郭 丹，門德才★，王來有，高景旭，趙艷嬌，史曉杰，李鳳均

（1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼寧 遼陽 111000；2.遼寧省北鎮(zhèn)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 北鎮(zhèn) 121000）

豁眼鵝血液生化遺傳標(biāo)記與生產(chǎn)性能的相關(guān)性研究

郭 丹1，門德才1★，王來有1，高景旭1，趙艷嬌1，史曉杰2，李鳳均1

（1.遼寧省畜牧科學(xué)研究院，遼寧 遼陽 111000；2.遼寧省北鎮(zhèn)市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，遼寧 北鎮(zhèn) 121000）

本研究利用兩個(gè)血液蛋白標(biāo)記(轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白）和兩個(gè)血液酶活性標(biāo)記（血清酯酶和血清淀粉酶），開展在遼寧省地方豁眼鵝上的多態(tài)性研究，結(jié)果表明，其中有3個(gè)血液蛋白（酶）位點(diǎn)具有多態(tài)性，并且皆由2個(gè)等位基因控制。并根據(jù)生化標(biāo)記的多態(tài)性與豁眼鵝性能的關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)鐵蛋白和酯酶只對豁眼鵝的生長性狀有相關(guān)關(guān)系，而血清淀粉酶與生長性狀和繁殖性狀都有相關(guān)性，并篩選出3個(gè)可用于豁眼鵝選育的候選遺傳標(biāo)記。

豁眼鵝；生化遺傳標(biāo)記；生產(chǎn)性能；相關(guān)分析

豁眼鵝原產(chǎn)于遼寧昌圖，體型輕小緊湊，頭中等大小，額前有表面光滑的肉瘤。眼呈三角形。上眼瞼有一疤狀缺口。額下偶有咽袋。體軀蛋圓形，背平寬，胸滿而突出。喙、肉瘤、脛、蹼橘紅色，羽毛白色。初生重公鵝仔鵝70～77.7 g，母鵝仔鵝68.4～78.5 g，成年體重公鵝仔鵝3.7～4.5 kg，母鵝仔鵝3.5～4.3 kg。屠宰測定：全凈膛公鵝為70.3%～72.6%，母鵝為69.3%～71.2%。產(chǎn)蛋量半放牧半舍飼年產(chǎn)100枚以上，蛋重為120～130 g，殼白色。蛋形指數(shù)1.41～1.48，殼厚0.45～0.51 mm。公母配種比例1:6～1:7，種蛋受精率為85%左右[1]。為進(jìn)一步開展豁眼鵝的精準(zhǔn)化選育，提高主要經(jīng)濟(jì)性狀，筆者在豁眼鵝核心群中開展了血液蛋白（酶）多態(tài)性與生產(chǎn)性能關(guān)系的研究。血液蛋白（酶）多態(tài)性作為一種重要的生化遺傳標(biāo)記，已被廣泛應(yīng)用于探討畜禽品種的起源、進(jìn)化，并進(jìn)一步開展了其與經(jīng)濟(jì)性狀的關(guān)系的研究，試圖通過畜禽標(biāo)記輔助選擇（markerassistedseleetion，MAS）提高選種的準(zhǔn)確性。雖然目前DNA多態(tài)標(biāo)記的研究正在以前所未有的速度發(fā)展，但由于血液蛋白多態(tài)標(biāo)記具有經(jīng)濟(jì)、快速、簡便等優(yōu)點(diǎn)，因而仍不失為一種較好的遺傳標(biāo)記。本研究選擇了血清轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）、白蛋白（Alb）兩個(gè)蛋白標(biāo)記和血清淀粉酶（Amy）、血清酯酶（Es）兩個(gè)酶標(biāo)記，是因?yàn)檠遛D(zhuǎn)鐵蛋具有運(yùn)鐵保鐵、緩沖解毒和抑制細(xì)菌的作用，白蛋白則具有緩沖作用、營養(yǎng)作用、運(yùn)輸和調(diào)節(jié)作用，是機(jī)體必不可少的一種蛋白質(zhì)，且血清淀粉酶和酯酶與家禽的繁殖性能有著密切的相關(guān)性[2]。本文旨在通過對豁眼鵝轉(zhuǎn)鐵蛋白、白蛋白、血清淀粉酶、酯酶的多態(tài)性與繁殖、生長性能關(guān)系進(jìn)行研究，以探討利用血液蛋白多態(tài)性作為遺傳標(biāo)記選擇育種的可行性，為豁眼鵝的育種工作提供新的途徑。

1 試驗(yàn)材料

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物在豁眼鵝保種場選擇發(fā)育正常，體況良好，健康無病的成年豁眼鵝母鵝60只。年齡在24月齡左右。

1.2 主要儀器設(shè)備DYYⅢ-I型穩(wěn)壓電泳儀：北京六一儀器廠；DYCZ型垂直板電泳槽：北京六一儀器廠；TGL-16G臺式高速離心機(jī)：上海醫(yī)用分析儀器廠；京立LDS-ZA低速離心機(jī)：北京醫(yī)用離心機(jī)廠；Sartiorus電子分析天平：精確到0.l mg；微量進(jìn)樣器：0～200 μL、200～1 000 μL，北京青云航空儀表公司；pHS-3型酸度計(jì)：上海；90-2型定時(shí)恒溫磁力攪拌器：上海滬西分析儀器廠。

1.3 主要試劑丙烯酰胺、三輕甲基氨基甲烷、L一甘氨酸、過硫酸銨、考馬斯亮藍(lán)、EDTA、TEMED、甲叉雙丙烯酰胺、溴酚藍(lán)、固蘭RR鹽、β萘酚磷酸鈉、鹽酸、檸檬酸、冰醋酸、硫酸鎂、無水乙醇、甲醇、蔗糖、三氯乙酸、а乙酸萘酯、β乙酸萘酯、聯(lián)苯胺、對苯二胺鹽酸鹽、聯(lián)苯胺。

2 試驗(yàn)方法

2.1 生產(chǎn)性能測定豁眼鵝的生長性能測定：初生體重、6月齡體重、成年體重（10月齡）、年產(chǎn)蛋量、平均蛋重。

2.2 血樣采集及血漿樣品的制備對試驗(yàn)用豁眼鵝從翅下靜脈采集2 mL血樣，用肝素抗凝，以2 500 r/min離心15 min制備血漿，置于-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

2.3 電泳、染色、分型方法本試驗(yàn)對血清淀粉酶（Amy）、血清脂酶（Es）、血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）和白蛋白（PA）等位點(diǎn)。血漿淀粉酶采用連續(xù)緩沖系統(tǒng)的聚丙烯酞胺凝膠電泳法，分型參照佐佐木清綱[3]、肖朝武等[4]。血漿脂酶采用雙垂直式、不連續(xù)緩沖系統(tǒng)聚烯酞胺凝膠電泳法，分型參照Kuyrl等[5]分型酶譜。血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白的電泳方法和分型借鑒賴垣忠等[6]方法進(jìn)行。

2.4 基因型頻率和基因頻率基因型頻率是指一個(gè)群體中某一性狀的各種基因型之間的比率。

基因型頻率=該基因型個(gè)體數(shù)/被測量個(gè)體總數(shù)

基因頻率是指一個(gè)群體中某一基因?qū)ζ涞任换虻南鄬Ρ嚷省?/p>

基因頻率=[2(ii)+(ijl)+(ij2)+……(ijn)］/2N

式中，i表示純合等位基因型個(gè)體，ijl、ij2、ijn表示與i共顯性的第n個(gè)基因型個(gè)體，N為樣本總數(shù)。

3 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 電泳結(jié)果

3.1.1 血清酯酶 酯酶是催化酯類化合物水解的酶類，它催化羧酸酯類酯鍵的水解或合成。本研究表明，豁眼鵝酯酶受兩個(gè)等位基因EsA和EsB控制，表現(xiàn)為3種基因型EsAA、EsAB和EsBB。如圖1所示。

3.1.2 血清淀粉酶 血清淀粉酶是一種水解多糖分子α-1,4糖苷鍵的內(nèi)淀粉酶，家畜Amy的多態(tài)性最早是由Ashton（1958）在牛中作為線蛋白報(bào)道的，以后才證實(shí)它是一種淀粉酶。本研究表明，豁眼鵝的血清淀粉酶顯示出不同的帶型，存在多態(tài)性。經(jīng)鑒定分析，存在3種帶型。分別將這3種帶型定位AA型、AB型、BB型3種。如圖2所示。

3.1.3 血漿轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf）和白蛋白的電泳結(jié)果 血清轉(zhuǎn)鐵蛋白是一種具有結(jié)合和運(yùn)輸血清鐵離子功能的非酶蛋白質(zhì)分子，分子量為90 000。轉(zhuǎn)鐵蛋白和白蛋白的電泳圖譜如圖3，轉(zhuǎn)鐵蛋白存在2個(gè)等位基因：A和B，構(gòu)成3種基因型：AA型、AB型、BB型，豁眼鵝在血漿白蛋白位點(diǎn)上不具備多態(tài)性。

圖1 酯酶電泳圖譜Fig.1 Electrophoresis pattern of Esterase

圖2 血清淀粉酶電泳圖Fig.2 Electrophoresisse pattern of serum amylase

圖3 轉(zhuǎn)鐵蛋白電泳圖譜Fig.3 Electrophoresisse pattern of Transferrin protein

3.2 等位基因頻率計(jì)算結(jié)果見表1。

由表1可知：Tf、Es和Amy 3個(gè)蛋白位點(diǎn)呈多態(tài)性，并且皆由兩個(gè)等位基因控制，EsAA、AmyAA和TfAA為優(yōu)勢基因型，Hb位點(diǎn)呈現(xiàn)單態(tài)。經(jīng)X2檢驗(yàn)，均處于遺傳平衡狀態(tài)。

表1 3個(gè)多態(tài)性座位的基因、基因型頻率及X2值Table1 3 gene polymorphisms seats,genotype and X2value

3.3 血液蛋白多態(tài)性與生產(chǎn)性能的相關(guān)性分析數(shù)據(jù)用SPSS 10.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，差異顯著用0NEWAY AN0VA方差分析，進(jìn)行Duncan’s LSD檢驗(yàn)。

表2 豁眼鵝經(jīng)濟(jì)性狀蛋白位點(diǎn)標(biāo)記基因型的LSM及F檢驗(yàn)Table2 Huoyan economic trait loci protein marker genotypes of LSM and F test

4 小結(jié)

4.1 在六月齡體重性狀上，AmyAB型與其他位點(diǎn)存在顯著差異，可作為六月齡體重性狀的優(yōu)勢基因型。

4.2 在成年體重性狀上，EsAA型、AmyAA、TfAA型位點(diǎn)可作為成年體重的優(yōu)勢基因型。

4.3 在年產(chǎn)蛋量性狀上，AmyAA型與其他位點(diǎn)存在差異，可作為年產(chǎn)蛋量性狀的優(yōu)勢基因型。

4.4 AmyAA基因型可同時(shí)作為六月齡體重、成年體重和年產(chǎn)蛋量的優(yōu)勢基因型。

5 討論

本研究所檢測到的轉(zhuǎn)鐵蛋白、血清酯酶、血清淀粉酶，均有A、B 2個(gè)等位基因控制，轉(zhuǎn)鐵蛋白的A基因頻率為0.792、淀粉酶的A基因頻率為0.817、酯酶的A基因頻率為0.783，且均處于遺傳平衡狀態(tài)。就這3個(gè)位點(diǎn)來看，豁眼鵝選育群的純合子所占比率較大，群體的純合度較高，這與王來有[7]研究中提到的遼寧豁眼鵝的群體整齊度較高相吻合。本研究表明，血清淀粉酶與豁眼鵝的生長性狀和繁殖性狀都有相關(guān)性。關(guān)于家禽的血清淀粉酶與經(jīng)濟(jì)性狀關(guān)系的研究，前人已有報(bào)，王延峰等[8]對家雞血清淀粉酶多態(tài)性在育種中作用的研究中就表明血清淀粉酶與家禽的繁殖性能關(guān)系密切。

應(yīng)用血液蛋白質(zhì)（酶）多態(tài)性基因作為遺傳標(biāo)記可以提高選擇的準(zhǔn)確性和選擇強(qiáng)度，縮短世代間隔，加快育種目標(biāo)實(shí)現(xiàn)的速率，由于蛋白質(zhì)多態(tài)性同大多數(shù)量性狀的經(jīng)濟(jì)性建立相關(guān)較困難，所以目前的研究成果并未納入育種方案應(yīng)用，大多研究尚集中在探索標(biāo)記與數(shù)量性狀的連鎖關(guān)系分析及標(biāo)記輔助選擇的可能性階段，但由于血液蛋白質(zhì)（酶）的遺傳標(biāo)記終生不變，易識別等優(yōu)點(diǎn)，血液生化遺傳標(biāo)記輔助選擇將會(huì)在育種中發(fā)揮應(yīng)有的重要作用取得突破性進(jìn)展，促進(jìn)家禽業(yè)的大力發(fā)展。

[1]王來有.豁眼鵝品種資源概況與開發(fā)利用前景[J].中國草食動(dòng)物，2009（4）：64-65.

[2]陳寧，郭丹，門德才.大骨雞血液生化指標(biāo)與生產(chǎn)性能的相關(guān)性研究[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī)，2014（2）：17-20.

[3]佐佐木清綱.家畜的血液型及其應(yīng)用[M].李世安譯，上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社.

[4]肖朝武.雞血漿淀粉酶多態(tài)性及平衡多態(tài)的維持機(jī)制[D].廣州：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，1986.

[5]Kuryl,et al.A fourth allele in the plasma esterase-1 system of the clomestic fowl[J]. Animal Genetics,1980(17):89-94.

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[7]王來有.遼寧省豁眼鵝保種選育機(jī)制改革方案[J].中國畜禽種業(yè)，2010（2）：122-124.

[8]王延峰，文風(fēng)云，劉長海,等.家雞血清淀粉酶多態(tài)性及其在育種中的應(yīng)用[J].延安大學(xué)學(xué)報(bào)，2004（3）：66-68.

The Correlation study on The growth performance and blood biochemical parameters of Huoyan goose

Guo Dan1,Men Decai1*,Wang Laiyou1,Gao Jingxu1, Zhao Yanjiao1,Shi Xiaojie2,Li Fengjun1
（1.Animal Husbandry Institute of Liaoning Province,Liaoning Liaoyang 111000; 2.Animal Health Authority of Beizhen city,Liaoning Jinzhou 121000）

In this study,two blood protein markers(transferrin and albumin)and two blood activity Markers(serum esterase and serum amylase)are used on the the polymorphism of Liaoning Huoyan goose.The results showed that,there are three blood proteins(enzymes)loci were polymorphic,and chosen by two alleles control.According to the polymorphism associated with Huoyan biochemical markers of performance analysis,the results showed that,The Tf and Es has correlated on the growth traits of Huoyan goose,And the Amy has correlated on the growth traits and Reproductive traits of Huoyan goose,Three genetic markers can be used to breeding of Huoyan goose.

Huoyan Goose;Blood biochemical parameters;Growth performance;Related analysis

S835.2

1672-9692(2015)11-0025-05

2015-09-23

郭丹（1981-），女，碩士，高級畜牧師，主要從事動(dòng)物遺傳育種工作。

門德才（1971-），男，本科，高級畜牧師，主要從事畜禽資源環(huán)境保護(hù)工作。