陳 璐，曾明輝

1.四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院·四川省人民醫(yī)院（成都 610072）；2.邛崍市醫(yī)療中心醫(yī)院（邛崍 610038）

氟他胺（flutamide）是一種口服非甾體抗雄性激素，資料［1－5］表明，氟他胺具有抗雄性激素與抗腫瘤的作用，在治療與雄性激素相關(guān)的前列腺癌、前列腺增生和卵巢癌等疾病有良好前景。經(jīng)皮給藥途徑具有避免肝臟首關(guān)效應(yīng)、藥物在胃腸道降解與吸收不受胃腸道因素影響以及無胃腸道不良反應(yīng)等優(yōu)點。但經(jīng)皮給藥時要求藥物有一定透皮速率，該劑型僅適用于少數(shù)劑量小和適宜溶解特性的小分子藥物［6－8］。本文通過氟他胺透皮吸收劑的不同凝膠基質(zhì)下氟他胺的累計釋放量，比較不同透皮促進劑的釋藥速率，以優(yōu)選其最佳處方組成。

1 材料與方法

1.1 材料

Waters2690型高效液相分析儀（美國 Waters公司），Waters996型紫外檢測器（美國 Waters公司），Sartorius電子天平（德國），數(shù)字式黏度計（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），PHSJ－4A酸度計（上海精密科學(xué)儀器有限公司），DK－98－Ⅱ型電子恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司），透皮擴散儀（上海楷凱科技貿(mào)易有限公司）。

氟他胺原料藥（江蘇天士力帝益藥業(yè)有限公司，批號20110808，純度98.6%），氟他胺對照品（中國藥品生物制品檢定所），卡波姆940（北京奧利化學(xué)試劑有限公司），羥丙基甲基纖維素（HPMC，沈陽化學(xué)試劑廠），海藻酸鈉（化學(xué)純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司），氮酮（北京化學(xué)試劑公司），薄荷醇（北京化學(xué)試劑公司），三乙醇胺（廣東汕頭市西隴化工廠），甘油（浙江遂昌惠康藥業(yè)有限公司），醫(yī)用酒精（北京市志偉達工貿(mào)有限公司），丙二醇（色譜純），甲醇（色譜純），其他試劑均為分析純。

Wistar大鼠，雄性（180～200g），購自四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心，實驗動物使用許可證號：SYXK（川 ）2013－110，實驗動物質(zhì)量合格證NO：0017566。

1.2 HPLC法測定透皮接收液中的氟他胺含量

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6mm，5μm）；流動相：甲醇∶水（65∶35）；檢測波長：227nm；流速：1mL/min；柱溫：30℃；進樣體積：20μL［9－10］。

1.2.2 測定方法 取氟他胺對照品甲醇溶液和空白透皮接收液，在上述色譜條件下測定。結(jié)果表明，氟他胺的保留時間為23.1min，樣品液的主峰保留時間與氟他胺對照品溶液一致，且空白液對藥物的測定無干擾（圖1）。

1.2.3 氟他胺標準曲線的繪制 精密稱取氟他胺對照品，配成質(zhì)量濃度為350μg/mL的甲醇溶液，用甲醇稀釋為質(zhì)量濃度3.5、7、14、21、42、84μg/mL的標準液，按1.2.1項色譜條件取20μL進樣，以質(zhì)量濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程：Y＝102.3C－13.45（r＝0.999 6，n＝5）。

1.2.4 精密度與方法回收率 配制低、中、高（4、30、75μg/mL）3個質(zhì)量濃度氟他胺甲醇溶液，取20μL進樣，以測得質(zhì)量濃度和理論質(zhì)量濃度比較，計算方法回收率。低、中、高3個質(zhì)量濃度氟他胺溶液的平均回收率為（97.22±1.53）%，相對標準偏差（RSD）為1.34%，方法回收率較好。低、中、高3個質(zhì)量濃度日內(nèi)精密度的RSD值分別為2.89%、1.52%、1.83%（n＝6），日間精密度的 RSD值分別為2.09%、1.86%、1.49%（n＝6），該方法的精密度較好。

1.2.5 樣品透皮接收液前處理方法 精密吸取透皮接收液0.5mL，加甲醇1.0mL，渦旋1min，于14 000r/min離心5min，吸取200μL上清液于進樣瓶中，20μL進樣測定。

圖1 氟他胺空白對照、標準品與透皮接收液HPLC色譜圖

1.3 凝膠基質(zhì)的選擇

1.3.1 凝膠基質(zhì)的制備 參考文獻［11－12］，稱取適量卡波姆940，加入甘油32g潤濕研磨，用適量水溶脹24h作為凝膠基質(zhì)，備用。稱取適量HPMC，加水溶解后，冷藏靜置至完全溶脹；在攪拌下加入適量注射用水，直至完全溶解形成均一溶液備用。稱取適量海藻酸鈉加入到一定體積水中，溶解、超聲脫氣和靜置過夜，備用。

1.3.2 氟他胺凝膠基質(zhì)的制備 精密稱取適量氟他胺，用適量水溶解后分別加入以上3種凝膠基質(zhì)中，緩慢加入乙醇溶液，攪拌均勻，用三乙醇胺調(diào)節(jié)pH至7～8，加水至100g，研磨均勻，即得乳白色、均勻、細膩和半透明狀的氟他胺凝膠。

1.3.3 鼠皮的制備 取雄性 Wistar大鼠，脫頸椎處死后用電動剔毛器將其腹部脫毛，剪下腹部皮膚，小心剝離脂肪層、筋膜，備用。

1.3.4 體外透皮試驗 采用改良法Franz擴散池裝置（有效擴散面積為3.8cm2），將上述氟他胺凝膠基質(zhì)分別緊密貼于處理好的鼠皮角質(zhì)層，排除氣泡，固定于滲透擴散裝置的擴散室和接收室之間，背襯層向上。接收室加滿生理鹽水作為擴散介質(zhì)，使液面恰與鼠皮接觸。水浴加熱，溫度控制在（37±0.2）℃，開動磁力攪拌器，攪拌轉(zhuǎn)速設(shè)定為400r/min，分別在1、2、4、6、8h將接收室中的接收液全部倒出，同時補加同樣體積的新鮮接收液。取接收液按1.2項方法測定總氟他胺含量，計算累積釋放量 Q［13－14］。

Q：時間t的累積釋放量；Cn：時間t的濃度值；v0：每次取樣體積；CPS：時間t以前的濃度測量值。

1.4 透皮促進劑的制備

分別以氮酮、丙二醇和薄荷醇為透皮促進劑，加入對氟他胺具有良好滲透性的凝膠基質(zhì)制備氟他胺透皮吸收劑。

2 結(jié)果

2.1 氟他胺凝膠基質(zhì)

2.1.1 氟他胺凝膠基質(zhì)的處方優(yōu)化 依據(jù)文獻研究結(jié)果［1，15－16］，分別考察卡波姆940、HPMC 和海藻酸鈉的用量。以氟他胺累積透過量為評價指標，評價3種不同濃度的凝膠基質(zhì)對氟他胺透皮特性的影響。結(jié)果表明：比較3種不同基質(zhì)，確定氟他胺經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量差異無統(tǒng)計學(xué)意義，卡波姆940凝膠基質(zhì)較優(yōu)越，其中以1.5%卡波姆940凝膠基質(zhì)為最佳。故凝膠基質(zhì)優(yōu)化處方確定為1.5%卡波姆940加甘油所成基質(zhì)（表1、表2）。

表1 氟他胺透皮吸收劑凝膠基質(zhì)的處方優(yōu)化因素與水平表

2.1.2 驗證試驗 按優(yōu)選處方的比例進行3批樣品的驗證試驗。結(jié)果表明，所確定的優(yōu)選處方配比適宜，重復(fù)性較好，表明該基質(zhì)處方合理，穩(wěn)定可行（表3）。

表2 3種凝膠基質(zhì)的氟他胺經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量Q/（μg/mL）（n＝3）

表3 凝膠基質(zhì)優(yōu)選工藝的驗證試驗

2.2 透皮促進劑的選擇

將1.4項中3種不同促透劑制成的氟他胺透皮吸收劑，緊密涂布于處理好的鼠皮角質(zhì)層，按1.3.4項方法操作，接取接收液按1.2項方法測定總氟他胺含量，計算累積釋放量Q，將Q對時間t進行回歸，得體外透皮動力學(xué)方程及透皮速率［17－18］。

穩(wěn)態(tài)流量J＝v/A·dQ/dt；滲透系數(shù)Kp＝J/A·C0

以上公式中，A：皮膚有效面積；dQ/dt：穩(wěn)態(tài)時的斜率；J：穩(wěn)態(tài)流量，單位時間通過單位面積皮膚的藥物量；Kp：滲透系數(shù)。

體外透皮實驗結(jié)果說明，以氮酮為促透劑，氟他胺透皮吸收劑的體外經(jīng)皮滲透Q與t相關(guān)性較好，二者呈線性關(guān)系，體外經(jīng)皮滲透均符合零級動力學(xué)過程（表4、表5和圖2）。

表4 不同促透劑基質(zhì)的氟他胺經(jīng)離體鼠皮的累積釋放量

表5 氟他胺體外透皮試驗

圖2 氟他胺體外經(jīng)皮滲透曲線

3 討論

氮酮是一種新型經(jīng)皮滲透促進劑，也是近年來國內(nèi)外研究較多的透皮吸收促進劑，它能使角質(zhì)中類脂質(zhì)生產(chǎn)不規(guī)則的排列，同時可溶解皮膚的類脂以增加藥物透皮吸收［19］。實驗結(jié)果證實，該凝膠劑中最佳透皮吸收劑為1%氮酮。

氟他胺口服引起明顯的胃腸道刺激如惡心、嘔吐和腹瀉，與促黃體激素釋放激素劑（LHRH）聯(lián)用時更為多見，且氟他胺存在明顯的首過效應(yīng)。若制成透皮吸收制劑不僅可以避免消化道不良反應(yīng)，還可以控制血藥濃度，降低全身尤其肝臟的不良反應(yīng)。氟他胺其理化性質(zhì)符合透皮制劑對藥物的基本要求，經(jīng)皮給藥制劑的研究開發(fā)必將具有廣泛的應(yīng)用前景以及深遠的社會意義。

對氟他胺凝膠劑透皮特性的考察，其目的是優(yōu)化并確定氟他胺凝膠劑處方，并制備氟他胺凝膠劑，繼續(xù)考察氟他胺凝膠劑的體外釋藥過程及其穩(wěn)定性等特征。更可進一步考察經(jīng)皮吸收后，氟他胺在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)過程，以及開展氟他胺凝膠劑體內(nèi)外血藥濃度和藥效學(xué)的相關(guān)性研究。

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