陳能橋，趙福葳，毛以智，朱大舉，李紅艷，冉 浴

（1.貴州省遵義市動物疫病預防控制中心，貴州 遵義 563000；2.遵義市綏陽縣動物疫病預防控制中心，遵義 綏陽 563300）

豬O型口蹄疫不同疫苗免疫抗體消長規(guī)律研究

陳能橋1，趙福葳1，毛以智1，朱大舉2，李紅艷2，冉 浴2

（1.貴州省遵義市動物疫病預防控制中心，貴州 遵義 563000；2.遵義市綏陽縣動物疫病預防控制中心，遵義 綏陽 563300）

本試驗隨機篩選出90頭口蹄疫母源抗體為陰性的53～73日齡仔豬為試驗動物，平均分成A、B、C3組，分別注射豬口蹄疫O型滅活疫苗2 mL、4 mL和合成肽疫苗1 mL，進行免疫后不同時段的免疫抗體跟蹤監(jiān)測，探索豬口蹄疫O型不同疫苗和滅活疫苗不同免疫劑量免疫后免疫抗體的消長規(guī)律。結果表明：A、B、C組的群體保護率都較好，其中C組的群體保護率穩(wěn)定時間長，未見免疫副反應，效果最好。

口蹄疫疫苗；豬；抗體消長；規(guī)律

豬O型口蹄疫是由O型口蹄疫病毒引起的豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病傳播迅速，發(fā)病率高，是世界動物衛(wèi)生組織（OIE）規(guī)定必須報告的傳染病之一，我國將其列為一類動物疫病[1-2]。長期以來，使用豬O型口蹄疫疫苗免疫接種是我國預防本病的重要措施[3-5]。為科學制定豬O型口蹄疫的免疫程序，合理使用豬口蹄疫O型滅活疫苗和合成肽疫苗，于2014年在我市綏陽縣某種豬場，隨機篩選90頭53～73日齡仔豬分組進行豬口蹄疫O型滅活疫苗和合成肽疫苗及豬口蹄疫O型滅活疫苗不同劑量免疫后副反應調(diào)查、免疫抗體水平和抗體維持時間等相關工作的研究。

1 材料與方法

1．1 試驗動物

隨機選擇53～73日齡的仔豬若干頭，無菌前腔靜脈采血分離血清，用酶聯(lián)免疫吸附試驗檢測口蹄疫母源抗體，篩選母源抗體陰性的仔豬90頭為試驗動物。將90頭仔豬隨機分成A、B、C 3組，每組30頭，對每頭仔豬進行編號。

1．2 試驗疫苗

上海某生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型合成肽疫苗（多肽2570+7309）；蘭州某生物科技股份有限公司生產(chǎn)的豬口蹄疫O型滅活疫苗（O/ MYA98/BY2010株）。

1．3 檢測試劑

A組和B組用豬口蹄疫病毒O型抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法），鄭州中道生物技術有限公司生產(chǎn)。C組用O型口蹄疫病毒ELISA抗體檢測試劑盒，武漢科前生物制品有限責任公司生產(chǎn)。

1．4 免疫劑量A組每頭仔豬耳根后肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗2 mL；B組每頭仔豬耳根后肌肉注射豬口蹄疫O型滅活疫苗4 mL；C組每頭仔豬耳根后肌肉深層注射豬口蹄疫O型合成肽疫苗1 mL。

1．5 免疫副反應調(diào)查

免疫后72 h內(nèi)細心觀察試驗仔豬是否出現(xiàn)采食減少、體溫升高甚至死亡等免疫副反應。

1．6 采血時間

分別于免疫后第7 d、15 d、30 d、45 d、60 d、90 d、120 d、150 d和180 d，進行無菌前腔靜脈采血并分離血清，4 ℃保存，次日檢測。

1．7 抗體檢測

酶聯(lián)免疫吸附試驗。按檢測試劑盒使用說明書操作、判定。A組和B組：樣品OD450nm值≥Cut Off值時判為陽性；樣品OD450nm值＜Cut Off值時判為陰性；C組：樣品OD630nm值≥0．4時判為陽性；樣品OD630nm值＜0．4時判為陰性。

2 結果與分析

1)免疫副反應調(diào)查結果見表1和圖1，本試驗共有28頭豬出現(xiàn)了不同程度的免疫副反應，表現(xiàn)為精神沉郁、體溫升高、嘔吐和腹瀉，其中A組6頭，B組22頭，C組未見免疫副反應，28頭豬均在72 h內(nèi)自愈。

2)各組免疫后不同時間抗體的檢測結果見表2、圖2和圖3。整個試驗過程因其他原因導致6頭豬死亡， 其中A組2頭，即 45 d和150 d各死亡1頭；B組于45 d死亡1頭；C組3頭，即15 d死亡1頭、45 d死亡2頭。從表2、圖2和圖3可知， A組7 d時免疫抗體陽性率即群體保護率為20．00%，15～150 d群體保護率均＞70%； B組和C組免疫第7天時群體保護率分 別 為 76．67%、73．33%，150 d時3組的群體保護率分別為71．43%、75．86%和77．78%。3個試驗組免疫后150 d豬的群體保護率均達到農(nóng)業(yè)部規(guī)定≥70%的標準。由表2知，接種豬口蹄疫O型滅活疫苗2 mL后，15～150 d免疫豬群體的群體保護率＞70%，所以生產(chǎn)中遵照疫苗使用說明書規(guī)范操作，就可獲得較好的免疫效果。

表1 免疫豬群副反應調(diào)查結果

圖1 免疫豬群副反應調(diào)查結果

表2 不同時間免疫抗體檢測結果

3 結論與討論

1）接種豬口蹄疫O型滅活疫苗72 h內(nèi)，試驗豬出現(xiàn)免疫副反應的頭數(shù)是：A組6頭，B組22頭，分別為免疫數(shù)的20．00%和73．33%（6/30、22/30）。由此可知，生產(chǎn)實踐中不應隨意加大免疫劑量，避免對動物機體造成傷害。免疫后150 d，3個試驗組群體保護率分別為71．42%、75．86%和77．77%；到180 d時，C組（合成肽組）的群體保護率為22．22%，A、B 2組因試驗豬銷售未能檢測，根據(jù)120～150 d A、B 2組抗體OD值下降的幅度可以看出，180 d時這2組豬的群體保護率都將低于70%。由此可知，接種豬口蹄疫O型滅活疫苗和豬口蹄疫O型合成肽疫苗后的群體有效保護期（免疫期）為150 d左右（圖3）。

2)對豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫抗體消長變化的研究表明，豬口蹄疫O型合成肽疫苗免疫一次，即可確保高效價抗體維持至150 d。豬口蹄疫O型合成肽疫苗具備免疫原性高，生物安全性好，免疫副反應小等優(yōu)點，在生產(chǎn)實踐中值得普及推廣。由于有1頭豬接種豬口蹄疫O型滅活疫苗后（B組，4 mL），7～150 d的檢測結果均為陰性，表明該頭豬未產(chǎn)生免疫抗體，其原因是否為加倍劑量免疫導致免疫不應答（免疫耐受）有待進一步探討。

3)在本試驗中，B組即加倍劑量注射豬口蹄疫O型滅活疫苗后，豬群提前7 d達到群體保護水平，但免疫副反應也隨之大幅度增加(為免疫數(shù)的73．33%)，主要表現(xiàn)為體溫升高、精神沉郁嘔吐和腹瀉，因此只有在緊急免疫情況下，才建議使用該種免疫方法進行免疫。C組即接種口蹄疫O型合成肽疫苗后，未見豬群出現(xiàn)以上副反應；通過表2、圖2和圖3可知，接種口蹄疫O型合成肽疫苗后豬群的群體保護率均較好，且抗體水平和群體保護率的時間較穩(wěn)定，說明接種該疫苗效果最好。

圖2 免疫豬群O型口蹄疫抗體動態(tài)檢測OD值

圖3 免疫后不同時間群體保護率

[1] 謝慶閣．口蹄疫[M]．北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004：16-27．

[2] 易悅，王利娜，徐志文，等．豬口蹄疫疫苗的研究進展及其應用[J]．豬業(yè)科學，2011，28（2）：44-48．

[3] 周小紅．豬口蹄疫免疫抗體合格率影響因素研究[J]．北京農(nóng)業(yè)，2012(12)：21-22．

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[5] Sellers R， Gloster J． Footandmouth disease： A review of intranasal infection of cattle，sheep and pigs[J]．The Veterinary Journal，2008，177(2)：159-168．

2015-07-24）

省市科技合作專項資金項目，合同號：[省市科合（2013）35號]

趙福葳，女（1963-），貴州遵義人，大學學歷，高級獸醫(yī)師，主要從事動物疫病防控及畜牧獸醫(yī)技術推廣工作，E-mail:1148638815@qq.com