李浩洋， 班 甲， 陳駿佳， 徐曉燕， 王 帆， 班雯婷， 胡雪梅

（廣州甘蔗糖業(yè)研究所廣東省甘蔗改良與生物煉制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東廣州510316）

二十二碳六烯酸（DHA）是一種ω-3長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸（ω-3 PUFA），可健腦，益智，提高視力。通過(guò)在畜禽飼料中添加富含不飽和脂肪酸原料，可使禽畜肌肉或其所產(chǎn)蛋、奶中DHA含量增高，為人們提供了另一種增加DHA日常攝入的途徑（代菲和何平謙，2011；Carvalho 等，2009）。 裂殖壺菌又稱裂壺藻（Schizochytrium），是屬于破囊壺菌科（Thraustochytriaceae）的一類海洋真菌，其細(xì)胞中積累大量有益的活性物質(zhì)，如油脂、色素、角鱉烯等，其中油脂占細(xì)胞干重的70%以上，總脂中DHA含量高達(dá)35%～40%，且90%以上的脂肪酸為甘油三酯形式存在的中性酯 （Yaguchi等，1997）。本試驗(yàn)將發(fā)酵并干燥得到的裂壺藻粉按不同比例添加到蛋雞飼料中，對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能、雞蛋品質(zhì)及雞蛋油脂中DHA、花生四烯酸（ARA）等脂肪酸的含量進(jìn)行監(jiān)測(cè)，探討日糧中適宜的藻粉添加量，為該類保健功能蛋的研制提供新的途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物和材料 選取240只18～20周齡杏花雞飼養(yǎng)一周后，挑選出120只體質(zhì)健康、均勻的雞只作為試驗(yàn)動(dòng)物。雞只自采食，自由飲水，自然光照加早晚定時(shí)補(bǔ)光 （按照雞舍飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)要求執(zhí)行）。日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)采用單因子重復(fù)設(shè)計(jì)，120只18～20周齡蛋種雞隨機(jī)分為4個(gè)組，每組6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5只雞。分別在基礎(chǔ)日糧添加0%、1%、2%和3%裂壺藻粉。裂壺藻粉為本實(shí)驗(yàn)室發(fā)酵制得，其中DHA含量為15%。試驗(yàn)周期25 d，期間檢測(cè)蛋雞的生產(chǎn)性能及雞蛋DHA含量的變化，并在DHA含量達(dá)峰值后，檢測(cè)雞蛋品質(zhì)。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.3.1 生產(chǎn)性能指標(biāo) 以重復(fù)為單位每天記錄存欄數(shù)、產(chǎn)蛋數(shù)、總蛋重和破軟蛋個(gè)數(shù)，計(jì)算產(chǎn)蛋率、平均蛋重、日采食量、飼料轉(zhuǎn)化率（料蛋比）、日產(chǎn)蛋量（彭瑛等，2012）。

1.3.2 雞蛋油脂含量及DHA含量 分別于7、13、25 d，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)采集3個(gè)雞蛋，用于檢測(cè)雞蛋中油脂含量和DHA含量，按照NY/T 2068-2011的方法進(jìn)行油脂提取，并經(jīng)低壓蒸餾去除溶劑，恒重，得到粗油含量，進(jìn)一步甲酯化后檢測(cè)DHA含量，按GB/T 17377-2008方法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 蛋品質(zhì) 試驗(yàn)期最后一天，每重復(fù)隨機(jī)采集7枚雞蛋，其中3枚測(cè)定蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋黃相對(duì)重、哈氏單位（彭瑛等，2012）。另外4枚雞蛋，各取兩枚分別測(cè)定蛋黃膽固醇及雞蛋脂肪酸組成及含量。

雞蛋脂肪酸含量測(cè)試按照CB/T 17377-2008方法進(jìn)行測(cè)定，蛋黃膽固醇測(cè)定按照GB/T 22220-2008提供方法進(jìn)行。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 通過(guò)SPSS 17.0軟件進(jìn)行單因素分析并進(jìn)行顯著性比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 雞蛋油脂及脂肪酸的含量變化 由表2可知，飼料中添加裂壺藻粉后，雞蛋油脂總量沒(méi)有明顯變化。由表3可見(jiàn)，雞蛋中DHA含量添加組與對(duì)照組差異顯著（P＜0.05）；在飼喂第7天時(shí)，與對(duì)照組相比，添加1%、2%、3%裂壺菌組雞蛋中DHA含量分別增加51.9%、103.7%、112.6%；添加組雞蛋中DHA含量隨飼喂時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，在飼喂第25天時(shí)，與對(duì)照組相比，1、2、3添加組雞蛋中DHA含量分別增加163.3%、206.7%、250.0%。

表2 飼料添加裂壺菌對(duì)雞蛋油脂含量的影響 %

表3 飼料添加裂壺菌對(duì)雞蛋DHA含量的影響 %

由表4可見(jiàn)，當(dāng)飼養(yǎng)試驗(yàn)進(jìn)行至25 d時(shí)，與對(duì)照組相比，添加組雞蛋的油脂中除C16∶1、ARA及DHA外，其他脂肪酸含量無(wú)顯著差異，ARA含量略有下降趨勢(shì)，而DHA含量則呈現(xiàn)隨飼料中裂壺藻粉添加量增加而上升的趨勢(shì)，組間差異顯著。ARA為ω-6 PUFA，而DHA為ω-3PUFA，試驗(yàn)中加大了蛋雞的DHA攝入量，由于ω-6PUFA和ω-3PUFA在動(dòng)物體內(nèi)不能互相轉(zhuǎn)化，并存在代謝競(jìng)爭(zhēng)，因而導(dǎo)致ARA在雞蛋油脂中的含量下降。

另外，添加組蛋黃膽固醇含量與對(duì)照組相比顯著下降，添加組間無(wú)顯著差異。膽固醇降低的原因可能是因?yàn)镻UFA能降低脂肪酸合成酶活性，從而減少脂肪的合成；同時(shí)通過(guò)抑制肝臟中膽固醇合成的關(guān)鍵酶，使極低密度脂蛋白（VLDL）的分泌減少，進(jìn)一步降低各組織中膽固醇水平（李志瓊等，2007）。

2.2 蛋雞生產(chǎn)性能 由表5可見(jiàn)，飼料添加藻粉對(duì)料蛋比、日采食量及日產(chǎn)蛋量無(wú)明顯影響，但對(duì)產(chǎn)蛋率有一定影響，當(dāng)藻粉添加量增大至3%時(shí)，產(chǎn)蛋率與對(duì)照組相比下降22.1%（P＜0.05）。因此裂壺藻粉的添加量應(yīng)控制在3%以下。日糧中添加抗氧化劑有可能降低這種負(fù)效應(yīng)。潘學(xué)燕和高玉鵬（2008）在日糧中添加較高水平的胡麻籽、紫蘇籽生產(chǎn)富集PUFA功能蛋時(shí)，發(fā)現(xiàn)與對(duì)照相比，蛋雞產(chǎn)蛋率、平均蛋重、雞產(chǎn)蛋量均有不同程度的降低，但添加抗氧化劑（以茶葉粉為主原料的復(fù)合粉劑和維生素E）能緩解這種負(fù)效應(yīng)，其中以茶葉粉為主原料的復(fù)合粉劑的緩解效應(yīng)優(yōu)于維生素E。

表4 飼喂25 d雞蛋油脂的脂肪酸組成及蛋黃膽固醇含量 %

表5 飼料添加藻粉對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能的影響

2.3 雞蛋品質(zhì) 由表6可見(jiàn)，飼料添加藻粉對(duì)蛋殼厚度、蛋黃相對(duì)重、平均蛋重均無(wú)顯著影響；雖然3%添加組的蛋形指數(shù)和2%添加組的哈氏單位與對(duì)照組相比具有顯著差異，但總體上添加組的蛋形指數(shù)均為1.30～1.35，為正常范圍，添加組的哈氏單位為75～80，大于72，均為特級(jí)，說(shuō)明本試驗(yàn)藻粉添加范圍內(nèi)不會(huì)影響雞蛋的食用價(jià)值和商品價(jià)值。

3 討論

目前生產(chǎn)富含DHA雞蛋有兩種方法：一是在蛋雞飼料中添加含有DHA的原料魚(yú)油。在蛋雞飼料中添加魚(yú)油，其中的DHA可直接沉積于雞蛋中，提高雞蛋中DHA含量。但魚(yú)油中的多不飽和脂肪酸容易氧化，接觸金屬離子、遇熱、見(jiàn)光等都可導(dǎo)致氧化，魚(yú)油氧化導(dǎo)致飼料品質(zhì)下降，直接影響動(dòng)物對(duì)其利用效果（唐桂芬等，2010）。二是在蛋雞飼料中添加富含α-亞麻酸（ALA）的亞麻籽、紫蘇籽、胡麻或其相對(duì)應(yīng)的油脂。ALA是DHA的前體物質(zhì)，在蛋雞體內(nèi)通過(guò)延長(zhǎng)作用和去飽和作用可轉(zhuǎn)化DHA，但與ALA含量相比，轉(zhuǎn)化沉積在雞蛋內(nèi)的EPA和DHA的含量較低。楊彩霞等（2000）在產(chǎn)蛋雞日糧中添加8%胡麻油，試驗(yàn)4周后蛋黃中DHA占脂肪酸的含量由約1%上升至2.5%；沈勇等（2012）在日糧中添加6%含量的亞麻籽，25 d后蛋黃油中的DHA含量由4.15 mg/g上升至7.33 mg/g。郭寶海等（2003）在日糧中添加總量為3%胡麻油和月莧草油（3∶2），試驗(yàn)6周后，蛋黃脂肪酸中的DHA含量由96 mg/枚上升至158 mg/枚。臧素敏等（2004）在蛋雞日糧中加入20%紫蘇，28 d后蛋黃總脂中DHA由0.98%上升至2.94%。李志瓊等（2007）在日糧中添加1.0%α-亞麻酸，對(duì)海蘭褐產(chǎn)蛋雞飼喂4周后蛋黃脂肪中DHA的含量由1.3%上升至1.85%。

表6 飼料添加藻粉對(duì)雞蛋品質(zhì)的影響

與上述兩種方法相比，添加裂壺藻粉具有以下優(yōu)勢(shì)：（1）與添加富含ALA原料相比，裂壺藻粉可直接提高雞蛋中的DHA含量，DHA沉積速度快，雞蛋DHA富集穩(wěn)定的時(shí)間更短。從本試驗(yàn)數(shù)據(jù)可見(jiàn)日糧添加2%的裂壺藻粉，飼喂13 d時(shí)，雞蛋油脂中DHA含量已達(dá)對(duì)照組的3倍。（2）與魚(yú)油相比，裂壺藻粉中的DHA等不飽和脂肪酸由于包藏于細(xì)胞壁內(nèi)，因此相對(duì)不容易發(fā)生氧化。而與深海漁業(yè)資源的有限性相比，裂殖壺菌則不存在該局限性。

此外，利用魚(yú)油與亞麻籽等飼喂蛋雞時(shí)，魚(yú)油中的二十碳五烯酸（EPA）可直接在雞蛋中積累，亞麻籽中的ALA也會(huì)在蛋雞體內(nèi)轉(zhuǎn)化為EPA后進(jìn)入蛋黃，所以用這兩種原料生產(chǎn)的DHA雞蛋中同時(shí)含有DHA與EPA。盡管EPA和DHA都是對(duì)人體有益的多不飽和脂肪酸，但他們的作用有一定差別。以健腦、增強(qiáng)記憶力和提高視力為目的的嬰幼兒、青少年、孕婦等群體應(yīng)服用以DHA為主，不含或少含EPA的產(chǎn)品 （肖玫和歐志強(qiáng)，2005）。而裂壺藻粉油脂中不含EPA，因此用其作為飼料添加劑生產(chǎn)的雞蛋適用人群更廣。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，在蛋雞日糧中添加裂壺藻粉（DHA含量為15%）可使雞蛋中的DHA含量顯著提升，并能降低雞蛋膽固醇含量；適宜的添加量應(yīng)低于3%，在該水平下，不影響蛋雞生產(chǎn)性能及雞蛋品質(zhì)。同時(shí)，蛋雞日糧添加裂壺藻粉具有雞蛋DHA沉積速度快，且不含EPA的特點(diǎn)。

[1]代菲，何平謙.DHA雞蛋的開(kāi)發(fā)和前景分析[J].養(yǎng)殖技術(shù)顧問(wèn)，2011，6：78.

[2]郭寶海，馬秋剛，計(jì)成，等.日糧中添加月莧草油與胡麻油對(duì)蛋黃脂肪酸的影響[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，8（3）：91 ～ 94.

[3]李志瓊，陳代文，張克英.α-亞麻酸對(duì)產(chǎn)蛋雞膽固醇、甘油三酯含量和脂肪酸組成的影響[J].中國(guó)畜牧雜志，2007，43（23）：17 ～ 19.

[4]潘學(xué)燕，高玉鵬.n-3系列多不飽和脂肪酸（PUFA）富集保健功能蛋開(kāi)發(fā)研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008，17（1）：20 ～ 26.

[5]彭瑛，占今舜，李麗立，等.飼糧中添加 DHA復(fù)合添加劑對(duì)蛋雞生產(chǎn)性能和蛋品質(zhì)的影響[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，33（4）：539 ～ 543.

[6]沈勇，王建發(fā)，郭麗，等.亞麻籽對(duì)雞蛋蛋黃中DHA和EPA含量的影響[J].營(yíng)養(yǎng)學(xué)報(bào)，2012，34（1）：50 ～ 54.

[7]唐桂芬，王金榮，張長(zhǎng)興，等.氧化魚(yú)油對(duì)肉雞生產(chǎn)性能和肌肉品質(zhì)的影響[J].飼料工業(yè)，2010，31（9）：22 ～ 25.

[8]肖玫，歐志強(qiáng).深海魚(yú)油中兩種脂肪酸（EPA和DHA）的生理功效及機(jī)理的研究進(jìn)展[J].食品科學(xué)，2005，26（8）：522 ～ 526.

[9]楊彩霞，計(jì)成，丁麗敏，等.n-3脂肪酸的代謝和日糧α-亞麻酸強(qiáng)化雞蛋的研究[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2000，5（1）：117 ～ 122.

[10]臧素敏，李同洲，何萬(wàn)紅，等.添加紫蘇對(duì)雞蛋多不飽和脂肪酸及脂質(zhì)代謝的影響研究[J].中國(guó)畜牧雜志，2004，40（1）：14 ～ 16.

[11]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T17377-2008[S].中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)—?jiǎng)又参镉椭舅峒柞サ臍庀嗌V分析.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009-1-20.

[12]中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T22220-2008[S].中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)—食品中膽固醇的測(cè)定高效液相色譜法.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008-10-1.

[13]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.NY/T2068-2011[S].中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)-蛋與蛋制品中ω-3多不飽和脂肪酸的測(cè)定 氣相色譜法.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2011.12-1.

[14]Carvalho P R，Pita M C G，Piber N E，et al.Effect of PUFA-rich supplements from marine sources in the feed of laying hens on lipid composition and the percentage of incorporation of n-6 PUFAs in egg yolk[J].Arquivos do Instituto Biológico，2009，76（2）：173 ～ 186.

[15]Yaguchi T，Tanaka S，Yokochi T，et al.Production of high yields of docosahexaenoic acid by Schizochytrium sp.strain SR21[J].Journal of the American Oil Chemists’ Society，1997，74（11）：1431 ～ 1434.