張 宇 王寶璽 姚 煦李誠(chéng)讓

·論著·

海藻糖對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)M14黑素瘤細(xì)胞氧化損傷的保護(hù)作用

張 宇 王寶璽 姚 煦?李誠(chéng)讓?

目的: 確定海藻糖對(duì)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的M14黑素瘤細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。方法: 不同濃度過(guò)氧化氫處理后的M14黑素瘤細(xì)胞加入0.5 μg/mL、1 μg/mL、10 μg/mL海藻糖，采用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞存活率，嘌呤氧化酶法檢測(cè)處理前后超氧化物歧化酶(SOD)的活性。結(jié)果: 濃度為1 μg/mL的海藻糖抗氧化作用明顯，可提高低濃度過(guò)氧化氫(小于400 μmol/L)損傷后的M14黑素瘤細(xì)胞存活率約33%，可提高SOD活力約20%。當(dāng)過(guò)氧化氫濃度大于400 μmol/L時(shí)，各濃度海藻糖對(duì)提高細(xì)胞存活率無(wú)明顯作用。結(jié)論: 1 μg/mL海藻糖對(duì)低濃度(小于400 μmol/L)過(guò)氧化氫誘導(dǎo)的M14黑素瘤細(xì)胞損傷具有保護(hù)作用。

過(guò)氧化氫； 黑色瘤細(xì)胞； 氧化應(yīng)激； 海藻糖

白癜風(fēng)是常見(jiàn)的色素脫失性皮膚病，發(fā)病率約占世界人口總數(shù)的1%。1其發(fā)病機(jī)制包括自身免疫損傷、黑素細(xì)胞自身破壞和神經(jīng)源學(xué)說(shuō)等。黑素細(xì)胞自身破壞學(xué)說(shuō)2，3指出，黑素細(xì)胞合成黑素時(shí)產(chǎn)生醌類和酚類中間產(chǎn)物，有些中間產(chǎn)物不穩(wěn)定可形成活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)，這些中間產(chǎn)物和ROS對(duì)黑素細(xì)胞有毒性作用，稱之為毒性黑素前體。事實(shí)上，人體細(xì)胞在新陳代謝供能的過(guò)程中細(xì)胞內(nèi)持續(xù)產(chǎn)生ROS，ROS是一類性質(zhì)十分活潑的化學(xué)集團(tuán)，主要包括超氧自由基、羥自由基、氫過(guò)氧化物自由基、過(guò)氧化氫和單線態(tài)氧。其中超氧化物歧化酶(SOD)是細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷的主要指標(biāo)，過(guò)氧化氫酶(catalase，CAT)是清除過(guò)氧化氫的主要酶之一。如清除酶減少或缺陷ROS將攻擊蛋白質(zhì)、核酸，引起這些大分子物質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的改變。同時(shí)，ROS可作用于多種不飽和脂肪酸，以鏈?zhǔn)胶玩準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)的形式生成脂氫過(guò)氧化物，進(jìn)而生成丙二醛(malonaldehyde，MDA)破壞細(xì)胞生物膜的結(jié)構(gòu)和功能。4外界環(huán)境中的紫外線、外傷、空氣污染、農(nóng)藥、吸煙等都有產(chǎn)生氧化應(yīng)激加劇對(duì)生物大分子的破壞，導(dǎo)致白癜風(fēng)的發(fā)生。

建立成功可靠的氧化應(yīng)激模型，對(duì)于部分揭示白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制以及研究和篩選抗氧化藥物都有重要意義。過(guò)氧化氫是一種重要的活性氧，極易透過(guò)細(xì)胞膜，與細(xì)胞內(nèi)鐵離子通過(guò)Fenton反應(yīng)形成高活性的自由基，導(dǎo)致一系列反應(yīng)，其易于獲得，性質(zhì)相對(duì)穩(wěn)定，所以它已成為研究細(xì)胞氧化損傷的重要工具。5本研究以黑素瘤M14細(xì)胞為基礎(chǔ)，以過(guò)氧化氫應(yīng)激誘導(dǎo)劑構(gòu)建體外氧化應(yīng)激細(xì)胞模型。初步用MTT法檢測(cè)

細(xì)胞活力，并檢測(cè)SOD以摸索過(guò)氧化氫的最佳作用濃度，構(gòu)建體外氧化應(yīng)激細(xì)胞模型，為后續(xù)研究篩選抗氧化劑的生物芯片實(shí)驗(yàn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器 M14(黑素瘤細(xì)胞)(購(gòu)自凱基公司，貨號(hào):KG059)。青霉素、鏈霉素、胰蛋白酶、1640培養(yǎng)基、H2O2、DMSO、海藻糖 (購(gòu)自祥研生物技術(shù)中心)；胎牛血清 (購(gòu)自杭州四季青)；測(cè)定與分析用水均為超純水。CO2培養(yǎng)箱(Thremo，美國(guó)，型號(hào)BBD 6220)；潔凈工作臺(tái)(Thermo，美國(guó)，型號(hào)BBSSSC)；高性能冷凍離心機(jī)(Thermo，美國(guó)，型號(hào)MR23i)；倒置顯微鏡(OLYMPUS，日本，型號(hào)IX71)；酶標(biāo)儀(全光波段)(TECAN，瑞士，型號(hào)Safire2)；超聲波細(xì)胞破碎(比朗，中國(guó)，型號(hào)BILON92－11DL)。

1.2 方法

1.2.1 黑素瘤細(xì)胞(M14)培養(yǎng) 將M14細(xì)胞接種在1640培養(yǎng)基(含10%FBS、100 U/mL青霉素、100 μg/ mL鏈霉素、2 mmol/L L－谷氨酰胺，PH 7.2)中。37℃、5%CO2溫育。細(xì)胞為多角形貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞，約2～3天傳代1次，按5×105個(gè)/mL密度，96孔板中每孔接種50 μL，待細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(細(xì)胞數(shù)量較多，貼壁完好)繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)分組及藥物處理 調(diào)零孔:1640培養(yǎng)基200 μL；PBS毒性孔:進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，PBS 200 μL；H2O2處理組:加入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞H2O2使終濃度為800 μmol/L，400 μmol/L，200 μmol/L，100 μmol/L；海藻糖毒性組:PBS配制海藻糖溶液，終濃度為0.5 μg/mL，1 μg/mL，10 μg/mL。

加入海藻糖保護(hù)劑組:對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞分別加入H2O2100 μL和海藻糖100 μL，H2O2終濃度為400 μmol/L，200 μmol/L，100 μmol/L及海藻糖終濃度為0.5 μg/mL，1 μg/mL，10 μg/mL。

1.2.3 細(xì)胞形態(tài)觀察 黑素瘤細(xì)胞(M14)形態(tài)通過(guò)倒置熒光顯微鏡10X目鏡、20X物鏡(Nikon Eclipse Ti－U，尼康公司)觀察并拍照。

1.2.4 噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞存活率6取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期M14黑素瘤細(xì)胞，以按5×105個(gè)/mL密度，96孔板中每孔接種 50 μL，共設(shè) 10組，每組3個(gè)孔，于37℃、5%CO2培養(yǎng)24 h，細(xì)胞融合至90%，貼壁完好，分別檢測(cè)H2O2、海藻糖對(duì)M14黑素瘤細(xì)胞存活率影響加入各濃度H2O2、海藻糖100 μL。保護(hù)組加入H2O2、海藻糖各100 μL作用60 min，然后每孔加入10 μL，5 g/L的MTT，溫育4 h，去除培養(yǎng)液及MTT，小心吸取上清，每孔加入150 μL DMSO，用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔在波長(zhǎng)570 nm處的吸光度。

1.2.5 SOD活力測(cè)定 取H2O2、H2O2和海藻糖作用的M14黑素瘤細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液置于冰水條件下，超聲破碎，功率130 w，3～5 s/次，間隔30 s，重復(fù)5～7次，取200 μL，破碎好的勻漿液進(jìn)行測(cè)定。參照南京建成生物工程研究所提供的相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書測(cè)定細(xì)胞內(nèi)SOD活力。SOD活力單位定義為每毫克組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD酶活力為一個(gè)酶活力單位(U)；蛋白質(zhì)定量采用考馬斯亮藍(lán)比色法測(cè)定。

1.2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析，兩組間的數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用ˉx±s表示，P＜0.05表示有顯著性差異，P＜0.01表示有極顯著性差異。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)胞形態(tài)觀察結(jié)果 不同濃度的H2O2作用于M14黑素瘤細(xì)胞60 min后，低濃度(100 μmol/L) H2O2作用M14黑素瘤細(xì)胞后形態(tài)與正常對(duì)照比較無(wú)差異。高濃度(大于400 μmol/L)H2O2作用后的M14黑素瘤細(xì)胞數(shù)量減少，呈大細(xì)胞，小細(xì)胞，細(xì)胞兩級(jí)延長(zhǎng)不規(guī)則形態(tài)，出現(xiàn)空泡變性，并喪失貼壁功能。

2.2 過(guò)氧化氫呈濃度依賴性損傷M14黑素瘤細(xì)胞及抑制M14黑素瘤細(xì)胞活性，1 μg/mL海藻糖有效抑制過(guò)氧化氫對(duì)M14細(xì)胞損傷及活力影響 使用MTT法檢測(cè)不同濃度的H2O2對(duì)M14黑素瘤細(xì)胞存活率和細(xì)胞活性的影響，發(fā)現(xiàn)作用于M14黑素瘤細(xì)胞60 min后，各濃度H2O2作用細(xì)胞存活率與正常對(duì)照組相比均降低(P＜0.01)。但隨著H2O2濃度升高細(xì)胞存活率逐漸降低，當(dāng)大于400 μmol/L后M14細(xì)胞存活率及活性變化無(wú)差異(P＞0.05)，見(jiàn)圖1。不同濃度的海藻糖作用于M14細(xì)胞60 min后，與正常對(duì)照組相比對(duì)細(xì)胞存活率及活力無(wú)影響，見(jiàn)圖2。

圖1 MTT法檢測(cè)顯示過(guò)氧化氫呈濃度依賴性損傷M14黑素瘤細(xì)胞且呈濃度依賴性抑制M14黑素瘤細(xì)胞活性，與PBS組比較有差異(?P＜0.01)

1 μg/mL海藻糖加入H2O2處理組同時(shí)作用60 min，可抵抗過(guò)氧化氫對(duì)細(xì)胞損傷并提高細(xì)胞活性，見(jiàn)

圖3。當(dāng)過(guò)氧化氫濃度高于400 μmol/L時(shí)，海藻糖抵抗過(guò)氧化氫引起細(xì)胞損傷及活力影響的保護(hù)作用降低。當(dāng)選用10 μg/mL海藻糖加入H2O2處理組時(shí)保護(hù)作用不明顯。

圖2 MTT法檢測(cè)顯示各濃度海藻糖對(duì)M14細(xì)胞存活率及活性的影響與PBS組比較無(wú)差異(P＞0.05)

圖3 海藻糖對(duì)H2O2引起M14黑素瘤細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用

2.3 過(guò)氧化氫對(duì)黑素瘤細(xì)胞(M14)SOD活性影響及加入海藻糖防護(hù)后SOD活性變化 不同濃度的H2O2作用于M14黑素瘤細(xì)胞1 h后，與正常對(duì)照組相比，100 μmol/L H2O2處理對(duì)SOD活力無(wú)明顯影響(P＝0.095)，未對(duì)黑素瘤細(xì)胞產(chǎn)生較大的氧化損傷。當(dāng)逐漸提高過(guò)氧化氫濃度，與正常對(duì)照比較100 μmol/L H2O2處理組SOD活力明顯降低，400 μmol/L H2O2對(duì)SOD活力的影響較大(??P＜0.01)，見(jiàn)圖4。當(dāng)1 μg/mL海藻糖加入H2O2，處理組時(shí)可提高被過(guò)氧化氫抑制的SOD活力(P＜0.01)，對(duì)過(guò)氧化氫引起的黑素瘤細(xì)胞氧化損傷有保護(hù)作用，見(jiàn)圖5。

圖4 與正常對(duì)照組相比100 μmol/L過(guò)氧化氫處理組SOD活力明顯降低(?P＜0.05)，400 μmol/L H2O2對(duì)SOD活力的影響較大(??P＜0.01)

圖5 當(dāng)1 μg/mL海藻糖加入100 μmol/L H2O2處理組時(shí)可提高被過(guò)氧化氫抑制的SOD活力(?P＜0.05)，對(duì)過(guò)氧化氫引起的黑素瘤細(xì)胞氧化損傷有保護(hù)作用(100 μmol/L H2O2，P＝0.01)，當(dāng)H2O2處理組達(dá)到400 μmol/L時(shí)，海藻糖仍可提高SOD活力(400 μmol/L H2O2，P＝0.008)

3 討論

皮膚是機(jī)體與外界環(huán)境接觸的重要界面，經(jīng)常暴露于各種物理、化學(xué)及生物性物質(zhì)中。其中，許多物質(zhì)或其代謝物可直接或間接地催化產(chǎn)生一系列活性氧化物，統(tǒng)稱為ROS。常見(jiàn)的氧化物包括來(lái)自汽車及其他工業(yè)源的氣態(tài)環(huán)境污染物、紫外線輻射、食物污染物/添加劑/防腐劑、護(hù)膚類產(chǎn)品、藥物等。7ROS包括單線態(tài)氧、超氧陰離子、H2O2、羥自由基、一氧化氮等。迄今為止，已經(jīng)有大量證據(jù)表明白癜風(fēng)患者表皮內(nèi)和血淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞內(nèi)有微量過(guò)氧化氫的蓄積。正常情況下，皮膚ROS的產(chǎn)生與清除處于動(dòng)態(tài)平衡之中，而白癜風(fēng)中這一平衡被打破。在進(jìn)展期白

癜風(fēng)患者表皮內(nèi)可檢測(cè)到濃度范圍為10－3M的H2O2蓄積，8遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于生理濃度10－7M－10－6M。異常產(chǎn)生的H2O2的來(lái)源已部分明確，分為外源性和內(nèi)源性。前者例如UVA/UVB照射，X－線照射，接觸酚類、氫醌類制劑，后者包括表皮單胺氧化酶A、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶及NADPH氧化酶活性升高，TNF－α水平增高，6－生物蝶呤和墨蝶呤的光氧化增強(qiáng)，6R－左－紅－5，6，7，8，四氫生物蝶呤生物合成/再循環(huán)通路紊亂、雌激素/黃體激素介導(dǎo)的H2O2產(chǎn)生等。同時(shí)，白癜風(fēng)患者中抗氧化的CAT、硫氧還蛋白還原酶、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶表達(dá)/活性降低。ROS的生成大于清除，導(dǎo)致氧化應(yīng)激。

諸多研究顯示白癜風(fēng)中的氧化－抗氧化格局發(fā)生了改變，Agrawal等9報(bào)道患者外周血紅細(xì)胞中SOD活性劑脂質(zhì)過(guò)氧化水平顯著升高，GSH濃度及谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著降低，紅細(xì)胞中CAT活性及血漿維生素E濃度無(wú)明顯差異。Koca等4報(bào)道患者血漿丙二醇濃度及黃嘌呤氧化酶活性顯著增高。也有研究報(bào)道紅細(xì)胞中谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著升高以及CAT活性顯著降低。在組織水平，患者表皮SOD、丙二醇、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶的表達(dá)量明顯升高，而一氧化氮水平無(wú)明顯差異。文獻(xiàn)報(bào)道，10白癜風(fēng)皮損區(qū) MSRA的表達(dá)/活性顯著降低，10－3M的H2O2可使重組MSRA，MSRB的活性分別下降85%，40%。同時(shí)，周舟等11研究表明，MSRA表達(dá)水平下降會(huì)導(dǎo)致黑素細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激的敏感性增高，同時(shí)MSRA表達(dá)水平下降及失活不利于黑素細(xì)胞功能及生存。H2O2介導(dǎo)的氧化應(yīng)激不僅顯著降低白癜風(fēng)患者中的MSRA表達(dá)水平，而且MSRA自身也因H2O2氧化而失活。Giovannelli等12－18發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)患者外周單個(gè)核細(xì)胞DNA鏈斷裂及DNA堿基被氧化的水平顯著高于對(duì)照組。

脂質(zhì)過(guò)氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑，而且通過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng)，放大活性氧的作用。因此，初始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成，這些分解產(chǎn)物部分能引起細(xì)胞代謝及功能障礙，甚至死亡。氧自由基不但通過(guò)生物膜中多不飽和脂肪酸的過(guò)氧化引起細(xì)胞損傷，而且還能通過(guò)脂氫過(guò)氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。學(xué)者推測(cè)，白癜風(fēng)中存在著一個(gè)惡性循環(huán)，H2O2使抗氧化酶失活，一方面導(dǎo)致清除ROS的能力下降，另一方面紊亂的黑素合成/代謝通路及6BH4再循環(huán)通路會(huì)異常產(chǎn)生更多的H2O2。

皮膚的抗氧化防御系統(tǒng)隨著有氧代謝共同發(fā)展以拮抗ROS的不利影響。這些抗氧化分子包括氧化酶，如SOD、CAT、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶、谷胱甘肽還原酶、谷胱甘肽－S－轉(zhuǎn)移酶、硫氧還蛋白/硫氧還蛋白還原酶、醌還原酶。還包括一些小分子物質(zhì)，如維生素C、維生素E、GSH、硫醇、氨基酸中的甲硫氨酸和色氨酸，6、7－四氫生物蝶呤、類脂酸以及非金屬的硒。4SOD作為唯一的以自由基為底物的酶，可將單線態(tài)氧歧化為H2O2，CAT可將H2O2分解為水和氧?？勺鳛榧?xì)胞氧化損傷的標(biāo)志，SOD活性增強(qiáng)，是由于機(jī)體內(nèi)氧自由基增多，SOD活性代償性升高。而丙二醛(MDA)的量常常反映機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA的測(cè)定常常與SOD的測(cè)定相互配合，SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度?；谝陨习l(fā)現(xiàn)，通過(guò)清除表皮H2O2而實(shí)現(xiàn)色素恢復(fù)是治療白癜風(fēng)的途徑之一。海藻糖是在酵母中發(fā)現(xiàn)的二糖，海藻糖對(duì)生物體具有神奇的保護(hù)作用，在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環(huán)境條件下在酵母細(xì)胞表面能形成獨(dú)特的保護(hù)膜，有效地保護(hù)蛋白質(zhì)分子不變性失活，從而維持生命體的生命過(guò)程和生物特征。海藻糖應(yīng)用于保濕類化妝品及食品防腐劑具有抗氧化作用。

本實(shí)驗(yàn)擬在體外構(gòu)建黑素瘤細(xì)胞(M14)氧化應(yīng)激細(xì)胞模型，該模型在100 μmol/L至400 μmol/L濃度的過(guò)氧化氫誘導(dǎo)下，細(xì)胞功能改變，但是這種損傷不會(huì)造成細(xì)胞死亡，而且在適宜的抗氧化劑的作用下，這些損傷還有可能被修復(fù)，但高濃度過(guò)氧化氫長(zhǎng)時(shí)間作用細(xì)胞就可觸發(fā)細(xì)胞器質(zhì)性損害和不可逆損傷。既往實(shí)驗(yàn)證實(shí)基因產(chǎn)生表達(dá)變化間隔時(shí)間為4 h，18同時(shí)考慮到長(zhǎng)時(shí)間的氧化作用會(huì)對(duì)細(xì)胞造成不可逆損傷甚至死亡，19因此本實(shí)驗(yàn)選擇過(guò)氧化氫作用細(xì)胞的時(shí)間為60 min。本研究使用MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活率，MTT進(jìn)入細(xì)胞后被線粒體脫氫酶還原生成藍(lán)色formazan顆粒，經(jīng)溶劑溶解后比色定量，其顏色深淺直接與活細(xì)胞數(shù)有關(guān)，從而確定其存活率。同時(shí)本實(shí)驗(yàn)根據(jù)細(xì)胞代謝活動(dòng)與活細(xì)胞數(shù)直接成比例的原理，通過(guò)測(cè)定M14黑素瘤細(xì)胞代謝活性的減少來(lái)衡量H2O2作用M14細(xì)胞引起氧化應(yīng)激損傷的程度。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見(jiàn)，不同濃度的H2O2作用于M14黑素瘤細(xì)胞60 min后，各濃度H2O2作用細(xì)胞存活率與正常對(duì)照組相比均降低。隨著H2O2濃度升高，細(xì)胞存活率逐漸降低。而加入保護(hù)劑組，即同時(shí)加入1 μg/mL海藻糖和H2O2作用M14細(xì)胞60 min，細(xì)胞存活率及活性與H2O2單獨(dú)處理組相比有升高。但是海藻糖對(duì)高濃度H2O2處理?yè)p害細(xì)胞已無(wú)保護(hù)作用。低濃度H2O2對(duì)M14黑素瘤細(xì)胞的活性有影響，如細(xì)胞內(nèi)DNA，脂質(zhì)和蛋白質(zhì)會(huì)有變化，但是這種損傷不會(huì)造成細(xì)胞死亡，加入膜保護(hù)劑后細(xì)胞活性恢復(fù)，因此根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果過(guò)氧化氫的最佳作用濃度范圍為100

μmol/L至 400 μmol/L。如果高濃度 H2O2使細(xì)胞DNA產(chǎn)生不可逆性損傷，因海藻糖不能使受損DNA恢復(fù)，此時(shí)對(duì)細(xì)胞的保護(hù)作用有限。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，過(guò)氧化氫作用M14黑素瘤細(xì)胞后引起可逆性損害的濃度為100 μmol/L至400 μmol/L，作用時(shí)間為60 min，可以成功構(gòu)建過(guò)氧化氫誘導(dǎo)M14細(xì)胞體外氧化應(yīng)激模型。并摸索出膜保護(hù)劑海藻糖濃度為1 μg/mL時(shí)可提高過(guò)氧化氫損傷細(xì)胞的存活率。本模型具備操作簡(jiǎn)便、模擬性和可控性，為進(jìn)一步揭示氧化應(yīng)激機(jī)制以及研究和篩選抗氧化藥物奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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(收稿:2014－07－01 修回:2014－10－08)

Protection of trehalose against damage of hydrogen peroxide to melanoma cell lines M14

ZHANG Yu，WANG Bao-xi，YAO Xu，et al.Institute of Dermatology，Peking Union Medical College and Chinese Academy of Medical Sciences，Nanjing，210042

Objective:To determine the protective effect of trehalose against the damage of hydrogen peroxide to the melanoma cell lines M14.Methods:Melanoma cell lines M14 induced by hydrogen peroxide were re－cultured by different concentrations of trehalose(0.5 μg/mL，1 μg/mL，10 μg/mL).The cell survival rate was detected by MTT.The activity of SOD was detected by xanthine oxidase technique.Results:The antioxidation of 1 μg/mL trehalose was obvious.1 μg/mL trehalose improved the survival rate and the activity of SOD of M14 cells induced by low－concentration(＜400 μmol/L)hydrogen peroxide by 33%and 20%respectively.The survival rate of M14 cells induced by high－concentration(＞400 μmol/L)hydrogen peroxide was not increased after re－cultured in different concentrations of trehalose.Conclusion:1 μg/mL trehalose is protective against the damage of low－concentration(＜400 μmol/L)hydrogen peroxide to the melanoma cell lines M14.

H2O2；melanoma cells；oxidative stress；trehalose

中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院皮膚病研究所，南京，210042

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