紅核婦潔洗液抗炎、止癢及抗菌作用研究

厲彥翔，梅龍，盧朝輝，林蓉，王維蓉*

(西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部，西安710061)

摘要：目的觀察紅核婦潔洗液的抗炎、止癢及抗菌作用。方法通過二甲苯致小鼠耳廓腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性、小鼠皮下瓊脂肉芽腫、豚鼠磷酸組胺致癢閾實驗及白色假絲酵母菌感染兔陰道炎模型，觀察紅核婦潔洗液抗炎、止癢及抗菌作用。結(jié)果紅核婦潔洗液能夠顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹(P<0.01)，顯著降低小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性(P<0.01)，抑制小鼠瓊脂肉芽腫的形成(其中高、中劑量組P<0.01)，提高豚鼠的致癢閾(P<0.01)；并對兔霉菌性陰道炎具有顯著的治療作用。結(jié)論紅核婦潔洗液具有顯著的抗炎、止癢及抗菌作用。

關(guān)鍵詞:紅核婦潔洗液；抗炎作用；抗菌作用；霉菌性陰道炎

doi:10.3969/j.issn.1004-2407.2015.03.013

中圖分類號：R965

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1004-2407(2015)03-0260-05

Abstract:ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory， antipruritic and antibacterial effects of Honghefujie Lotion. Methods The anti-inflammatory effects of Honghefujie Lotion were observed by xylene-induced mouse ear swelling， acetic acid-induced mouse penetration of capillary vessel and agar-induced mouse granuloma assay. The antipruritic effect was studied by histamine phosphate-induced guinea pig itching test. Then the effect of Honghefujie Lotion on vaginal candida infection was observed in rabbits. Results Honghefujie Lotion significantly inhibited ear swelling， penetration of capillary vessel and proliferation of granulation tissue， and also enhanced itch threshold. Besides， Honghefujie Lotion had obviously therapeutic effects on mycotic vaginitis in rabbits. Conclusion The results suggest Honghefujie Lotion has potential anti-inflammatory， antipruritic and antibacterial effects.

基金項目：陜西省自然科學(xué)基金(編號：2012JQ4025)

作者簡介：厲彥翔，男，博士研究生

收稿日期：(2014-11-21)

Anti-inflammatory，antipruritic and antibacterial effects of Honghefujie Lotion

LI Yanxiang， MEI Long， LU Zhaohui， LIN Rong， WANG Weirong*(Health Science Center， Xi′an Jiaotong University， Xi′an 710061， China)

Key words: Honghefujie Lotion； anti-inflammatory effect； antibacterial effect； mycotic vaginitis

*通信作者：王維蓉，女，講師

陰道炎是發(fā)病率最高、也是最常見的婦科炎癥[1]，目前治療藥物很多，有抗菌藥物如甲硝唑、環(huán)丙沙星等，微生態(tài)治療制劑如地衣芽孢桿菌，還有一些中藥洗劑，但治療效果均不甚理想，存在可誘發(fā)耐藥性、復(fù)發(fā)率高、用藥不便、制劑困難等不足[2]。因此，尋找更加安全有效的治療藥物具有重要的意義。紅核婦潔洗液是以山楂核為原料、經(jīng)現(xiàn)代干餾工藝研制而成的外用洗液[3]。前期體外研究結(jié)果表明，紅核婦潔洗液能有效地殺滅白色假絲酵母菌[3]，但其體內(nèi)抗炎、抗菌作用尚未見報道。本文對紅核婦潔洗液的體內(nèi)抗炎、抗菌作用進行了研究，為其進一步開發(fā)提供實驗依據(jù)。

1儀器與材料

1.1儀器BS223S型電子天平(德國Sartorius公司)；721可見分光光度計(上海分析儀器廠)；DXM 1200F數(shù)碼顯微成像系統(tǒng)(日本Nikon公司)。

1.2試藥紅核婦潔洗液(山東步長神州制藥有限公司，批號20140220)；氫化潑尼松注射液(西安利君制藥有限責(zé)任公司，批號130129)；地氯雷他定片(深圳市海濱制藥有限公司，批號20120612)；瓊脂(北京奧博星生物科技有限公司，批號20130520)；磷酸組胺(上海邁坤化工有限公司，批號20131111)；瑞氏-姬姆薩染液(南京森貝伽生物科技有限公司，批號20130815)；白色假絲酵母菌(CMCC85027株，中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心)；醋酸及二甲苯均為國產(chǎn)分析純。

1.3動物SPF級ICR小鼠，體質(zhì)量20±2 g，雌雄兼用；豚鼠，體質(zhì)量200±20 g，雌雄兼用；動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(陜)2007-001。日本大耳白兔，體質(zhì)量2.0±0.25 kg，雌性， 動物生產(chǎn)許可證號：SCXK(陜)2012-003。均由西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心提供。

2方法

2.1對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響將ICR小鼠隨機分為紅核婦潔洗液高、中、低劑量組，陽性藥物(氫化潑尼松)組，模型組，共5組，每組10只。于小鼠左耳廓的內(nèi)外兩面滴涂藥液0.005 mL·g-1，每隔15 min滴涂1次，連續(xù)3次。氫化潑尼松組滴涂1 mg·mL-1氫化潑尼松溶液，紅核婦潔洗液高、中、低劑量組分別滴涂5，10和20倍稀釋的紅核婦潔洗液。所有小鼠右耳不給予任何制劑作為正常對照。第3次給藥20 min后，用溫水輕輕洗去左側(cè)耳廓的內(nèi)外兩面滴涂的藥液，用棉球拭干。用微量進樣器吸取二甲苯30 μL均勻涂布于小鼠左耳兩面引起炎癥。40 min后，將小鼠斷頸處死，迅速剪下左、右兩耳，用直經(jīng)6 mm打孔器于相同位置打兩側(cè)圓形耳片，用電子天平分別稱質(zhì)量。左耳質(zhì)量與右耳質(zhì)量的差值即為耳腫脹度。腫脹抑制率(%)=[(對照組腫脹度均值-給藥組腫脹度均值) / 對照組腫脹度均值]×100%。

2.2對醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響動物分組及給藥處理同上。小鼠腹部皮膚滴涂藥液0.01 mL·g-1，1日2次，連續(xù)給藥3 d。末次腹部皮膚滴涂藥液1 h后，小鼠尾靜脈注射10 g·L-1伊文思藍(lán)生理鹽水溶液0.005 mL·g-1，立即腹腔注射體積分?jǐn)?shù)0.75%醋酸溶液0.01 mL·g-1。20 min后脫頸椎處死小鼠，腹腔注射5 mL生理鹽水，輕揉腹部洗滌腹腔并使之混勻。剪開腹部皮膚，吸出腹內(nèi)液體，以3 000 r·min-1離心15 min。取上清液2 mL于比色杯中，在分光光度儀上于590 nm處測定腹腔液A值并計算通透性抑制率。通透性抑制率=[(對照組A均值-給藥組A均值) / 對照組A均值]×100%。

2.3對瓊脂致小鼠肉芽腫增生的影響小鼠的背部偏左或偏右一側(cè)用脫毛劑脫毛1 cm2大小范圍。飼養(yǎng)觀察24 h，保證皮膚完好無刺激性炎癥發(fā)生。于脫毛區(qū)皮下注射加熱融化50 ℃保溫的20 g·L-1無菌瓊脂0.2 mL，呈圓形包塊。將成模小鼠隨機分組(同2.1)，注射瓊脂后2 h開始給藥，于注射瓊脂部位的皮膚表面滴涂藥液0.01 mL·g-1，1日2次，連續(xù)給藥10 d。末次給藥后24 h斷頸處死小鼠，剝離完整肉芽腫，用電子天平稱肉芽腫質(zhì)量(mg)，并計算增生抑制率。增生抑制率=[(對照組肉芽腫質(zhì)量均值-給藥組肉芽腫質(zhì)量均值)/對照組肉芽腫質(zhì)量均值]×100%。

2.4對豚鼠磷酸組胺致癢閾的影響動物分組及給藥處理同2.1。各組豚鼠右后腿外側(cè)剃毛，滴涂藥液0.2 mL，8 h后再滴涂藥液1次。次日，用粗砂紙擦傷剃毛處，局部再滴涂藥液 1 次。陽性藥對照組滴涂等量1 mg·mL-1地氯雷他定溶液。末次給藥10 min后開始在右后腿創(chuàng)面處滴涂100 μg·mL-1磷酸組胺 0.1 mL/只，仔細(xì)觀察豚鼠反應(yīng)，豚鼠回頭舔右后足為瘙癢陽性反應(yīng)。無反應(yīng)者每隔3 min依次遞增滴涂磷酸組胺溶液0.1 mL，直至豚鼠出現(xiàn)明顯瘙癢反應(yīng)。此時所給的磷酸組胺量為致癢閾。

2.5對家兔陰道白色假絲酵母菌感染的影響取雌性日本大耳白兔30只，6只作為正常對照組，另24只用無菌注射器吸取5×107cfu·mL-1白色假絲酵母菌液0.2 mL，用無菌硅膠管注入兔陰道內(nèi)5~8 cm處，原位停留 1~2 min，防止菌液流出。每日接種1次，連續(xù)接種3 d。為增大感染的機率，接種菌液前6 d，大耳白兔皮下注射苯甲酸雌二醇注射液 0.15 mg·kg-1，以后每2天注射1次，直至造模成功。接種前3 d，給兔肌肉注射氫化可的松1.5 mg·kg-1，直至造模成功。末次接種后逐日檢查觀察陰道口一般情況，檢查陰道清潔度和分泌物中病原菌數(shù)量。模型建立成功標(biāo)準(zhǔn)：陰道外觀出現(xiàn)紅腫、充血，陰道清潔度達(dá)到Ⅲ度或Ⅳ度，分泌物中有大量白色假絲酵母菌。紅核婦潔洗液高、中、低劑量組分別用5，10和20倍稀釋的紅核婦潔洗液，模型組、正常對照組用無菌純凈水。每次淋洗5 min。每日治療2次，連續(xù)治療7 d。觀察動物生長、活動和外陰潔凈情況，檢查陰道清潔度，進行白色假絲酵母菌載菌量及陰道灌洗液中白細(xì)胞數(shù)檢測，并取陰道組織進行病理學(xué)檢查。

2.6統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用單因素方差分析進行方差齊性檢驗和組間顯著性檢驗，計數(shù)資料用χ2檢驗，P<0.05 作為顯著性界限。

3結(jié)果

3.1對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響與模型組比較，紅核婦潔洗液各劑量組均能夠明顯降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。與氫化潑尼松組比較，紅核婦潔洗液高、中劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表1。

表1紅核婦潔洗液對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度的影響

Tab.1 The effect of Honghefujie Lotion on ear swelling induced by xylene in mice

± s， n=10)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與氫化潑尼松組比較#P<0.05，##P<0.01。

3.2對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響紅核婦潔洗液各劑量組能夠顯著降低醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性(P<0.01)，減弱腹腔滲出性炎癥反應(yīng)。與氫化潑尼松組比較，紅核婦潔洗液高劑量組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果見表2。

表2紅核婦潔洗液對醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高的影響

Tab.2 The effect of Honghefujie Lotion on the increase of penetration of capillary vessel induced by acetic acid in mice

± s， n=10)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與氫化潑尼松組比較#P<0.05，##P<0.01。

3.3對瓊脂致小鼠肉芽腫增生的影響紅核婦潔洗液高、中劑量組均能顯著降低小鼠瓊脂肉芽腫的形成(P<0.01)，減輕異物引起的增生性炎癥反應(yīng)。結(jié)果見表3。

表3紅核婦潔洗液對瓊脂致小鼠肉芽腫增生的影響

Tab.3 The effect of Honghefujie Lotion on granuloma induced by agar in mice

± s， n=10)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與氫化潑尼松組比較#P<0.05，##P<0.01。

3.4對磷酸組胺致豚鼠致癢閾的影響紅核婦潔洗液各劑量組豚鼠磷酸組胺致癢閾顯著低于模型組(P<0.01)。地氯雷他定為組胺H1受體拮抗劑，該組在磷酸組胺達(dá)5 mg極限用量時未出現(xiàn)瘙癢癥狀。紅核婦潔洗液各劑量組均能顯著提高豚鼠磷酸組胺的致癢閾。結(jié)果見表4。

3.5對兔陰道白色假絲酵母菌感染的影響

3.5.1治療前后陰道白色假絲酵母菌載菌量變化治療7 d后，紅核婦潔洗液各劑量組兔陰道灌洗液中白色假絲酵母菌載菌量均顯著低于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表5。

3.5.2陰道灌洗液中白細(xì)胞數(shù)變化模型組兔陰道白細(xì)胞數(shù)在治療3 d最高，5 d開始緩慢下降。紅核婦潔洗液高劑量組治療3 d白細(xì)胞數(shù)顯著低于模型組(P<0.01)，中、低劑量組與模型組差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；治療第5 d、第7 d，紅核婦潔洗液各劑量陰道白細(xì)胞數(shù)顯著低于模型組(P<0.01)。結(jié)果見表6。

表4紅核婦潔洗液對磷酸組胺致豚鼠致癢閾的影響

Tab.4 The effect of Honghefujie Lotion on itch induced by histamine phosphate in guinea pigs

± s， n=10)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01；與地氯雷他定組比較#P<0.05，##P<0.01。

表5治療前后陰道白色假絲酵母菌載菌量變化

Tab.5 The change of fungal load after treated by Honghefujie Lotion in vagina of rabbits

± s， n=6)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

表6治療期兔陰道灌洗液中白細(xì)胞數(shù)變化

Tab.6 The effect of Honghefujie Lotion on leukocyte count in vaginal lavage fluid of rabbits

± s， n=6)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

3.5.3陰道清潔度變化紅核婦潔洗液高劑量組治療3 d陰道清潔度顯著低于模型組(P<0.05)，高、中劑量組治療第5~7 d陰道清潔度顯著低于模型組(P<0.01)，低劑量組陰道清潔度在治療3和5 d與模型組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，治療7 d低于模型組(P<0.05)。結(jié)果見表7。

3.5.4治療霉菌性陰道炎療效紅核婦潔洗液高劑量對兔霉菌性陰道炎的治愈率達(dá)到66.67% ，有效率達(dá)到100%；中劑量組和低劑量組治愈率均為50%，有效率分別為100%和83.33%。

表7紅核婦潔洗液治療期兔陰道清潔度變化

Tab.7 The effect of Honghefujie Lotion on vaginal cleanness classification of rabbits

± s， n=6)

注：與模型組比較*P<0.05，**P<0.01。

3.5.5陰道組織病理學(xué)檢查結(jié)果由病理組織學(xué)照片可知，模型組兔子陰道黏膜上皮不完整，表面及上皮內(nèi)可見明顯炎細(xì)胞浸潤；陰道皺壁粗乳頭狀，上皮下間質(zhì)有中度水腫，有一定量炎細(xì)胞浸潤，血管中等程度擴張、充血。紅核婦潔洗液中劑量治療組兔陰道黏膜上皮層規(guī)整，表面及上皮內(nèi)可見少量的炎細(xì)胞浸潤；陰道皺壁指狀或乳頭狀，上皮下間質(zhì)輕度水腫，散在炎細(xì)胞浸潤，血管有輕度擴張、充血。結(jié)果見圖1。

圖1紅核婦潔洗液對陰道組織病理學(xué)改變的影響(HE×100)

A. 正常對照組；B. 模型組；C. 紅核婦潔洗液中劑量組

Fig.1 The effect of Honghefujie Lotion on histopathological changes of vagina

A. control group； B. model group； C. medium-dose group of Honghefujie Lotion (HE×100)

4討論

紅核婦潔洗液是以山楂核為原料的外用洗液，大量臨床研究表明，紅核婦潔洗液可用于治療陰癢、帶下、霉菌性陰道炎和非特異性陰道炎[4-5]。本研究通過多種動物模型研究紅核婦潔洗液的體內(nèi)抗炎、止癢及抗菌作用。實驗結(jié)果顯示，紅核婦潔洗液對小鼠耳廓急性腫脹性炎癥、小鼠腹腔急性滲出性炎癥有顯著的抑制作用，并且存在量效關(guān)系。同時，紅核婦潔洗液能夠減緩瓊脂肉芽腫的形成，降低瓊脂肉芽腫的質(zhì)量，對慢性炎癥有明顯的抑制作用。豚鼠對刺激物的反應(yīng)與人最為接近，是評價藥物止癢作用最常用的動物。我們選用豚鼠皮膚磷酸組織胺致癢模型進行止癢療效研究，結(jié)果表明，紅核婦潔洗液可以提高豚鼠對磷酸組織胺的致癢閾3~5倍，止癢效果明顯。氫化潑尼松是臨床有明顯療效的激素類藥物。地氯雷他定是第三代組胺H1受體拮抗劑，但臨床上應(yīng)用于局部的地氯雷他定外用制劑非常少見。紅核婦潔洗液無激素類藥物的不良反應(yīng)，保存、配制方便，可作為一種安全的非激素類外用消炎止癢制劑應(yīng)用。

霉菌性陰道炎又稱外陰陰道假絲酵母菌病，是一種常見的陰道黏膜的真菌感染性疾病，其致病菌以白色假絲酵母菌居多。據(jù)統(tǒng)計，陰道炎的發(fā)生率為45.89%，在不同的年齡階段，其發(fā)病率也不同[6]。白色假絲酵母菌屬于條件致病菌，正常人和動物不易感染。采用皮下注射雌激素的方法造成兔假發(fā)情狀態(tài)。同時，肌肉注射皮質(zhì)激素降低兔的免疫功能。陰道局部連續(xù)接種大劑量的病原菌，兔于末次接種后第3天出現(xiàn)外陰紅腫充血，有膿性分泌物，陰道清潔度達(dá)到Ⅲ級以上，成功建立了霉菌性陰道炎模型。結(jié)果提示，紅核婦潔洗液能夠有效地殺滅和抑制陰道局部的病原菌，阻止感染的擴散和發(fā)展，為霉菌性陰道炎的治療提供了保證。

本研究從體內(nèi)抗炎、止癢及抗菌方面進行了紅核婦潔洗液的藥理實驗研究。結(jié)果表明，紅核婦潔洗液具有明顯的抗炎、止癢作用，且能夠有效地抑制白色假絲酵母菌所致的感染，對霉菌性陰道炎有顯著療效。這為紅核婦潔洗液的進一步研究和臨床推廣提供了一定的實驗依據(jù)。

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