陳 羽， 徐 威

(沈陽藥科大學 生命科學與生物制藥學院，遼寧 沈陽 110016)

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苦參水提液的殺菌效果

陳 羽， 徐 威*

(沈陽藥科大學 生命科學與生物制藥學院，遼寧 沈陽 110016)

采用懸液定量殺菌試驗，對苦參水提液的殺菌效果進行實驗室研究。研究發(fā)現(xiàn)，苦參水提液對金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草芽胞桿菌、白假絲酵母菌和黑曲霉均具有明顯的殺菌作用。通過模擬現(xiàn)場試驗，苦參水提液起到了顯著地殺菌效果。

苦參；消毒劑；懸液定量殺菌試驗

由于中草藥具有天然、污染小、毒副作用小、過敏反應少和不易產(chǎn)生抗藥性等特點，能夠克服抗生素被濫用帶來的弊端而備受人們青睞[1]?？鄥?SophoraflavescensAit.)為豆科槐屬植物，具有清熱燥濕、殺蟲、利尿之功效。據(jù)文獻報道，苦參對痢疾桿菌、金黃色葡萄球菌、維白痢沙門氏菌等均具有明顯抑制作用, 對瑾色毛癬菌等十多種皮膚真菌也具有不同程度的抑制作用[2]。市場上中藥類殺菌消毒產(chǎn)品并不多見。本文對苦參水提液的殺菌效果進行了實驗室研究，為合理開發(fā)新型苦參復配消毒劑產(chǎn)品提供技術基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌種 金黃色葡萄球菌(StaphylococcusaureusATCC 6538)、大腸埃希菌(Escherichiacoli8099)、枯草芽胞桿菌(BacillussubtilisATCC 9372)、白假絲酵母菌(CanidiaalbicansATCC 10231)和黑曲霉(AspergilliusnigerATCC 16404)，由沈陽藥科大學微生物學與細胞生物學教研室提供。

1.1.2 培養(yǎng)基(g/L) 營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：蛋白胨10.0，牛肉膏5.0，氯化鈉5.0，瓊脂粉14.0；沙堡瓊脂培養(yǎng)基：葡萄糖40.0，蛋白胨10.0，瓊脂粉14.0。

1.1.3 緩沖液(g/L) 磷酸鹽緩沖液：無水磷酸氫二鈉2.83，磷酸二氫鉀1.36，pH 7.2；中和劑：硫代硫酸鈉2.0，溶解于磷酸鹽緩沖液中，起中和苦參水提液的殺菌作用。

1.2 方法

1.2.1 苦參水提液的制備 取苦參(安國昌達中藥材飲片有限公司)200 g, 加適量水煎煮3次, 煎煮時間分別為20、40和60 min, 用8層紗布過濾, 合并濾液, 濃縮至500 mL，保存于4 ℃冰箱中備用。

1.2.2 菌懸液的制備 試驗菌為S.aureusATCC 6538、E.coli8099和C.albicansATCC 10231。取磷酸鹽緩沖液5.0 mL加入新鮮斜面培養(yǎng)物試管內(nèi)，反復吹吸，洗下菌苔。用移液管將洗液移至另一無菌試管中，用渦旋混合器振蕩20 s，使菌體懸浮均勻。初步制成的菌懸液，先用比濁測定法測其含菌濃度，再用磷酸鹽緩沖液稀釋至1×1011～ 5×1011cfu/L。菌懸液使用時，應先進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。

1.2.3 芽胞懸液的制備 取已經(jīng)活化3代的B.subtilisATCC 9372液體培養(yǎng)物3 mL，接種于羅氏瓶中營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基表面，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)8 d。采用孔雀綠法進行芽胞染色。當芽胞形成率達95%以上時，即可進行懸液的制備。用無菌水30 mL輕輕推刮菌苔，集中于一含玻璃珠的無菌三角瓶中，振搖30 min，分散培養(yǎng)物，使成均勻的懸液。將盛裝上述懸液的三角瓶置于45 ℃水浴中24 h，使菌自溶斷鏈，分散成單個芽胞。最后，將三角瓶放于80 ℃水浴中10 min，以殺滅殘余的細菌繁殖體，待冷至室溫后，即為芽胞懸液。芽胞懸液使用時，應先進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。

1.2.4 黑曲霉孢子懸液的制備 用接種環(huán)劃線接種A.nigerATCC 16404于沙堡斜面培養(yǎng)基上，置28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)10 d。吸取0.05%吐溫-80水溶液4 mL置于斜面表面, 刮洗分生孢子，將孢子懸液移入裝有玻璃珠的三角瓶中，輕輕振搖30 min后，濾過除去菌絲。孢子懸液使用時，應先進行活菌培養(yǎng)計數(shù)。

1.2.5 中和劑的考察試驗 設平行8組試驗，以S.aureusATCC 6538為試驗菌，按懸液定量殺菌試驗程序進行[3]。a：消毒液+菌懸液；b：(消毒液+菌懸液)+中和劑；c：中和劑+菌懸液；d：(消毒液+中和劑)+菌懸液；e：磷酸鹽緩沖液+菌懸液(正常菌對照)；f：磷酸鹽緩沖液；g：中和劑；h：培養(yǎng)基。中和劑及其濃度的判定標準：a組不長菌或僅有極少數(shù)菌落生長；b組有菌落生長，較a組為多，但較c、d、e組為少；c、d、e組菌落數(shù)分別在1×108～5×109cfu/L之間，且組間菌落數(shù)誤差率不應超過15%；f、g、h組無菌生長。由此可判定所選中和劑及其濃度適宜。

1.2.6 懸液定量殺菌試驗 試驗時，先將內(nèi)裝5 mL苦參水提液的試管置于20 ℃水浴中5 min，再將0.1 mL菌懸液加入其中，混勻，作用至規(guī)定時間。取0.5 mL菌藥混和液，移入4.5 mL中和劑溶液的試管中，混勻，中和作用10 min。取0.1 mL涂平板，置恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，活菌計數(shù)。以內(nèi)裝5 mL標準硬水的試管同步操作所得活菌數(shù)為基準，計算殺菌率。

1.2.7 模擬現(xiàn)場試驗 選擇木質桌面，在桌面上劃定5 cm×5 cm范圍的2個不同區(qū)域，分別標記為基準區(qū)和苦參水提液區(qū)。以涂抹法污染E.coli8099懸液(菌數(shù)為1×107cfu/L)，待自然干燥后進行試驗。消毒前，將無菌棉拭于5 mL磷酸鹽緩沖液試管中沾濕，以涂抹法在基準區(qū)采樣作基準；將苦參水提液均勻噴涂在苦參水提液區(qū)，作用10 min，以同樣方法進行消毒后采樣。分別將消毒前后采樣棉拭采樣端剪入5 mL中和劑試管內(nèi),活菌計數(shù)，觀察殺菌效果。

2 結果與分析

2.1 中和劑的考察試驗

經(jīng)檢測，用2 g/L硫代硫酸鈉可有效中和苦參水提液的殺菌作用，中和劑及中和產(chǎn)物對受試菌及培養(yǎng)基均無影響(見表1)。

表1 消毒劑的中和劑試驗

2.2 苦參水提液的殺菌作用考察

采用懸液定量殺菌試驗，考察苦參水提液對S.aureusATCC 6538、E.coli8099、B.subtilisATCC 9372、C.albicansATCC 10231和A.nigerATCC 16404的殺菌效果(見表2)。從表2數(shù)據(jù)可以看出，隨著作用時間的增加，苦參水提液起到了顯著的殺菌效果。

表2 苦參水提液的殺菌效果

2.3 模擬現(xiàn)場試驗

用苦參水提液進行模擬現(xiàn)場試驗。試驗結果表明，苦參水提液對E.coli8099懸液作用10 min，殺菌率為87.59%。說明苦參水提液具有明顯的殺菌作用。

3 討 論

目前市場上所使用的消毒劑一般都是化學消毒劑, 如醋酸氯己定、過氧乙酸、二氧化氯、甲醛等，雖然殺菌效果顯著，但都存在一定的缺陷，如具有刺激性氣味、腐蝕性強等。中草藥消毒劑對環(huán)境無污染、無刺激性、使用安全、無副作用、氣味芳香，近幾年來頗受關注，在其研制方面取得了很大進展，在劑型上也越來越先進。但中藥消毒劑也存在著一些不足, 如提取工藝復雜、費用過高、效果不夠穩(wěn)定等，仍需進一步的探討和改進[4-5]。

本課題組對苦參水提液的殺菌消毒效果進行了實驗室研究。研究發(fā)現(xiàn)，苦參水提液對某些細菌(S.aureusATCC 6538、E.coli8099)、細菌芽胞(B.subtilisATCC 9372)，某些酵母菌和曲霉菌(C.albicansATCC 10231、A.ninerATCC 16404)均起到了顯著的殺菌效果，為合理開發(fā)新型苦參復配消毒產(chǎn)品提供了理論依據(jù)。

[1] 王瑞君.幾種中草藥對金黃色葡萄球菌體外抑制作用的研究[J].現(xiàn)代食品科技，2009，25(9)：1104-1106.

[2] 胡仁火.五種中藥提取液對細菌作用效果初探[J].咸寧學院學報，2006，26(6)：133-135.

[3] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.消毒技術規(guī)范[S].北京，中華人民共和國衛(wèi)生部，2002：9-200.

[4] 孫貴豫，許吟，楊懷.對母嬰病房空氣消毒方法結果比較[J].護士進修雜志，1996，11(5)：43-45.

[5] 高慧，張思超.中藥消毒劑研究現(xiàn)狀[J].山東中醫(yī)藥大學學報，2004，28(6)：476-478.

Germicidal Efficacy of the Sophora flavescens Aqueous Extract

CHEN Yu, XU Wei

(Schl.ofLifeSci. &Biopharm.,ShenyangPharm.Univ.,Shenyang110016)

The germicidal efficacy of theSophoraflavescensaqueous extract (SFAE) was studied using suspension quantitative germicidal test in the laboratory. It was found that SFAE had obvious germicidal efficacy againstStaphylococcusaureusATCC 6538,E.coli8099,BacillussubtilisATCC 9372,CanidiaalbicansATCC 10231 andAspergilliusnigerATCC 16404. On-the-spot simulation test, the SFAE had obvious germicidal efficacy.

SophoraFlavescens; disinfectant; suspension quantitative germicidal test

陳羽 男，碩士，講師。主要從事微生物制藥及消毒劑的殺菌消毒研究。E-mail:chenyu0208303@126.com

* 通訊作者。女，博士，教授，碩士生導師。主要從事微生物制藥及微生物轉化生物活性物質的研究。E-mail:gzweishengwu@126.com

2013-12-18；

2014-02-25

Q815

B

1005-7021(2015)04-0110-03

10.3969/j.issn.1005-7021.2015.04.020