP5-A2文件［3］，自配低、高2個(gè)濃度混合血清(cTnI濃度為0.56和16.08 ng/mL)，－20℃凍存。每天測(cè)定2批，2批間隔＞2 h，每批重復(fù)測(cè)定2次，連續(xù)測(cè)定20 d，計(jì)算批內(nèi)、批間檢測(cè)值的均值()、標(biāo)準(zhǔn)差(s)及變異系數(shù)(CV)。

4.線性范圍 參考CLSI EP6-A文件［4］，選取cTnI高值(27.83 ng/mL)和低值(0.01 ng/mL)血清各1 份，按5∶0、4∶1、3∶2、2∶3、1∶4、0∶5 的比例混合，制備成6個(gè)濃度梯度的樣品，每個(gè)樣品隨機(jī)重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算，將與理論值做直線回歸。

5.干擾實(shí)驗(yàn) 參考CLSI EP7-A2文件［5］，在低(0.08 ng/mL)、高(0.80 ng/mL)2 個(gè)濃度樣本中分別添加血紅蛋白(hemoglobin，Hb)、總膽紅素(total bilirubin，TBil)、甘油三酯(triglyceride，TG)配成一定濃度，每個(gè)濃度測(cè)定3次，計(jì)算，以偏差＜±10%為評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)。

6.方法學(xué)比較 參考CLSI EP9-A2文件［6］，用DXI800(X)和VIDAS(Y)同時(shí)檢測(cè)40份新鮮樣本，對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行線性回歸分析，評(píng)價(jià)兩者相關(guān)性。

7.參考區(qū)間驗(yàn)證 參照 CLSI C28-A2文件［7］，用20個(gè)表面健康體檢者標(biāo)本，對(duì)參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證。如2個(gè)以下檢測(cè)值在參考區(qū)間外，則該參考區(qū)間可以接受。

8.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 Microsoft Excel 2007、SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析?；貧w分析采用線性回歸，相關(guān)分析采用Pearson相關(guān)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1.質(zhì)量控制 VIDAS和DXI800均處于良好的受控狀態(tài)。

2.精密度評(píng)估 VIDAS測(cè)定2個(gè)濃度混合血清的批內(nèi)、批間CV均低于廠商說(shuō)明書(shū)所提供的CV。見(jiàn)表1。

3.線性范圍分析 不同稀釋比例cTnI測(cè)定結(jié)果及理論結(jié)果見(jiàn)表2。當(dāng)cTnI濃度為0.01～27.83 ng/mL時(shí)線性良好，偏倚較小;直線方程為Y=0.997X－0.330，R2=0.999，P＜0.001。見(jiàn)圖1。

表1 cTnI方法批內(nèi)、批間檢測(cè)不精密度

表2 cTnI線性測(cè)定結(jié)果 (ng/mL)

圖1 VIDAS測(cè)定血清cTnI的線性范圍

4.干擾實(shí)驗(yàn) 當(dāng)TG＜14 mmol/L、TBil＜684 μmol/L、Hb＜10 g/L時(shí)對(duì)高、低2個(gè)濃度血清樣本cTnI檢測(cè)結(jié)果的干擾均＜±10%，相應(yīng)濃度的干擾物對(duì)上述兩個(gè)樣本的cTnI檢測(cè)能力無(wú)明顯影響。

5.方法學(xué)比較 兩種檢測(cè)系統(tǒng)40份樣本檢測(cè)結(jié)果比對(duì)的回歸方程為Y=0.451X+0.158，R2=0.959。兩種檢測(cè)系統(tǒng)的相關(guān)性良好(P＜0.001)。見(jiàn)圖2。

圖2 VIDAS熒光免疫分析儀和DXI800檢測(cè)血清cTnI結(jié)果比對(duì)

6.參考區(qū)間驗(yàn)證 20例表面健康者血清cTnI檢測(cè)結(jié)果均在廠商給定的參考區(qū)間內(nèi)，故采用0.01～0.11 ng/mL作為本實(shí)驗(yàn)室的參考區(qū)間。

三、討論

VIDAS熒光免疫分析儀是由免疫夾心法和酶聯(lián)熒光法組成的檢測(cè)系統(tǒng)，由一個(gè)試劑條和一個(gè)固相包被針組成，全封閉式、自動(dòng)化檢測(cè)，無(wú)攜帶交叉污染。

性能評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)顯示VIDAS測(cè)定2個(gè)濃度樣本的批內(nèi)、批間精密度均低于廠商說(shuō)明書(shū)提供的CV。cTnI濃度在0.01～27.83 ng/mL范圍內(nèi)線性良好，偏倚較小。Hb＜10 g/L、TBil＜684 μmol/L、TG＜14 mmol/L對(duì)低、高2個(gè)濃度樣本的檢測(cè)結(jié)果均無(wú)干擾。與DXI800的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，回歸方程為Y=0.451X+0.158，R2=0.959，兩種檢測(cè)系統(tǒng)相關(guān)性良好(P＜0.001);但檢測(cè)結(jié)果差異較大。分析其原因，可能是因?yàn)閮煞N檢測(cè)系統(tǒng)是建立在不同的技術(shù)平臺(tái)上，由于不同抗體免疫反應(yīng)性的差異和標(biāo)準(zhǔn)化的因素，使得同一樣本的檢測(cè)值差異較大。因此，本實(shí)驗(yàn)室對(duì)cTnI項(xiàng)目在檢驗(yàn)報(bào)告單上注明了檢測(cè)儀器，并建立了各自的參考區(qū)間。20名表面健康者血清cTnI檢測(cè)結(jié)果均在廠商提供的參考區(qū)間內(nèi)。

綜上所述，VIDAS檢測(cè)血清cTnI精密度、線性、抗干擾性、相關(guān)性均符合臨床檢驗(yàn)要求，標(biāo)本用量少，操作簡(jiǎn)便，反應(yīng)快速，熒光活性穩(wěn)定性好，儀器設(shè)備小巧，尤其適于急診快速檢測(cè)。

［1］Thygesen K，Alpert JS，White HD，etal.Universal definition of myocardial infarction［J］.Circulation，2007，116(22):2634-2653.

［2］宋凌燕，吳炯，郭瑋.高敏感心肌肌鈣蛋白檢測(cè)方法的臨床應(yīng)用［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2010，25(8):664-668.

［3］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods;approved guideline-second edition［S］.EP5-A2，CLSI，2004.

［4］Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearity of quantitative measurement procedures:a statistical approach;approved guideline［S］.EP6-A，CLSI，2003.

［5］Clinical and Laboratory Standards Institute.Interference testing in clinical chemistry;approved guideline-second edition［S］.EP7-A2，CLSI，2005.

［6］Clinical and Laboratory Standards Institute.Method comparison and bias estimation using patient samples;approved guideline-second edition［S］.EP9-A2，CLSI，2010.

［7］Clinical and Laboratory Standards Institute.How to define and determine reference intervals in the clinical laboratory;approved guideline second edition［S］.C28-A2，CLSI，2010.