杜蕾蕾，陳 雛

1.成都中醫(yī)藥大學(xué) 民族醫(yī)藥學(xué)院（成都 611137）；2.四川省中醫(yī)藥科學(xué)院（成都 610041）

沙棘屬（Hippophae）植物為胡頽子科落葉灌木或小喬木，是一類具有重要醫(yī)藥價(jià)值的植物類群。沙棘的果實(shí)為藏族、蒙古族的習(xí)用藥材［1］。研究［2－3］表明，沙棘含有維生素類、黃酮類、甾醇類、多糖類和有機(jī)酸類等多種類型的活性成分，具有較高的營養(yǎng)和藥用價(jià)值。其中，沙棘總黃酮具有降血脂、降血糖作用，可以加強(qiáng)心肌收縮性、降低心肌耗氧量、減少總外周血管阻力和增加血管彈性，減輕大鼠心肌再灌注損傷區(qū)超微結(jié)構(gòu)的病理改變，臨床用于治療缺血性心臟病、心絞痛和高血脂癥等，同時(shí)用于預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化和腦血栓等疾?。?－7］。近年研究［8］發(fā)現(xiàn)，沙棘葉也含有大量黃酮類成分，其資源量更大且易于采集。本研究對(duì)不同基源的沙棘葉樣品進(jìn)行了對(duì)比分析，探究沙棘屬植物葉中所含黃酮類成分的主要特點(diǎn)，對(duì)科學(xué)開發(fā)沙棘資源和擴(kuò)大沙棘黃酮的原料來源具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 材料

Shimadzu LC－10ATvp 高效液相色譜儀（LC－10ATvp泵、SPD－10Avp紫外檢測(cè)器、CTO－10Asvp柱溫箱、SCL－10Avp系統(tǒng)控制器、Class－vp色譜工作站）；Sartorius BP211D電子天平；KQ3200超聲波清洗器（昆山超聲儀器有限公司）。槲皮素（批號(hào)：081－9003）、山柰酚（批號(hào)：0861－200002）和異鼠李素（批號(hào)：110860－200205）對(duì)照品均購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇為色譜純，水為 Milli－Q超純水，其余試劑均為分析純；沙棘葉樣品收集自川西高原甘孜州、阿壩州等地，其原植物鑒定分別為柳葉沙棘Hippophae salicifolia D.Don、中 國 沙 棘Hippophae rhamnoides subsp.sinensis Rousi、云南沙棘 Hippophae rhamnoindes subsp.yunnanensis Rousi、臥龍沙棘 Hippophae rhamnoides subsp.wolongensis Lian，K.Sun et X.L.Chen、理塘沙棘Hippophae litangensis Lian et X.L.Chen ex Swenson et Bartish、棱 果 沙 棘 Hippophae goniocarpaLian et al.Swenson et Bartish、江孜沙棘 Hippophae gyantsensis（Rousi）Lian、密毛肋果沙棘 Hippophae neurocarpasubsp.stellatopilosa Lian et al.ex Swenson et Bartish、肋 果 沙 棘Hippophae neurocarpasubsp.neurocarpaS.W.Liu et T.N.He、西藏沙棘 Hippophae tibetana Schlechtend 10種不同基源的沙棘葉。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件色譜柱 Shim－pack VP－ODS（4.6mm×150mm，5μm）；流動(dòng)相甲醇－0.4%磷酸（50∶50），流速1.0mL/min；柱溫30℃；檢測(cè)波長370nm；進(jìn)樣量10μL。在此條件下，槲皮素、山柰酚和異鼠李素能與其他組分達(dá)到基線分離，理論塔板數(shù)按異鼠李素計(jì)算為7 300。混合對(duì)照品、供試品溶液的色譜圖（圖1）。

圖1 混合對(duì)照品（A）和供試品溶液（B）的色譜圖

1.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取適量槲皮素、山柰酚和異鼠李素對(duì)照品于容量瓶中，甲醇溶解并定容，得對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別吸取各對(duì)照品儲(chǔ)備液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0和8.0mL于10mL容量瓶中，甲醇定容，得對(duì)照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 沙棘葉經(jīng)50℃減壓干燥，粉碎。精確稱取沙棘葉粉末0.5g，精密加入甲醇－水（8∶2）混合溶劑30mL浸泡12h，超聲提取30min，提取液放冷至室溫并過濾。精密量取續(xù)濾液10mL于100mL圓底燒瓶中，加入6mol/L鹽酸10mL，甲醇10mL，混勻后于沸水浴上加熱回流30min，迅速冷卻，移至50mL容量瓶中，甲醇定容，0.45μm微孔濾膜過濾即得。

1.2.4 線性關(guān)系考察 分別吸取“1.2.2”項(xiàng)下不同濃度的對(duì)照品溶液10μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積值，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，槲皮素在1.67～106.60μg/mL范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為y＝35 588x＋7 242，r＝0.999 9；山柰酚在0.51～32.64μg/mL范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為y＝43 894x＋5 399，r＝0.999 6；異鼠李素在0.78～49.92μg/mL范圍內(nèi)線性良好，回歸方程為y＝39 030x＋6 154，r＝0.999 9。

1.2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一沙棘葉粉末6份，分別按“1.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定槲皮素、山柰酚和異鼠李素含量。結(jié)果表明，槲皮素、山柰酚和異鼠李素含量的 RSD分別為0.69%、1.63%和1.28%。

1.2.6 回收試驗(yàn) 精密稱取同一沙棘葉粉末9份，每份約0.25g，平均分為3組，每組精密加入相當(dāng)于已知含量50%、100%和150%的對(duì)照品儲(chǔ)備液，按“1.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“1.2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果顯示，槲皮素、山柰酚和異鼠李素的平均回收率（n＝9）分別為99.50%（RSD＝0.91%）、98.00%（RSD＝1.33%）和 100.80%（RSD＝1.55%）。

1.2.7 樣品測(cè)定 分別取不同基源的沙棘葉樣品，按“1.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液。將供試品溶液注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

2 結(jié)果

按外標(biāo)法計(jì)算樣品中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量（表1）。所測(cè)定的10種不同基源的沙棘葉中槲皮素的含量為0.58～4.42mg/g；山柰酚的含量為0.12～3.32mg/g；異鼠李素的含量為0.00～2.58mg/g；而總黃酮含量為1.26～8.08mg/g，最低和最高含量相差約6.4倍。在10種不同沙棘葉中，云南沙棘和臥龍沙棘的總黃酮平均含量較高，分別為5.29mg/g和5.01mg/g。

表1 不同基源沙棘葉中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

廖麗云等［9］報(bào)道了高效液相色譜法測(cè)定心達(dá)康片中槲皮素、山柰酚和異鼠李素含量的方法。但與制劑不同，沙棘果實(shí)、葉子等新鮮原料中，總黃酮是由以槲皮素、山柰酚和異鼠李素為主要苷元所形成的數(shù)十種黃酮苷類化合物所組成。在缺少化學(xué)對(duì)照品的情況下，很難對(duì)果實(shí)中數(shù)十種黃酮苷的含量進(jìn)行直接測(cè)定，因此采用加酸水解的方法，可使數(shù)量眾多的黃酮苷轉(zhuǎn)化為數(shù)個(gè)主要的黃酮苷元，通過測(cè)定各苷元的含量藉以評(píng)價(jià)果實(shí)樣品中黃酮類化合物總含量的高低［10］。試驗(yàn)證明，本研究所建立的分析方法能同時(shí)測(cè)定沙棘葉中3種主要黃酮苷元的含量，該方法準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，可用于沙棘葉的質(zhì)量評(píng)價(jià)。

測(cè)定結(jié)果顯示：不同基源的沙棘葉樣品中總黃酮含量為1.26～8.08mg/g，其含量差異較大，提示云南沙棘和臥龍沙棘的總黃酮含量較高，適宜作為提取沙棘葉黃酮的原料。

在測(cè)定的不同基源沙棘葉中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的相對(duì)比例差異較大，多數(shù)樣品中槲皮素的相對(duì)含量較高，而沙棘果實(shí)中異鼠李素的含量較高［11］。研究［12］表明，相同濃度的槲皮素比異鼠李素清除2，2－二苯基－1－苦肼基自由基（2，2－diphenyl－1－picry－h(huán)ydrazyl radical，DPPH）自由基、2，2－聯(lián)氮－二（3－乙基－苯并噻唑－6－磺酸）二銨鹽（2，2＇－azinobis－（3－ethylbenzthiazoline－6－sulphonate），ABTS）自 由基能力更強(qiáng)。因此，筆者推測(cè)沙棘葉中總黃酮的抗氧化能力可能優(yōu)于沙棘果實(shí)。

綜上所述，沙棘葉中含有一定量的黃酮成分，且具有資源量大、易于采集的優(yōu)勢(shì)，可作為提取沙棘黃酮的原料之一。但沙棘葉中的黃酮含量受品種和生長環(huán)境等因素影響較大，今后將作進(jìn)一步的研究和篩選。

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