·論著·

XAF1在胰腺癌中表達(dá)的臨床意義及其與患者預(yù)后的關(guān)系

黃佳姚瑋艷

【摘要】目的探討胰腺癌組織中X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白的相關(guān)因子1(XAF1)蛋白的表達(dá)及其與腫瘤臨床病理參數(shù)、患者預(yù)后的關(guān)系。方法將89例胰腺癌組織和21例正常胰腺組織制成組織芯片，采用免疫組化方法檢測XAF1蛋白的表達(dá)。分析XAF1表達(dá)與胰腺癌臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。89例胰腺癌患者均獲得隨訪，生存情況以Kaplan-Meier曲線表示。采用Cox比例風(fēng)險模型分析影響胰腺癌患者預(yù)后的因素。結(jié)果胰腺癌組織XAF1的陰性表達(dá)率為44.9%(40/89)，正常胰腺組織為9.5%(2/21)，兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。XAF1的表達(dá)與腫瘤的臨床分期呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)，而與患者的年齡、性別及腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分級、手術(shù)切緣、血管和神經(jīng)侵犯均無相關(guān)性。XAF1陰性表達(dá)患者生存時間顯著短于陽性表達(dá)患者。單因素分析顯示XAF1陰性表達(dá)、病理分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均與患者預(yù)后相關(guān)(P值均<0.05)，多因素分析顯示XAF1陰性表達(dá)是影響胰腺癌患者生存的獨立危險因素。結(jié)論XAF1可能參與胰腺癌的發(fā)生和發(fā)展，并與胰腺癌患者的預(yù)后相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】胰腺腫瘤；X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白相關(guān)因子1；預(yù)后；免疫組織化學(xué)；組織芯片

DOI:10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2015.02.003

基金項目：國家自然科學(xué)基金(81302088)

收稿日期：(2014-08-11)

Clinical significance of XAF1 expression in pancreatic cancer and its relationship with prognosisHuangJia,YaoWeiyan.DepartmentofGastroenterology,RuijinHospital,ShanghaiJiaotongUniversityMedicineSchool,Shanghai200025,China

Correspondingauthor:YaoWeiyan,Email:yaowymail@yahoo.com.cn

Abstract【】ObjectiveTo investigate the expression of XAF1 protein in pancreatic cancer, and its relationship with clinicopathological parameters and prognosis. MethodsThe tissue microarray was composed of 89 pancreatic cancer and 21 normal pancreatic tissues, and immunohistochemistry was used to examine the expression of XAF1 protein. The correlation between XAF1 expression and clinicopathological parameters was analyzed. The 89 patients were followed, and the survival was shown in Kaplan Meier curve. Cox proportional hazards regression was used to identify risk factors for the survival of pancreatic cancer patients. ResultsThe negative expression rate of XAF1 was 44.9%(40/89), and it was 9.5%(2/21) in normal tissue, and the difference between the two groups was statistically significant (P<0.05). The expression of XAF1 was negatively associated with tumor staging (P<0.05), but it was not associated with age, gender, lymph node metastasis, distant metastasis, pathological grading, surgical margins, vascular and neural invasion. Patients with negative expression of XAF1 had much shorter survival than patients with positive expression. Univariate analysis showed that negative expression of XAF1, pathological grading, lymph node metastasis, distant metastasis was associated with the survival (P<0.05), and the multivariate analysis indicated that negative expression of XAF1 was an independent prognostic factor for survival of pancreatic cancer. ConclusionsXAF1 may be involved in the development and growth of pancreatic cancer, and it is related with patient′s prognosis.

作者單位：200025上海，上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院消化內(nèi)科

通信作者：姚瑋艷，Email：yaowymail@yahoo.com.cn

【Key words】Pancreatic neoplasms;XAF1;Prognosis;Immunohistochemistry;Tissue microarray;

胰腺癌是一種主要來源于胰腺導(dǎo)管上皮的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展涉及多個基因突變與異常表達(dá)，其中細(xì)胞凋亡失衡在胰腺癌發(fā)病機制中發(fā)揮了重要作用。X染色體連鎖的凋亡抑制蛋白相關(guān)因子1(XIAP-associated factor 1,XAF1)是一個新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑制因子，它作為XIAP的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，通過競爭性拮抗XIAP對caspase-3的抑制作用從而引起腫瘤細(xì)胞的凋亡[1]。本研究檢測胰腺癌組織中XAF1蛋白的表達(dá)，結(jié)合胰腺癌患者臨床資料及隨訪情況進(jìn)行分析，研究XAF1蛋白表達(dá)與胰腺癌臨床病理特征及患者預(yù)后的相關(guān)性，探討其在胰腺癌發(fā)生和發(fā)展中的作用。

材料與方法

一、臨床資料

收集上海交通大學(xué)附屬瑞金醫(yī)院2002年至2005年間手術(shù)切除的89例胰腺癌患者的臨床資料和石蠟包埋的癌組織標(biāo)本，另取21例石蠟包埋的正常胰腺組織作為對照，所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)證實。89例胰腺癌中男性52例，女性37例，年齡31～79歲。胰腺癌患者術(shù)后均進(jìn)行隨訪，隨訪時間0.3～42個月，隨訪率達(dá)100%。

二、組織芯片的制作

取所有石蠟包埋的癌組織及正常胰腺組織標(biāo)本，采用手工制作組織芯片。組織芯片制作儀為Instruments公司產(chǎn)品。取樣針直徑2 mm，組織芯間距1.5 mm。

三、XAF1蛋白表達(dá)檢測

采用免疫組化方法檢測XAF1蛋白的表達(dá)。羊抗人XAF1抗體購自Santa Cruz公司，工作濃度1∶500。生物素化標(biāo)記的鼠抗羊二抗購自北京中杉金橋公司，工作濃度1∶200，最后加辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉素卵白素工作液，DAB反應(yīng)染色。結(jié)果判定：以胞質(zhì)或胞核中呈現(xiàn)黃色顆粒為陽性表達(dá)，結(jié)合染色強度及陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行評分。染色強度：不著色為0分，淡黃色1分，黃色2分，棕黃色3分；陽性細(xì)胞百分比：≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，﹥75%為4分。兩分值相乘計算免疫反應(yīng)分?jǐn)?shù)(immunoreactive score，IRS)，0分為陰性，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為中等陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)，陰性及弱陽性定義為陰性表達(dá)，中等陽性與強陽性定義為陽性表達(dá)。

四、統(tǒng)計學(xué)處理

用SPSS11.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。陽性率的比較采用χ2檢驗，生存情況以Kaplan-Meier曲線表示，組間生存率比較采用log-rank檢驗，預(yù)后危險因素采用Cox風(fēng)險比例模型進(jìn)行單因素和多因素分析。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)　　果

一、胰腺癌組織XAF1的表達(dá)

19例正常胰腺組織中XAF1主要表達(dá)于導(dǎo)管上皮細(xì)胞，腺泡細(xì)胞有散在的XAF1表達(dá)(圖1)，僅2例正常胰腺組織未見XAF1的表達(dá)，其陰性表達(dá)率為9.5%(2/21)，IRS為8.38±2.16。89例胰腺癌組織中40例未見XAF1表達(dá)，其陰性表達(dá)率為44.9%，IRS為3.93±0.98。胰腺癌與正常胰腺組織間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=5.41，P<0.05)。

圖1　正常組織(1A、1B)和胰腺癌組織(1C、1D)中XAF1蛋白的表達(dá)(1A、1C　×100;1B、1D　×400)

二、胰腺癌組織XAF1表達(dá)與腫瘤臨床病理學(xué)特征的關(guān)系

XAF1蛋白的表達(dá)與患者的年齡、性別及腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分級、手術(shù)切緣、血管和神經(jīng)侵犯均無相關(guān)性，而與腫瘤分期呈負(fù)相關(guān)(表1)。

表1　胰腺癌組織XAF1表達(dá)與腫瘤臨床病理參數(shù)間的關(guān)系

三、XAF1表達(dá)與患者生存期的關(guān)系

Kaplan-Meier生存曲線顯示，XAF1陰性表達(dá)組患者的生存率明顯低于陽性表達(dá)組患者，兩組間生存率的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.78，P<0.05，圖2)。

圖2　XAF1陽性表達(dá)及陰性表達(dá)患者的生存曲線

四、影響患者術(shù)后生存的因素分析

單因素分析顯示XAF1陰性表達(dá)、腫瘤分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移均與患者預(yù)后相關(guān)(P值均<0.05)，多因素分析顯示XAF1陰性表達(dá)是影響胰腺癌患者生存的獨立危險因素(P<0.05，表2)。

表2　影響患者預(yù)后的Cox風(fēng)險比例模型分析

討　　論

XAF1在所有胚胎組織及成人正常組織中廣泛表達(dá)，但在腫瘤組織中，如胃癌[2]、肝癌[3]、肺癌[4]、腎癌[5]等，則有不同程度的減弱、缺失。Wang等[6]研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，XAF1在卵巢癌組織中的表達(dá)明顯低于癌旁組織，并且XAF1表達(dá)與腫瘤組織分化程度之間呈負(fù)相關(guān)，XAF1的低表達(dá)可作為卵巢癌患者預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。XAF1作為重要的凋亡促進(jìn)因子，不僅可以拮抗XIAP抑制caspase活性的作用，而且可以通過細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡[7]。Zou等[8]報道，在胃癌和結(jié)腸癌細(xì)胞中XAF1可通過翻譯后修飾的方式激活p53，從而引起p53核內(nèi)聚集，增加其轉(zhuǎn)錄活性，并激活p53依賴的細(xì)胞凋亡。由此可見，XAF1通過多種途徑在細(xì)胞凋亡調(diào)控機制中發(fā)揮作用，而它的異常表達(dá)會引起腫瘤細(xì)胞的凋亡失控。

本課題組前期研究結(jié)果[9-10]也表明，胰腺癌細(xì)胞株SW1990和BxPC3的XAF1過度表達(dá)顯著增加細(xì)胞的凋亡。本研究結(jié)果進(jìn)一步顯示，胰腺癌組織中XAF1蛋白表達(dá)較正常胰腺組織明顯降低，并且XAF1表達(dá)與腫瘤分期呈負(fù)相關(guān)。此外，XAF1低表達(dá)患者的生存期顯著短于高表達(dá)患者，是影響胰腺癌患者生存的獨立危險因素，故可作為患者預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。

參考文獻(xiàn)

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(本文編輯：屠振興)

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本刊可直接用縮寫的常用詞匯

作者對下列一些常用詞匯可直接用縮寫，即在論文中第一次出現(xiàn)時，可以不標(biāo)注中文

ADP腺苷二磷酸

AEP急性水腫性胰腺炎

AFP甲胎蛋白

Alb白蛋白

ALP堿性磷酸酶

ALT丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

AMP腺苷一磷酸

ANP急性壞死性胰腺炎

AP急性胰腺炎

ARDS急性呼吸窘迫綜合征

AST天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶

ATP腺苷三磷酸

BP血壓

BUN血尿素氮

BSA牛血清蛋白

CCK縮膽囊素

CCK-8細(xì)胞增殖-毒性檢驗

CEA癌胚抗原

CP慢性胰腺炎

CTX線計算機斷層攝影術(shù)

CRPC-反應(yīng)蛋白

DAB二氨基聯(lián)苯胺

DAPI4，6-二脒基-2-苯基吲哚二鹽酸

DBil直接膽紅素

DC樹突狀細(xì)胞

DMSO二甲基亞砜

EGF表皮生長因子

ELISA酶聯(lián)免疫吸附測定

ENBD內(nèi)鏡鼻膽管引流

ERCP內(nèi)鏡下逆行胰膽管造影

EST內(nèi)鏡下乳頭括約肌切開術(shù)

EUS內(nèi)鏡超聲

EUS-FNAEUS引導(dǎo)下細(xì)針穿刺活檢

EUS-FNIEUS引導(dǎo)下細(xì)針注射

FITC異硫氰酸熒光素

γ-GTγ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶

Hb血紅蛋白

HE蘇木素-伊紅

HRP辣根過氧化物酶

IBil間接膽紅素

IFN干擾素

IL白細(xì)胞介素

iRNARNA干擾

LDH乳酸脫氫酶

MAP輕癥急性胰腺炎

MRCP磁共振膽胰管造影

MRI磁共振成像

MODS多器官功能不全綜合征

MOF多器官功能衰竭

MPO髓過氧化物酶

MSCs骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

MTT四甲基偶氮唑藍(lán)

NF-κB核因子-κB

NK自然殺傷細(xì)胞

NO一氧化氮

PaCO2動脈血二氧化碳分壓

PaO2動脈血氧分壓

PBS磷酸鹽緩沖液

PD胰十二指腸切除術(shù)

PDAC胰腺導(dǎo)管腺癌

PET正電子發(fā)射計算機斷層掃描

PLT血小板

PPPD保留幽門的胰十二指腸切除術(shù)

PSC胰腺星狀細(xì)胞

RBC紅細(xì)胞

RT-PCR逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

SAP重癥急性胰腺炎

shRNA小發(fā)夾RNA

siRNA小干擾RNA

SIRS全身炎癥反應(yīng)綜合征

TBil總膽紅素

TC總膽固醇

TG三酰甘油

TGF轉(zhuǎn)化生長因子

TNF腫瘤壞死因子

TP總蛋白

WBC白細(xì)胞

VEGF血管內(nèi)皮生長因子