黃麗瓊，張元珍( 1咸寧市中心醫(yī)院同濟咸寧醫(yī)院，湖北咸寧437000;武漢大學中南醫(yī)院)

晚發(fā)型子癇前期患者血清、尿液2-甲氧雌二醇水平及胎盤COMT蛋白表達及意義

黃麗瓊1，2，張元珍2
( 1咸寧市中心醫(yī)院同濟咸寧醫(yī)院，湖北咸寧437000;2武漢大學中南醫(yī)院)

摘要:目的探討2-甲氧雌二醇( 2-ME)、兒茶酚胺氧位甲基轉移酶( COMT)蛋白在晚發(fā)型子癇前期( PE)發(fā)病中的作用。方法選取孕周＞34周的晚發(fā)型PE患者25例(觀察組)，同期正常單胎妊娠孕婦35例(對照組)。采用全自動酶標儀檢測血清及尿液2-ME水平，Western blotting法檢測胎盤組織COMT蛋白相對表達量。結果觀察組血清、尿液2-ME分別為( 595.3±21.8)、( 407.8±16.3) pg/mL，對照組分別為( 407.8±23.9)、( 298.4±18.1) pg/mL;兩組比較，P均＜0.05。觀察組胎盤COMT蛋白相對表達量為1.48±0.66，對照組為1.39±0.58;兩組比較，P＞0.05。結論晚發(fā)型PE患者血清、尿液2-ME水平升高，胎盤COMT蛋白表達無明顯變化; 2-ME可能是其發(fā)病過程中的一種代償性保護因子，而COMT蛋白可能與晚發(fā)型PE的發(fā)生關系不大。

關鍵詞:晚發(fā)型子癇前期;兒茶酚胺氧位甲基轉移酶; 2-甲氧雌二醇

子癇前期( PE)是一種以血壓升高及蛋白尿為臨床特征的疾病，早期妊娠時滋養(yǎng)細胞的淺植入導致胎盤功能不良是早發(fā)型PE的發(fā)病機制之一，而關于晚發(fā)型PE的發(fā)病機制尚不明確［1，2］。兒茶酚胺氧位甲基轉移酶( COMT)是一種甲基化酶，17β雌二醇經細胞色素P450酶羥基化后，經COMT甲基化，繼而形成2-甲氧雌二醇( 2-ME)。近期研究表明，早發(fā)型重度PE患者血清2-ME水平及胎盤COMT蛋白表達明顯低于正常妊娠孕婦［3］，但是其在晚發(fā)型PE發(fā)生中作用的研究相對較少。為此，我們進行了如下研究。

1　資料與方法

1.1臨床資料選擇2013年1月～2014年1月咸寧市中心醫(yī)院同濟咸寧醫(yī)院收治的孕周＞34周的晚發(fā)型PE［4］患者25例(觀察組)，同期正常單胎妊娠孕婦35例作為對照組，兩組均為單胎孕晚期、剖宮產分娩，排除合并慢性高血壓、肝腎疾病、心臟病、糖尿病及甲狀腺功能亢進或減退者。觀察組年齡( 30.3±3.2)歲，孕周( 35.3±1.6)周，孕前BMI ( 23.0±2.8) kg/m2，收縮壓( 172.8±13.5) mmHg、舒張壓( 110.3±8.2) mmHg;對照組年齡( 30.4± 4.3)歲，孕周( 38.2±1.2)周，孕前BMI( 21.9± 2.8) kg/m2，收縮壓( 115.8±12.4) mmHg、舒張壓( 75.3±7.8) mmHg。兩組基本資料除血壓外均具有可比性。

1.2血清及尿液2-ME水平檢測兩組均于剖宮產術前30 min用EDTA抗凝管采集外周肘靜脈血3 mL，1 000 r/min離心15 min，取上層血漿置于－80℃冰箱保存待測。無菌容器留取新鮮尿液5 mL，1 500 r/min離心20 min，取上清液置－80℃冰箱保存待測。采用全自動酶標儀檢測血清及尿液2-ME，標本均同批測定，批內變異＜5%。

1.3胎盤COMT蛋白表達檢測采用Western blotting法。兩組胎盤娩出5 min內，避開鈣化、壞死及出血區(qū)，于胎盤中央母體面取0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm的組織，立即置于液氮冷凍，－80℃低溫冰箱保存待測。取適量組織樣品采用RIPA裂解液充分勻漿，12 000 r/min離心5 min后取上清，提取組織總蛋白。BCA法測定蛋白濃度，SDS PAGE電泳后將目的蛋白和內參蛋白( GAPDH)轉移到PVDF膜上( 4℃，100 V，120 min)，洗膜后5%脫脂奶粉封閉1 h。加入一抗4℃孵育過夜充分洗膜，加入二抗37℃孵育1 h。再次洗膜后加ECL化學發(fā)光液，暗室曝光顯影。目的蛋白相對表達量以目的蛋白與GAPDH的條帶灰度值的比值表示。

1.4統計學方法采用SPSS17.0統計軟件。計量資料以珋x±s表示，組間比較采用t檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2　結果

兩組血清及尿液2-ME水平、胎盤COMT蛋白表達比較見表1。

表1　兩組血清及尿液2-ME水平、胎盤COMT蛋白表達比較(珔x±s)

3　討論

目前多數國內外學者認為，胎盤血管形成不良導致胎盤缺氧是PE發(fā)病的關鍵因素。2-ME是17β雌二醇的代謝產物之一，主要由胎盤COMT甲基化產生，大量研究證實其具有抗增殖、促進凋亡及抗血管生長等作用［5，6］。新近研究顯示，2-ME在缺氧情況下可通過促進絨毛滋養(yǎng)細胞浸潤生長和血管生成來改善胎盤血液循環(huán)，并影響胚胎生長［3，7］?？扇苄匝軆绕どL因子受體1( sFlt-1)是參與PE發(fā)病的重要因子，可導致促血管生成因子下降、內皮細胞損傷以及滋養(yǎng)層侵襲不足等。缺氧誘導因子1a ( HIF-1a)在缺氧狀態(tài)下上調sFlt-1表達，而2-ME可以通過抑制HIF-1a的活化來改善胎盤缺氧狀態(tài)［8］。

研究發(fā)現，重度PE患者胎盤組織中COMT表達降低［9］。有研究將孕鼠的COMT基因敲除后發(fā)現，孕鼠血清2-ME水平降低、HIF-1a升高，產生類似PE的表現;而補充2-ME后，HIF-1a水平降低，PE樣癥狀減輕，表明COMT/2-ME缺陷在PE的發(fā)病中起重要作用［3］。本研究中，觀察組血清、尿液2-ME水平均顯著高于對照組，而兩組胎盤COMT蛋白相對表達量比較則無統計學差異。表明晚發(fā)型PE患者血清中2-ME水平升高不是由于腎臟排泄減少而引起的，推測2-ME是晚發(fā)型PE發(fā)病過程中的一種代償保護因子，而COMT蛋白可能與晚發(fā)型PE的發(fā)生關系不大。

COMT/2-ME如何參與PE的發(fā)病目前尚不明確。研究發(fā)現，2-ME可能通過抑制HIF-1a和sFlt1以外的機制保護血管并維持其正常功能［10］，其內皮血管舒張作用可能對高血壓、肺動脈高壓、腎病、缺血性腦損傷的防治均有積極意義［11］。研究發(fā)現，胎盤COMT表達降低與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生有關聯。Lee等［12］研究發(fā)現，COMT缺乏可能是PE發(fā)生的啟動因素。Hertig等［13］研究發(fā)現，PE孕婦孕早期時伴有血清2-ME水平下降，孕32～34周時與正常妊娠孕婦比較無明顯差異，而晚發(fā)型PE患者血清2-ME水平高于正常妊娠孕婦。Palmer等［14］和Seol等［15］研究發(fā)現，重度PE患者胎盤COMT表達與正常足月妊娠孕婦比較無統計學差異。以上研究結果與本研究存在差異，可能與研究人群的種族、孕齡及檢測方法不同有關。

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收稿日期:( 2015-01-07)

文章編號:1002-266X( 2015) 32-0070-02

文獻標志碼:B

中圖分類號:R714.244

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.029