心腦佳配方對酒精依賴大鼠肝損傷的保護(hù)作用

杜愛林李爽萬佳1王丹朱峰1孟莉萬光瑞

(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院生理學(xué)與神經(jīng)生物學(xué)教研室，河南新鄉(xiāng)453003)

摘要〔〕目的觀察心腦佳配方對酒精依賴大鼠肝損傷的保護(hù)作用。方法45只SD雄性大鼠隨機(jī)分為正常組、酒精依賴模型組、心腦佳配方小、中、大劑量組。用電鏡觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)的變化。檢測血清低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)水平。結(jié)果電鏡下觀察到B組肝細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹,脂滴數(shù)量增加;心腦配方小、中劑量組線粒體結(jié)構(gòu)基本正常,部分肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見少量脂滴;心腦配方高劑量組肝細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目增多。模型組大鼠血清LDL、TG、TC均高于正常組(P<0.05)；心腦配方小、中、大劑量組與模型組大鼠比較,血清LDL、TC、TG水平均有不同程度地降低；模型組大鼠血清HDL明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；心腦配方小、中、大劑量組與模型組大鼠比較，血清HDL均有不同程度地升高。結(jié)論心腦佳配方可明顯改善大鼠因酒精依賴引起的肝組織損傷。

關(guān)鍵詞〔〕心腦佳配方；酒精依賴；超微結(jié)構(gòu)；甘油三酯

中圖分類號(hào)〔〕R575.5；R285.5〔

基金項(xiàng)目：河南省科技廳基礎(chǔ)與前沿研究項(xiàng)目(No.112300410053)

通訊作者：萬光瑞(1962-)，男，碩士，教授，碩士生導(dǎo)師，主要從事藥物成癮工作。

1鄭州大學(xué)

第一作者：杜愛林(1972-)，男，碩士，副教授，主要從事藥物成癮工作。

酒精濫用一直是全球范圍內(nèi)重要的公共健康問題。心腦佳配方由葛根、天麻等六味中藥組成，是新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院萬光瑞教授從眾多對心血管和大腦有保護(hù)作用的食藥兩用中藥，按照現(xiàn)代中藥藥理研究遴選出作用強(qiáng)、安全、性能穩(wěn)定的中藥復(fù)方制劑。本文旨在為臨床有效地治療酒精依賴患者肝損傷尋找有效藥物或功能性食品。

1材料與方法

1.1主要儀器和試劑透射電子顯微鏡(H-7500，日立)。心腦佳配方：自制。

1.2動(dòng)物及分組鄭州大學(xué)動(dòng)物中心提供清潔級(jí)健康SD雄性大鼠45只〔許可證號(hào)：scxk(豫)2005-0001〕，體重120～160 g。分為正常組、模型組、心腦佳配方小、中、大劑量組。正常組大鼠正常飲食，其余各組大鼠飲含6%(V/V)酒精水溶液28 d〔1〕。酒精依賴模型組，食物正常。心腦佳配方小、中、大劑量組(總黃酮含量為260、520、780 mg)，心腦佳配方各組為相應(yīng)藥物摻入各組食物。進(jìn)行28 d，水合氯醛麻醉,腹主動(dòng)脈取血,分離血清,留取肝組織。

1.3透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)取大鼠肝組織樣品，大小約1 mm3由新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院電鏡室協(xié)助完成。

1.4血清學(xué)檢測大鼠腹主動(dòng)脈取血,分離血清，由新鄉(xiāng)市軍分區(qū)醫(yī)院檢驗(yàn)科檢測血清低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。

2結(jié)果

2.1肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化正常組肝細(xì)胞細(xì)胞核呈圓形或橢圓形，胞膜完整，核仁清晰，核膜清晰完整，線粒體形態(tài)正常，嵴結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞內(nèi)偶見小脂滴。酒精依賴模型組部分細(xì)胞胞膜不完整，細(xì)胞核異染色質(zhì)邊集。肝細(xì)胞內(nèi)線粒體腫脹變形，嵴斷裂模糊，胞質(zhì)內(nèi)充滿大量大小不一的脂滴。心腦佳配方低劑量組肝細(xì)胞內(nèi)分布大小不等的脂滴。心腦佳配方中劑量組核膜清晰，線粒體結(jié)構(gòu)基本正常，部分肝細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)可見少量脂滴。心腦佳配方高劑量組肝細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目增多，脂滴少見。見圖1。

2.2心腦佳配方對酒精依賴大鼠血清LDL、HDL、TC、TG水平的影響模型組大鼠血清LDL、TG、TC均高于正常組(P<0.05);而不同劑量的心腦佳配方組大鼠與模型組大鼠比較,血清LDL、TC、TG水平均有不同程度地降低。其中心腦配方中劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清LDL明顯降低(P<0.01)，心腦配方小、大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清LDL降低(P<0.05);配方小、中、大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清TC降低(P<0.05),心腦配方小、大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清TG降低(P<0.05),心腦配方大劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清TG明顯降低(P<0.01)。模型組大鼠血清HDL明顯低于正常組大鼠(P<0.01)；配方小劑量組大鼠與模型組大鼠比較，血清HDL升高(P<0.05),D、E組大鼠與模型組大鼠比較，血清HDL明顯升高(P<0.01)。見表1。

圖1　各組肝細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)(×12 000)

組別LDLHDLTCTG正常組2.29±0.142)0.54±0.162)1.72±0.081)0.71±0.161)模型組2.89±0.170.23±0.042.04±0.201.00±0.11低劑量組2.46±0.211)0.46±0.151)1.75±0.121)0.79±0.101)中劑量組2.45±0.132)0.40±0.032)1.77±0.471)0.75±0.181)高劑量組2.57±0.071)0.40±0.082)1.77±0.241)0.76±0.082)

與模型組比較：1)P<0.05，2)P<0.01

3討論

酒精依賴相關(guān)基因在腦或肝組織中高度表達(dá)，涉及神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)或乙醇代謝過程〔2，3〕。酒精性肝病發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，一般認(rèn)為，長期飲酒可使體內(nèi)乙醛生成量增加，NADH/NAD的平衡改變而導(dǎo)致脂肪代謝和轉(zhuǎn)運(yùn)紊亂〔4〕。酒精在體內(nèi)可通過動(dòng)員外周脂肪分解，釋放大量脂肪酸，促進(jìn)肝臟TG合成增加〔5〕。此外，酒精可加重酒精代謝產(chǎn)物的肝毒性〔6〕，導(dǎo)致肝細(xì)胞脂肪攝取增多，促進(jìn)脂肪肝的形成。患急性酒精性肝病時(shí)，肝細(xì)胞可出現(xiàn)輕微脂肪病變，表現(xiàn)為肝細(xì)胞內(nèi)有脂滴沉積〔7〕， 線粒體腫脹，偶而出現(xiàn)巨大線粒體〔8，9〕，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張斷裂， 核糖體脫失。本試驗(yàn)中通過電鏡觀察肝細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)改變 ，發(fā)現(xiàn)與正常組相比，表現(xiàn)出肝細(xì)胞脂肪變性的病理改變。 通過給予低劑量心腦佳配方組，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積有不同程度地減少；而給予中、高劑量心腦佳配方組中，大鼠肝細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)目增多提示一定劑量的心腦佳配方能夠通過促進(jìn)線粒體增生，加快乙醇在體內(nèi)的代謝過程，從而降低乙醇對肝細(xì)胞的損傷程度。心腦佳配方的這種作用可能與本配方中葛根、天麻等中藥的總黃酮對慢性酒精性肝損傷具有顯著防治作用有關(guān)。

本研究表明，酒精依賴模型機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂程度明顯加重；而對于過量飲酒所致的脂質(zhì)代謝紊亂,心腦佳表現(xiàn)出良好的調(diào)節(jié)作用，心腦佳治療組大鼠肝功能、血脂有不同程度地改善。其中，心腦佳中劑量組與低劑量組相比，療效有顯著提高；心腦佳高劑量組與中劑量組相比，療效有所提高，但并不顯著。心腦佳可明顯改善肝組織超微結(jié)構(gòu)的病理損傷， 對酒精造成的脂質(zhì)代謝紊亂具有一定的調(diào)節(jié)作用。

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〔2013-09-15修回〕

(編輯安冉冉/曹夢園)