李浩錚，王永輝，許凱霞，賈宇平，劉仕琦，李俊蓮

（山西中醫(yī)學(xué)院，山西太原 030024）

肝氣郁滯證是由于肝的疏泄功能異常，疏泄不及而致氣機(jī)郁滯所表現(xiàn)的證候，簡稱肝郁證。臨床表現(xiàn)為情志抑郁、急躁易怒、喜嘆息、胸脅或少腹脹滿竄痛等。隨著社會的發(fā)展及競爭壓力的增加，肝氣郁滯的人群在不斷上升。柴胡疏肝散是治療肝氣郁滯證的重要代表方劑，由柴胡、陳皮、川芎、香附、枳殼、芍藥、甘草組成，具有疏肝行氣、活血止痛之功。本研究通過對大鼠進(jìn)行鼠籠水平震蕩、冰水游泳、拍打、懸尾、繩子捆綁四肢等綜合方法建立肝郁模型，用柴胡疏肝散灌胃對肝郁模型大鼠進(jìn)行干預(yù)，以2個(gè)與情志密切相關(guān)的因子一氧化氮（NO）與5-羥色胺（5-HT）作為主要檢測指標(biāo)，以期為柴胡疏肝散的藥理作用提供進(jìn)一步的現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 清潔級SD大鼠30只，雌雄各半，質(zhì)量180～220g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，合格證號SCXK（京）2009-0017。

1.1.2 藥物與試劑 將柴胡疏肝散（陳皮醋炒、柴胡各 6g，川芎、香附、枳殼麩炒、芍藥各 4.5g，炙甘草 1.5g，均購自北京同仁堂，經(jīng)山西中醫(yī)學(xué)院中藥系王兵老師鑒定為正品）。方中各中藥浸泡20min，水煎，待煮沸15min后，煎液3層紗布過濾。二煎煎沸15min，過濾法同上，合并2次煎液，于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮成1g/L水煎液。氯化鈉（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，產(chǎn)品批號：20110126），大鼠NO酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）試劑盒（美國R&D公司，上海創(chuàng)賽生物技術(shù)有限公司進(jìn)口分裝，批號：E-30907），大鼠5-HT ELISA試劑盒（美國R&D公司，上海創(chuàng)賽生物技術(shù)有限公司進(jìn)口分裝，批號：E-30325）。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 手提式高速分散器（寧波新芝生物科技股份有限公司），Versa Max連續(xù)波長酶標(biāo)儀（美國MD公司），DHP-9162電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海-恒豐科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 分組與給藥 將大鼠隨機(jī)分為3組，分別為空白組、模型組、治療組，每組10只，雌雄各半?？瞻捉M每天按3.5g/kg灌胃蒸餾水，模型組每天進(jìn)行刺激并灌胃蒸餾水；治療組每天對其進(jìn)行刺激并按3.5g/kg灌胃柴胡疏肝散。2w后進(jìn)行指標(biāo)檢測。

1.2.2 肝郁模型建立方法 將大鼠在光線自然、安靜的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境里適應(yīng)性喂養(yǎng)7d。通過對大鼠進(jìn)行鼠籠水平震蕩、冰水游泳、拍打、懸尾、繩子捆綁四肢等建立肝郁模型。將上述5種刺激隨機(jī)安排到14d內(nèi)，每天1種刺激，每種刺激平均約出現(xiàn)3次。同種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，以使動物不能預(yù)料刺激的發(fā)生［1］。

1.2.3 指標(biāo)檢測 從實(shí)驗(yàn)第14天晚上開始，各組動物禁食禁水12h，稱重后，腹主動脈采血，離心并分裝血清，用生理鹽水制備10%腦組織勻漿，離心后取上清液備檢。摘取小鼠的胸腺和脾臟，用濾紙吸干殘血后，稱重，計(jì)算其臟器指數(shù)。用ELISA法檢測各組大鼠血清中NO、腦中5-HT含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 一般狀況

造模前，各組大鼠一般狀況未見明顯差異，大鼠皮毛柔順、有光澤，活潑，眼珠圓睜，顏色鮮紅透亮，積極尋找聲源，食量正常。隨著造模時(shí)間推移，空白組大鼠無明顯變化；模型組大鼠均成抑郁狀態(tài)，表現(xiàn)為毛發(fā)晦暗散亂，活動減少，形體消瘦，大便稀溏，甚至出現(xiàn)自殘現(xiàn)象；治療組大鼠上述抑郁狀態(tài)有明顯改善，形體無明顯消瘦，亦無自殘現(xiàn)象。

2.2 各組大鼠體重、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)比較

與空白組相比，模型組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)有降低趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；治療組與模型組比較，脾臟指數(shù)顯著升高（P<0.05）。3組體重及胸腺指數(shù)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見表1。

表1 各組大鼠體重、胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)比較 （±s）

表1 各組大鼠體重、胸腺指數(shù)與脾臟指數(shù)比較 （±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.05

組別 n 體重（g） 胸腺指數(shù)（mg/10g）脾臟指數(shù)（mg/10g）空白組 10 207.43±19.36 1.77±0.55 2.38±0.33模型組 10 200.20±13.23 1.68±0.30 2.12±0.28治療組 10 205.80±17.92 1.81±0.25 2.73±0.691）

2.3 大鼠血清中NO和腦中5-HT含量比較

與空白組相比，模型組血清NO含量顯著降低（P<0.05），腦 5-HT 水平明顯升高（P<0.01）；與模型組比較，治療組給藥后NO含量升高（P<0.05），腦5-HT水平下降（P<0.05）。結(jié)果見表2。

表2 大鼠腦5-HT、血清NO 含量 （ng/L，±s）

表2 大鼠腦5-HT、血清NO 含量 （ng/L，±s）

注：與模型組比較，1）P＜0.05；與空白組比較，2）P＜0.05，3）P＜0.01

組別 n 5-HT NO空白組 10 188.53±62.12 22.00±5.12模型組 10 244.37±74.663） 17.64±3.102）治療組 10 192.76±54.421） 22.88±4.771）

3 討論

目前，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對肝郁證發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識已經(jīng)深入到多系統(tǒng)及細(xì)胞、分子水平，在以焦慮、緊張、悲痛等為代表的負(fù)面情緒長期刺激下，機(jī)體高級神經(jīng)中樞調(diào)節(jié)機(jī)制發(fā)生紊亂，進(jìn)而引起神經(jīng)、內(nèi)分泌、循環(huán)、消化、免疫、感覺、運(yùn)動等多系統(tǒng)功能紊亂［2］。其中，5-HT及NO是2個(gè)與肝郁密切相關(guān)的因子。

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用對大鼠進(jìn)行鼠籠水平震蕩、冰水游泳、拍打、懸尾、繩子捆綁四肢等連續(xù)不定14d刺激的方法制備肝郁證候動物模型，干預(yù)組同時(shí)用疏肝解郁法之代表方劑柴胡疏肝散治療。結(jié)果顯示，柴胡疏肝散可改善肝郁大鼠的肝郁癥狀，升高大鼠脾臟指數(shù)和血清中NO含量，降低腦中5-HT的含量。

柴胡疏肝散為明代著名醫(yī)家張景岳所創(chuàng)，方中柴胡疏肝解郁、條達(dá)肝氣，為君藥；香附理氣疏肝，川芎行氣活血，為臣藥；佐以白芍、枳殼、陳皮養(yǎng)血柔肝，配合柴胡疏肝理氣寬中；炙甘草益氣補(bǔ)中，緩肝之急。諸藥配伍，既補(bǔ)肝體，又助肝用，氣血兼顧，對肝郁證有較好的治療作用。

5-HT是一種調(diào)節(jié)神經(jīng)活動重要的神經(jīng)遞質(zhì)，主要分布于松果體和下丘腦，是調(diào)節(jié)情緒及行為的重要活性物質(zhì)。劇烈或長期負(fù)面情緒的刺激，可引起腦內(nèi)5-HT合成及代謝的改變。有研究表明，大鼠經(jīng)過激怒刺激和精神緊張后，能促進(jìn)下丘腦-交感腎上腺系統(tǒng)興奮性升高，使下丘腦5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)激素含量增高，誘發(fā)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和植物神經(jīng)功能紊亂，進(jìn)而通過下丘腦-垂體-腎上腺-胸腺軸影響機(jī)體免疫功能［4］。研究發(fā)現(xiàn)，肝郁模型組腦5-HT含量較空白組顯著升高（P<0.01），反映機(jī)體免疫力的胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)雖沒有明顯降低，但出現(xiàn)了降低的趨勢，這與上述研究是一致的。治療組與模型組相比，5-HT含量明顯降低（P<0.05），脾臟指數(shù)也較模型組有顯著升高（P<0.05）。這可能與方中柴胡降低大鼠腦組織前額葉中5-羥色胺的含量而對慢性應(yīng)激抑郁模型大鼠有一定的療效有關(guān)［5］。

NO是一種由血管內(nèi)皮細(xì)胞（EC）產(chǎn)生并釋放的細(xì)胞信使，廣泛分布于生物體各組織，特別是神經(jīng)組織中。研究發(fā)現(xiàn)，肝郁模型組與空白組相比，血清NO含量顯著降低（P<0.05），這可能與肝郁證時(shí)EC功能損傷，肝臟及其他組織過氧化能力被激活，過氧化產(chǎn)物增加有關(guān)［6］。另有研究顯示，NO水平降低還是肝郁引起胃黏膜炎癥的病理生理基礎(chǔ)之一。疏肝解郁中藥可有效預(yù)防肝郁及胃病理變化產(chǎn)生，內(nèi)在機(jī)制與其能夠調(diào)節(jié)NO水平，增強(qiáng)胃黏膜防御保護(hù)機(jī)能有關(guān)［7］。本研究也表明，肝郁組用疏肝解郁之柴胡疏肝散治療后，其NO含量確實(shí)可明顯升高（P<0.05）。

總之，柴胡疏肝散治療肝郁證的途徑可能有很多，本研究證實(shí)，其機(jī)制可能與其調(diào)節(jié)肝郁大鼠血清中NO和腦中5-HT水平、提高脾臟指數(shù)進(jìn)而增強(qiáng)免疫力有關(guān)，為柴胡疏肝散治療肝郁證提供了部分現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。其他機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

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