解郁開心丹對(duì)抑郁模型大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的影響

周慶瑩，劉宏巖*

(長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117)

摘要：目的觀察解郁開心丹對(duì)抑郁模型大鼠腦內(nèi)去甲腎上腺素(NA)、多巴胺(DA)和5-羥色胺(5-HT)含量的影響。方法80只SD大鼠自由飲食，自然光線下適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，按照 Open-Field評(píng)分方法，將得分≤20分、≥130分的大鼠剔除，剩余的大鼠隨機(jī)分為6組:正常對(duì)照組、模型組、陽性藥物對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組、中藥低劑量組。后5組通過禁水24 h、禁食24 h、4 ℃冰水游泳5 min、2 h行為限制、夾尾1 min、潮濕環(huán)境、晝夜顛倒，7種應(yīng)激刺激每天隨機(jī)安排一種，各種刺激不連續(xù)出現(xiàn)，連續(xù)刺激3周造模。造模后灌胃給藥，陽性藥物對(duì)照組給予鹽酸氟西汀混懸液10 mg/d；解郁開心丹高、中、低劑量組分別給予解郁開心丹2.0，1.0，0.5 g/d(給藥體積為每100 g體質(zhì)量給予1.0 mL)。模型組給予等量生理鹽水，持續(xù)28 d。用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)大鼠腦內(nèi)NA，DA，5-HT的含量。結(jié)果與模型組比較，中藥高劑量組、中藥中劑量組大鼠腦內(nèi)NA，DA，5-HT含量明顯增高且P<0.05；中藥高劑量組、中藥中劑量組與陽性藥物對(duì)照組比較無明顯差異且P>0.05。結(jié)論解郁開心丹具有與西藥抗抑郁藥物氟西汀同樣的抗抑郁作用，且抗抑郁作用機(jī)制可能與調(diào)節(jié)大鼠腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的平衡有關(guān)。

關(guān)鍵詞：解郁開心丹;抑郁模型;單胺類神經(jīng)遞質(zhì);去甲腎上腺素;多巴胺;5-羥色胺

DOI:10.13463/j.cnki.jlzyy.2015.03.021

中圖分類號(hào)：R741文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號(hào)：1003-5699(2015)03-0282-04

基金項(xiàng)目:吉林省自然科學(xué)基金(201015118)。

作者簡(jiǎn)介:周慶瑩(1985-)，女，碩士，助教，主要從事中醫(yī)臨床基礎(chǔ)理論研究。

收稿日期:(責(zé)任編輯：張瑞彬2015-02-10)

*通信作者:劉宏巖，電話-18686698557，電子信箱-hong.yancc@163.com

JieYuKaiXinDanwithin the depression model rats on single amine neurotransmitter

ZHOU Qingying,LIU Hongyan*

(Changchun University of Chinese Medicine,Changchun 130117,China)

Abstract:ObjectiveObserve Jie Yu Kai Xin Dan within the depression model rats on norepinephrine (NA),dopamine (DA) and serotonin (5-HT) content.Methods80 SD rats in free diet,natural light,and adaptive feeding for one week.Make the behavioral score by Open-Field scoring method.Exclude the rats who’s score is ≥120 or ≤30,the last rats are randomly divided into six groups.normal control group,model group,Fluoxetine group,Chinese medicine high dose group,Chinese medicine middle dose group,and Chinese medicine low dose group,the last 5 groups was treated by water deprivation for 24 h,fasted for 24 h,4 ℃ ice water swimming 5 min,2 h behavior restrictions,tail clamp 1 min,humid environment,day and night reversed,and the rat was in different stress factors every day which is randomly decided.After 3 weeks’ continuous stimulation,the depression model was made,normal control group were not treated.Intragastric administration was given after the completion of the modeling,positive control group was given fluoxetine hydrochloride suspension 10 mg/d,positive control drug’s high,middle and low dose group were given Jie Yu Kai Xin Dan 2.0 g/d,1.0 g/d,0.5 g/d (Given 1.0 mL dose volume per 100 g body weight).Model control group were given normal saline.for 28 day.Enzyme league immune method to detect the rats NA,DA and 5-HT content.ResultsConclusion Compared with model group,Chinese medicine dose group of rats in high dose group,the traditional Chinese medicine (TCM) in NA,DA and 5-HT content increased obviously and P<0.05;Traditional Chinese medicine (TCM) in high dose group,Chinese medicine dose group compared with positive drug control group no significant difference(P>0.05).ConclusionJie Yu Kai Xin Dan with western medicine antidepressants fluoxetine same antidepressant effect,and the antidepressant mechanism may be related to regulating single amine neurotransmitter balance in rats.

Keywords:Jie Yu Kai Xin Dan;Depression model;Single amine neurotransmitter;NA;DA;5-HT

抑郁癥是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)病名，表現(xiàn)為情緒低落、興趣缺乏、快感缺失、思維遲緩、運(yùn)動(dòng)性遲滯或激越、焦慮、自責(zé)自罪、自殺觀念和行為、精神病性癥狀、軀體癥狀(主要有睡眠障礙、食欲減退、性欲減退、軀體疼痛不適、乏力、自主神經(jīng)功能失調(diào)癥狀等)[1]。從20世紀(jì)中后期到現(xiàn)在，對(duì)抑郁癥的研究越來越多，腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)功能異常是目前較為公認(rèn)的假說之一[2]。西藥治療抑郁癥療效確切，但存在依從性差、起效時(shí)間長、停藥后病情反復(fù)、治療費(fèi)用高、毒副作用廣泛等問題[3]。近年來中醫(yī)治療抑郁癥顯示了其自身的優(yōu)勢(shì)，經(jīng)過多年臨床實(shí)踐總結(jié)出部分抑癥患者因多臟腑虛損而致病。結(jié)合《內(nèi)經(jīng)》“五神臟”理論提出“五臟精虧，精不養(yǎng)神”是抑郁癥的病機(jī)之一。在此病機(jī)的指導(dǎo)下創(chuàng)立了方劑解郁開心丹，從而總結(jié)出填精益氣養(yǎng)血的治療方法。以下實(shí)驗(yàn)是對(duì)解郁開心丹抗抑郁療效和抗抑郁機(jī)制的研究。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物由長春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供的清潔級(jí)健康成年雄性SD大鼠80只，體質(zhì)量(200±20)g，合格證號(hào)：SCXK(吉-2011-0004)。

1.2實(shí)驗(yàn)藥品及試劑解郁開心丹由柴胡、桂枝、茯苓、人參、龍骨、牡蠣、黃芩、大黃、夜交藤、制何首烏等組成(藥材購于長春市中東市場(chǎng)醫(yī)藥超市)。按照灌胃劑量制成水煎劑濃縮至相應(yīng)濃度后，置4 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?。鹽酸氟西汀每片20 mg,蘇州中化藥品工業(yè)有限公司，批號(hào)H20064844。按照灌胃劑量制成相應(yīng)濃度的混懸液后,置4 ℃冰箱儲(chǔ)存?zhèn)溆?。大鼠去甲腎上腺素(NA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠5-羥色胺(5-HT)酶聯(lián)免疫分析試劑盒、大鼠多巴胺(DA)酶聯(lián)免疫分析試劑盒：均為美國R&D公司產(chǎn)品。

1.3實(shí)驗(yàn)儀器電子顯微鏡(萊卡)，寶特ELX-808酶標(biāo)儀(ELX-808),TKY-LA冷凍切片機(jī)(湖北泰康醫(yī)療設(shè)備有限公司)，GHP-9270隔水式培養(yǎng)箱(上海莜翼儀器設(shè)備有限公司),BS-1100型分析天平(天津斯維科科技有限公司生產(chǎn))。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1動(dòng)物分組80只SD大鼠自由飲食，自然光線，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后。按照Open-Field評(píng)分方法：將得分≤20分和得分≥130分的大鼠剔除后，剩余的大鼠隨機(jī)分為6組。分別為：正常對(duì)照組、模型組、陽性藥物對(duì)照組、中藥高劑量組、中藥中劑量組和中藥低劑量組，每組10只。

2.2模型制備具體造模方法采用慢性不可預(yù)見性溫和應(yīng)激結(jié)合孤養(yǎng)法制備大鼠抑郁模型。從第8天起，正常組大鼠同籠飼養(yǎng),自由飲食飲水，不給予任何刺激。其余各組大鼠單籠飼養(yǎng)，并開始接受21 d各種不同的應(yīng)激刺激。包括：1)禁水24 h；2)禁食24 h；3)4 ℃冰水游泳5 min；4)2 h行為限制；5)夾尾1 min；6)潮濕環(huán)境；7)晝夜顛倒。7種應(yīng)激刺激每天隨機(jī)安排1種，每種應(yīng)激刺激不連續(xù)出現(xiàn)。

2.3給藥情況除正常組外，其余各組大鼠在接受21 d應(yīng)激刺激后，開始灌胃給藥。給藥量如下:陽性藥物對(duì)照組給予鹽酸氟西汀混懸液10 mg/d；解郁開心丹高、中、低劑量組分別給予解郁開心丹2.0，1.0，0.5 g/d(給藥體積為每100 g體質(zhì)量給予1.0 mL)，模型組給予等量生理鹽水。

2.4單胺類神經(jīng)遞質(zhì)NA、DA、5-HT的測(cè)定大鼠麻醉后，剝離腦殼,分離除腦干部分外的全腦組織，放置于-70 ℃冰箱內(nèi)待檢測(cè)使用。具體檢測(cè)方法如下，加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、然后再加待測(cè)樣品10 μL(樣品最終稀釋度為5倍)。將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。溫育：用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min。配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每空加洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50 μL，空白孔除外。再次溫育：用封板膜封板后置37 ℃溫育30 min。再次洗滌:小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每空加洗滌液，靜置30 s后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。顯色：每孔加入顯色劑A50 μL，再加入顯色劑B50 μL，輕輕振蕩混勻，37 ℃避光顯色15 min。終止：每孔加終止液50 μL，終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450 nm波長依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。測(cè)定在加終止液后15 min以內(nèi)進(jìn)行。

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與模型組比較，中藥高劑量組、中藥中劑量組大鼠腦內(nèi)5-HT，NA，DA含量明顯增高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；中藥高劑量組、中藥中劑量組與陽性藥物對(duì)照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1～3。

表1　治療后各組大鼠腦組織中5-HT的表達(dá)水平 ± s, n=10)　ng/L

注：與空白組比較，△ P<0.05；與模型組比較，▲ P<0.05

注：與空白組比較，△ P<0.05；與模型組比較，▲ P<0.05

注：與空白組比較，△P<0.05；與模型組比較，▲P<0.05

4討論

4.1解郁開心丹的作用機(jī)制解郁開心丹以五臟精虧，精不養(yǎng)神為病機(jī)指導(dǎo)，從整體出發(fā)，利用填精益氣養(yǎng)血的方法，由柴胡、桂枝、茯苓、人參、龍骨、牡蠣、黃芩、大黃、夜交藤、制何首烏等藥物配伍組成。柴胡，味辛而苦，能行能泄，性善條達(dá)肝氣，疏肝解郁，與茯苓配伍可疏肝養(yǎng)血，利濕健脾，與人參同用又可補(bǔ)氣升陽；桂枝性溫，可溫通經(jīng)脈，助陽化氣，溫化心脾之陽氣；龍骨，入肝經(jīng)，質(zhì)重沉降，有較強(qiáng)的平肝潛陽作用，與牡蠣同用可滋補(bǔ)肝陰，平肝潛陽；大黃，苦降，能使上炎之火下泄，與黃芩同用可治火邪上炎，防治火邪攻心、傷胃；夜交藤，味甘、性平，歸心、肝二經(jīng)，能補(bǔ)養(yǎng)陰血，養(yǎng)心安神；制首烏功善補(bǔ)肝腎、益精血。通過以上中藥的配伍，可達(dá)到滋養(yǎng)五臟陰陽之虛、顧護(hù)五臟之神，防止邪氣傷及五臟，填精益氣養(yǎng)血、舒肝解郁、鎮(zhèn)靜安神的功效。解郁開心丹，寓舒肝解郁于填精益氣養(yǎng)血之中，可避免長期單純的疏肝解郁至人體氣血耗傷；不局限于對(duì)局部臟腑的調(diào)補(bǔ)而是補(bǔ)養(yǎng)五臟陰陽之虛，整體調(diào)和人體氣機(jī)與陰陽，使人體自身達(dá)到抗御疾病的最佳狀態(tài)，從而起到抗抑郁癥的作用。

“填精益氣養(yǎng)血法”是在中醫(yī)基礎(chǔ)理論的指導(dǎo)下和臨床實(shí)踐的經(jīng)驗(yàn)中總結(jié)出來的，通過十幾味中藥配伍，滋養(yǎng)五臟陰陽之虛、顧護(hù)五臟之神，防止邪氣傷及五臟，具有填精益氣養(yǎng)血、舒肝解郁、鎮(zhèn)靜安神的功效，從而補(bǔ)充人體之氣血，整體調(diào)和人體之氣機(jī)、陰陽，使人體自身達(dá)到一個(gè)抗御疾病的最佳狀態(tài)而達(dá)到抗抑郁的作用。

4.2解郁開心丹抗抑郁作用的優(yōu)勢(shì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)解郁開心丹與氟西汀具有相同的抗抑郁療效。但是解郁開心丹與氟西汀相比目前沒有發(fā)現(xiàn)臨床治療過程中產(chǎn)生的性功能障礙、出血、脫發(fā)、認(rèn)知功能障礙、額葉損害綜合征、單純或帶狀皰疹病毒感染復(fù)發(fā)、肺損傷、藥物相互作用、誘發(fā)狂躁癥、誘發(fā)自殺意圖等不良反應(yīng)[4-7]。所以解郁開心丹在治療抑郁癥的過程中不僅具有確實(shí)可信的抗抑郁療效，而且與現(xiàn)代臨床中常用的抗抑郁西藥相比具有其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)和良好的開發(fā)前景。

參考文獻(xiàn)：

[1]郝偉.神經(jīng)病學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2008:103-106.

[2]周江寧,閆雪波.抑郁癥發(fā)病的下丘腦中樞驅(qū)動(dòng)調(diào)節(jié)機(jī)制[J].中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)學(xué)報(bào),2008,38(8):967-977.

[3]王蕾,李麗.中藥復(fù)方治療抑郁癥實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,8(13):35-37.

[4]姜玉龍,趙重波.抑郁癥治療藥物發(fā)展[J].上海醫(yī)藥,2011,32(6):267-269.

[5]祁雪丹,屠樹滋,王秋娟.治療抑郁癥藥物的研究進(jìn)展[J].中國新藥雜志,2003,12(10):810-816.

[6]吳飛華,金劍,肖忠革.抑郁癥的藥物治療及其進(jìn)展[J].臨床合理用藥,2009,2(3):81-83.

[7]李煥德,鄧孟先.氟西汀的副作用[J].國外醫(yī)學(xué)(精神病學(xué)分冊(cè)),1993,20(4):239-243.