陳芳芳，李衛(wèi)東，張艷麗，高亮，孫汝亮

(深圳市寶安區(qū)婦幼保健院病理科，廣東深圳518133)

P16、Ki67及HPV聯(lián)合檢測(cè)在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷意義

陳芳芳，李衛(wèi)東，張艷麗，高亮，孫汝亮

(深圳市寶安區(qū)婦幼保健院病理科，廣東深圳518133)

目的探討P16、Ki67及HPV聯(lián)合檢測(cè)在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷意義。方法隨機(jī)選擇不同級(jí)別的宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變患者108例作為研究組，另選取40例健康體檢者作為對(duì)照組，采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)兩組患者宮頸黏膜組織中P16、Ki67及HPV陽性表達(dá)情況，并分析P16、Ki67及HPV檢測(cè)在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變?cè)\斷及鑒別診斷中的意義。結(jié)果與正常宮頸相比，宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變組織中P16、Ki67及HPV的表達(dá)差異有顯著性，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);P16、Ki67及HPV三者聯(lián)合診斷與單個(gè)診斷相比，具有較高的敏感性、特異性及準(zhǔn)確率。結(jié)論P(yáng)16、Ki67及HPV聯(lián)合檢測(cè)可有提高宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷準(zhǔn)確率，對(duì)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷及鑒別具有重要的意義。

P16;Ki67;HPV;宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機(jī)選擇2013年5月－2014年6月期間收治的宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變患者108例作為研究組，平均年齡(41.4±6.7)歲，其中CINⅠ54例、CINⅡ41例，CINⅢ13例。另選取40例健康體檢者作為對(duì)照組，平均年齡(40.9±6.5)歲，取兩組所有患者的宮頸黏膜組織制作切片標(biāo)本。由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師采取雙盲法取一致意見作為診斷結(jié)果。

1.2 試劑與方法

P16、Ki67單克隆抗體及試劑盒(上海強(qiáng)耀生物科技有限公司生產(chǎn))，HPV多克隆抗體及DAB顯色試劑(福州邁新生物開發(fā)公司)。

采用免疫組化Envision法，取兩組組織標(biāo)本，常規(guī)脫蠟后脫水，進(jìn)行HE染色，作P16、Ki67及HPV抗體標(biāo)記，應(yīng)用自動(dòng)免疫組化儀進(jìn)行免疫組化，嚴(yán)格按照儀器說明書進(jìn)行操作。用已知陽性切片做陽性對(duì)照，用PBS代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷

根據(jù)陽性細(xì)胞分布P16陽性細(xì)胞數(shù)＜5%為陰性，5%～25%為弱陽性，26%～75%為中陽性，＞75%為強(qiáng)陽性。為了方便統(tǒng)計(jì)分析，將P16＞25%均視為陽性。Ki67表達(dá)根據(jù)陽性細(xì)胞在上皮的分布分類，Ki67陽性表達(dá)局限于上皮的基底層為陰性，超過基底層25%為陽性。陽性百分率=陽性細(xì)胞數(shù)/計(jì)數(shù)細(xì)胞總數(shù)。HPV檢測(cè)細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色細(xì)顆粒為陽性反應(yīng)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究所有數(shù)據(jù)均采用SPSS分析17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

P16、Ki67在正常宮頸黏膜組織陽性率＜5%，呈陰性。HPV在正常宮頸黏膜組織中無陽性表達(dá)。但P16、Ki67及HPV在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變組織中均有不同程度的陽性表達(dá)，并且表達(dá)強(qiáng)度和陽性率隨著宮頸病變程度的加重不斷升高。與正常宮頸相比，宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變組織中P16、Ki67及HPV的表達(dá)差異有顯著性，均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。此外，分析P16和Ki67單個(gè)或聯(lián)合診斷宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的應(yīng)用價(jià)值結(jié)果可知，P16、Ki67及HPV三者聯(lián)合診斷具有較高的敏感性、特異性，準(zhǔn)確率高，見表2。

表1 P16、K i67及HPV在不同宮頸病變中陽性表達(dá)(%)

表2 P16、K i67及HPV診斷的應(yīng)用價(jià)值(n=108，%)

3 討論

抑癌基因p16所編碼的P16蛋白通過抑制spl與啟動(dòng)子hTERT的結(jié)合，誘導(dǎo)染色體端粒縮短，參與啟動(dòng)細(xì)胞衰老過程，是宮頸癌及其癌前病變?cè)缙谠\斷的主要標(biāo)記物。國外已有研究報(bào)道［1］，P16蛋白與宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變關(guān)系密切，P16蛋白會(huì)在宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變過程中過表達(dá)，且表達(dá)強(qiáng)度和陽性表達(dá)率會(huì)隨著宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變程度的加重而升高，本研究結(jié)果顯示，P16在CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中的陽性表達(dá)率呈逐漸上升趨勢(shì)，這一結(jié)果與文獻(xiàn)結(jié)論一致。Ki67作為反應(yīng)宮頸上皮細(xì)胞異型性的標(biāo)志物，具有較高的靈敏性。在既往研究中發(fā)現(xiàn)［2］，Ki67在正常宮頸組織、宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)及宮頸癌組織中的表達(dá)水平逐步升高。本研究發(fā)現(xiàn)在正常宮頸及CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ中Ki67的陽性表達(dá)也存在著一定差異。此外，HPV感染是宮頸鱗狀細(xì)胞癌和上皮內(nèi)瘤發(fā)生的必要因素，有學(xué)者認(rèn)為HPV是導(dǎo)致發(fā)生宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的分子學(xué)基礎(chǔ)［3］。

目前我國國內(nèi)，已有采用P16和Ki67聯(lián)合檢測(cè)診斷宮頸鱗狀細(xì)胞癌和上皮內(nèi)瘤的研究［4］，且結(jié)果較為理想，可有效提高診斷及分型的正確率。本研究在此基礎(chǔ)上，采用P16、Ki67及HPV三者聯(lián)合檢測(cè)，與單獨(dú)檢測(cè)結(jié)果相比，三者聯(lián)合敏感性及特異性高，診斷準(zhǔn)確率可達(dá)96.9%。表明P16、Ki67及HPV聯(lián)合檢測(cè)可有提高宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷準(zhǔn)確率，對(duì)宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的診斷及鑒別具有重要的意義。

［1］Mathur SP，Mathur RS，Rust PF，et al.Human papilloma virus(HPV)-E6/E7 and epidermal growth factor receptor (EGFR)protein levels in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia(CIN)［J］.Am J Reprod Immunol，2001，46(4):280-287.

［2］ 譚偉堅(jiān)，張曉薇，林仲秋，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸鱗癌中cyclin D1、Ki-67的表達(dá)及其意義［J］.中國病理生理雜志，2010，26(2):390-392.

［3］梅松原，韓秋麗，崔艷梅，等.Skp2、P27、Ki67在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的表達(dá)及臨床意義［J］.航空航天醫(yī)學(xué)雜志，2011，22(7):805-807.

［4］叢玲華，戴珍珍，方來福，等.EGFR、P16、Ki67和P53在宮頸鱗狀上皮內(nèi)瘤變和宮頸鱗狀細(xì)胞癌中表達(dá)的臨床意義［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)生，2013，51(2):87-90.

The diagnostic significance of P16，Ki67 and HPV exam ination in the cervical squamous intraepithelial lesions

CHEN Fangfang，LIWeidong，ZHANG Yanli，GAO Liang，SUN Ruliang
(Department of Pathology，Shenzhen Baoan District Maternity and Child Care，Shenzhen，Guangdong Province，China，518133)

ObjectiveTo investigate the diagnostic significance of P16，Ki67 and HPV positivity in the cervical squamous intraepithelial lesions.Methods108 cases of different cervical squamous intraepithelial lesions were selected randomly as a research group，another 40 cases of healthy physical examination were selected as control group.The p16，Ki67 and HPV positivity in the cervicalmucosa tissueswere detected by immunohistochemicalmethod，while their positivity in the diagnosis and differential diagnosis of cervical squamous intraepithelial lesions were analyzed.ResultsCompared with the control group，the expression of P16，Ki67 and HPV in the research group had significant difference(P＞0.05).Combination of P16，Ki67 and HPV had higher sensitivity，specificity and accuracy.ConclusionThe combining positivity of P16，Ki67 and HPV could improve the diagnosis accuracy of cervical squamous intraepithelial lesions.

P16;Ki67;HPV;Cervical squamous intraepithelial lesions

R737.33

A

1673-2995(2015)03-0178-02

2014-09-20)

陳芳芳(1977－)，女(漢族)，主治醫(yī)師，碩士.