劉娜

[摘要] 目的 探討CD133、Ki-67在胃癌的表達及臨床病理意義。 方法 隨機選取本院2008年5月～2012年9月的首發(fā)胃癌患者300例，所有患者進行免疫組化檢測，對胃癌組織中CD133、Ki-67的陽性表達及病理特征的關(guān)系進行分析，觀察患者的術(shù)后生存時間。 結(jié)果 300例胃癌中，CD133陽性的患者184例，陽性率為61.33%。Ki-67陽性的患者179例，陽性率為59.67%。CD133和Ki-67的表達隨著腫瘤增大、分化降低、浸潤加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多、TNM分期遞增，出現(xiàn)腹腔及遠處轉(zhuǎn)移等因素而逐漸增高（P<0.05）。Cox多因素術(shù)后生存分析結(jié)果顯示， 胃癌術(shù)后生存時間的獨立預(yù)后因子為患者年齡、 腫瘤大小、組織學(xué)類型、 CD133、Ki-67、腹腔及遠處轉(zhuǎn)移。 結(jié)論 CD133和Ki-67聯(lián)合檢測可作為胃癌的臨床評價腫瘤生物學(xué)行為及判斷預(yù)后的有用指標之一。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；CD133；Ki-67；表達；臨床病理

[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 2095-0616（2015）20-157-04

The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance

LIU Na

Department of Pathology， Yilan County People's Hospital， Yilan 154800， China

[Abstract] Objective To investigate the The expression of CD133 and Ki-67 in gastric cancer and its clinical significance. Methods 86 cases of patients with diabetic retinopathy from May 2008- September 2012 were selected as the observation group， 98 cases of diabetic patients without retinopathy were selected as the control group， 80 cases of healthy people were selected as normal group . All subjects were resting fasting urine microalbumin（UmAlb） and glycosylated hemoglobin （HbA1C）， using ABC- enzyme-linked immunosorbent assay and analysis of peripheral blood IGF-1 and TGF-β1 expression and among the three groups level situation. Results In 300 cases of gastric cancer， 184 cases of CD133 positive patients， positive rate of Ki-67was 61.33%. Positive patients in 179 cases， the positive rate was 59.67%. The expression of CD133 and Ki-67 increased with the increase of tumor， differentiation， invasion， lymph node metastasis， TNM stage， P<0.05. Cox， and survival analysis showed that the independent prognostic factors were age， tumor size， histological type， Ki-67， CD133， abdominal and distant metastasis. Conclusion The combined detection of CD133 and Ki-67 can be used as a useful index for clinical evaluation of tumor biological behavior and prognosis of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer； CD133； Ki-67； Expression； Clinical pathology

胃癌（gastric cancer，GC）作為臨床常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)病率及死亡率皆均高?；颊咭坏┌l(fā)現(xiàn)，就已經(jīng)是胃癌晚期，錯過了最佳治療時機，嚴重影響患者的生活及生存時間，給患者造成極大的痛苦[1-2]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移與腫瘤干細胞的生存有著重要的關(guān)系[3-4]。研究發(fā)現(xiàn)及時對患者腫瘤干細胞相關(guān)標志物進行相關(guān)檢測，可以預(yù)測惡性腫瘤的術(shù)后復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移[5]。本研究主要探討增殖細胞核抗原（Kit-67），CD133在在胃癌的表達及臨床病理意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2008年5月～2012年9月來本院就診的首發(fā)胃癌患者300例，所有患者術(shù)前未經(jīng)過放化療或免疫治療；無遠處轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。男152例，女148例；年齡35～70歲，平均（58.4±12.3）歲。按照2003年國際抗癌聯(lián)盟修訂的胃癌臨床病理TNM分期， Ⅰ期56例， Ⅱ期87例， Ⅲ期110例， Ⅳ期47例； 組織學(xué)類型， 管狀腺癌（中高分化腺癌）75例， 黏液腺癌32例， 低分化腺癌183例， 印戒細胞癌35例， 其他類型11例。endprint

1.2 構(gòu)建組織芯片

在所有胃癌患者癌旁正常組織的石蠟標本上采集組織芯， 直徑選擇1.0mm， 孔間距設(shè)置為1.2 mm， 排列成9行×8列共72點微陣列， 每2點代表1例患者組織， 共制成11塊組織芯片。

表1 CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽性表達與病理特征的關(guān)系

臨床病理因素 CD133 x2 P Ki-67 x2 P

+ - + -

年齡（歲） 1.029 >0.05 1.057 >0.05

n≤40 42 30 41 39

40

n>65 46 29 34 20

腫瘤大小 6.579 <0.05 6.894 <0.05

d<4 cm 51 39 43 41

4 cm≤d<8 cm 94 56 89 60

d≥8 cm 39 21 47 20

組織學(xué)分級 7.159 <0.05 7.596 <0.05

Ⅰ級 9 11 8 13

Ⅱ級 25 30 27 31

Ⅲ級 150 75 144 77

浸潤深度 10.297 <0.05 10.567 <0.05

達黏膜下層 5 7 6 8

達漿膜下層 31 28 32 26

出漿膜層 121 60 116 64

鄰近器官 27 21 25 23

淋巴結(jié)受累 12.040 <0.05 11.982 <0.05

LN = 0 32 30 31 28

LN = 1～6 35 29 36 31

LN = 7～15 74 38 72 42

LN>15 43 19 45 20

TNM分期

Ⅰ期

25

23 9.206 <0.05

21

22 9.673 <0.05

Ⅱ期

Ⅲ期 29

99 25

44 27

107 24

52

Ⅳ期 31 24 29 23

腹腔及遠處轉(zhuǎn)移

無轉(zhuǎn)移

170

113 13.204 <0.05

167

116 14.203 <0.05

轉(zhuǎn)移 14 3 12 5

5年生存率

生存

41

39 11.239 <0.05

40

41 12.357 <0.05

死亡 143 77 144 80

1.3 試劑

兔抗人CD133多克隆抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司、 鼠抗人Ki-67 mAb購自美國Zymed公司、 使用北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司的枸櫞酸抗原修復(fù)液（pH6.0），DAB顯色液及PBS也購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.4 免疫組織化學(xué)染色方法

SP法（Labelled streptavidim biotln） 。（1）切片脫蠟至水。（2）0.3%H2O2甲醇處理切片10～20min。（3）水洗。（4）抗原修復(fù)。（5）PBS洗3次，1min/次。（6）加入血清孵育10min。（7）摔去血清，加入一抗孵育30～60min。（8）PBS洗3次，每次2min。加入二抗，孵育20min。（9）PBS洗3次，每次2min。（10）加入SP復(fù)合物孵育20～30min。（11）PBS洗3次，每次2min。（12）DAB-H2O2孵育5～10min。（13）PBS洗，水洗。（14）Harris蘇木素染核5～10min。（15）水洗，分化，藍化，蒸餾水漂洗，蘇木精復(fù)染細胞核，中性樹膠封片。

1.5 結(jié)果判斷

DAB陽性染色為棕（黃）色。高倍視野下計數(shù)4個不同位置，大約200個癌細胞，如果陽性細胞數(shù)大于10%則記為陽性，小于等于10%則記為陰性。

表2 術(shù)后生存時間多因素分析

變量 回歸系數(shù) 標準誤 x2 自由度 P 危險比

年齡 0 .76 0.112 15.367 1 0.000 1.611

組織學(xué)分級 0.045 0.016 0.679 1 0.879 1.044

組織學(xué)類型 0.228 0.079 8.569 1 0.005 1.264

浸潤深度 0.207 0.173 1.513 1 0.221 1.327

淋巴結(jié)受累 0.241 0.142 2.989 1 0.876 1.271

遠處及腹腔轉(zhuǎn)移

TNM分期 0.971

-0.129 0.315

0.192 9.654

0.537 1

1 0.002

0.547 2.641

0.871

腫瘤大小 0.558 0.129 19.635 1 0.000 1.746

CD133 0.587 0.147 15.672 1 0.000 1.824

Ki-67 0.697 0.148 22.035 1 0.000 1.998

1.6 觀察指標

觀察CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽性表達與病理特征的關(guān)系，及術(shù)后生存時間多因素分析。

1.7 統(tǒng)計學(xué)方法

采用 統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 17.0進行分析。CD133和Ki-67在胃癌表達的相關(guān)性采用Spearman等級資料相關(guān)分析；計數(shù)資料采用x2檢驗；對生存率影響的單因素分析采用Log-rank檢驗； 多因素分析采用Cox比例風(fēng)險模型，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽性表達

300例胃癌中CD133陽性184例， 陽性率為61.33%。 Ki-67陽性179例，陽性率為59.67%。CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽性表達圖片見圖1、2。

圖1 胃癌組織ki-67陽性表達（SP×200）

圖2 胃癌組織CD133陽性表達（SP×200）

2.2 CD133、Ki-67在胃癌組織中的陽性表達與病理特征的關(guān)系

表1顯示，CD133和Ki-67的表達隨分化降低、腫瘤增大、浸潤加深、 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多、 TNM分期遞增， 出現(xiàn)腹腔及遠處轉(zhuǎn)移而呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢（P<0.05）。見表1。

2.3 術(shù)后生存時間多因素分析

Cox多因素術(shù)后生存分析結(jié)果顯示， 胃癌術(shù)后生存時間的獨立預(yù)后因子為患者年齡、 腫瘤大小、組織學(xué)類型、 CD133、Ki-67、腹腔及遠處轉(zhuǎn)移。見表2。

3 討論

胃癌（gastric carcinoma）是目前世界上最為常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率均很高。我國胃癌發(fā)病率和死亡率高居世界第二位，成為嚴重威脅著我國人民的身體健康以及生命安全的惡性腫瘤之一[6-8]。胃癌患者的早期診斷率不高，就診時已發(fā)展到晚期，失去了根治性手術(shù)切除的機會，患者的預(yù)后時間明顯不如較早發(fā)現(xiàn)和手術(shù)者[9-10]。

增殖細胞核抗原Ki-67是一種與細胞周期相關(guān)的蛋白質(zhì)。Ki-67抗原是目前多種惡性腫瘤尤其是乳腺癌研究中的熱門生物指標，可以通過Ki-67抗原的檢測，Ki-67了解惡性腫瘤的細胞增殖活性。腫瘤增殖Ki67表達范圍覆蓋除G0 期以外的各增殖周期細胞。研究結(jié)果提示PCNA 和Ki67 均可較好地用于檢測乳腺癌組織中的增殖細胞，二者基本可以互為代替使用。由于Ki67 在G0 期以外各增殖周期均有表達，更具可用性。兩者具有一定的互補性。Ki-67在低分化腺癌組織中的表達較在中高分化腺癌組織的表達明顯升高，表明Ki67 染色陽性程度與組織學(xué)分級的相關(guān)性。表明Ki67表達與乳腺癌發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，是一個不良預(yù)后因素，對乳腺癌的診斷治療及預(yù)后評價有重要的參考價值 [11-13]。Ki-67的表達控制著細胞的增殖周期，故可利用Ki-67單抗標記指數(shù)來檢測腫瘤的增殖細胞率，反映細胞的增殖能力。因此Ki-67被認為是一個判斷細胞凋亡和增殖的有價值的標記物，和腫瘤的分化程度、復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和患者臨床預(yù)后有密切的關(guān)系[14-15]。

CD133是一種分子量為120kD的跨膜蛋白， CD133抗原為5次跨膜（5-transmembrane，5-TM）糖蛋白。CD133抗原可被3種CD133抗體識別：克隆AC133、293C3和AC141。AC133直接與CD133/；1糖基化抗原表位結(jié)合，可用于從外周血、骨髓、臍帶血及其他組織中分析和分選CD133+細胞。目前CD133主要用于各種惡性腫瘤癌干細胞的研究。CD133是較早應(yīng)用于癌干細胞研究的生物標志物之一[16-18]。

本研究中，300例胃癌中，CD133陽性的患者184例， 陽性率為61.33%. Ki-67陽性的患者179例，陽性率為59.67%。CD133和Ki-67的表達隨著腫瘤增大、分化降低、浸潤加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目增多、TNM分期遞增，出現(xiàn)腹腔及遠處轉(zhuǎn)移等因素而逐漸增高（P<0.05）。Cox多因素術(shù)后生存分析結(jié)果顯示， 胃癌術(shù)后生存時間的獨立預(yù)后因子為患者年齡、 腫瘤大小、組織學(xué)類型、 CD133、Ki-67、腹腔及遠處轉(zhuǎn)移。 綜上所述， CD133和Ki-67聯(lián)合檢測可作為胃癌的臨床評價腫瘤生物學(xué)行為及判斷預(yù)后的有用指標之一。

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（收稿日期：2015-05-28）endprint