張惠海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，海南　?？凇?70102

西洛他唑片體內(nèi)生物等效性研究

張惠
海南醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，海南?？?70102

【摘要】目的:對(duì)兩種國產(chǎn)西洛他唑片進(jìn)行生物等效性研究.方法:用自身前后對(duì)照方法，20例健康男性受試者隨機(jī)分組，單次口服參比制劑或受試制劑各100mg，60h內(nèi)間斷采血樣;采用高效液相色譜法測(cè)定血漿中藥物濃度，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù).結(jié)果: 2種西洛他唑片在人體內(nèi)藥時(shí)曲線符合二室模型，主要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)Tmax分別為3. 25±0. 85、3. 35±0. 81h; Cmax分別為876. 70±276. 48、823. 79± 242. 37ng/ml; AUC0～t分別為11137. 31±2847. 19、10981. 44±2475. 94(ng·h)/ml，AUC0～∞分別為11974. 78±3076. 05、11939. 44± 2998. 14(ng·h)/ml，T1/2分別為11. 07±5. 87、10. 23±8. 48h;兩種制劑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax、AUC0～t經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析及雙單側(cè)t檢驗(yàn)，并計(jì)算90%置信區(qū)間，表明兩種制劑生物等效，受試制劑西洛他唑片的人體相對(duì)生物利用度為(101. 3±24. 6)%.結(jié)論:試驗(yàn)和參比制劑具有生物等效.

【關(guān)鍵詞】西洛他唑;生物等效性;高效液相色譜

Cilostazol tables in vivo bioequivalence Study

ZHANG Hui
Hainan Medical University Affiliated Hospital，Haikou 570102，China

Abstract:Objective To evaluate the bioequivalence of two formulations cilostazol tables in healthy volunteers. Methods 100mg Test preparation and reference preparation were given to 20 healthy male volunteers in randomized two－way crossover design for the pharmacokinetic and relative bioavailability study. Plasma concentration of cilostazol were determined by RP－HPLC. Results The concentration-curve in vivo oftwo formulations cilostazol tables in healthy volunteers. The main pharmacokinetic parameters of the two preparation were : Tmax 3. 25±0. 85 and 3. 35±0. 81h，Cmax 876. 70±276. 48 and 823. 79±242. 37ng/ml，AUC0～t11137. 31± 2847. 19 and 10981. 44±2475. 94ng·h/ml. AUC0～∞11974. 78±3076. 05 and 11939. 44±2998. 14ng·h/ml，T1/2(Ke)11. 07±5. 87 and 10. 23±8. 48h，respectively. The mean relative bioavailability of test preparation vs reference preparation were(101. 3±24. 6)% . Conclusion The results of statistical analysis shows that the reference and the test tablets were bioequivalent.

Key words:KEYWORDS: Cilostazol; Bioequivalence; HPLC

西洛他唑(Cilostazol)為抗血小板藥，通過抑制血小板及血管平滑肌內(nèi)磷酸二酯酶活性，從而增加血小板及平滑肌內(nèi)cAMP濃度，發(fā)揮抗血小板作用及血管擴(kuò)張作用.主要用于治療由動(dòng)脈粥樣硬化、大動(dòng)脈炎、血栓閉塞性脈管炎、糖尿病所致的慢性動(dòng)脈閉塞癥.西洛他唑能改善肢體缺血所引起的慢性潰瘍、疼痛、發(fā)冷及間歇跛行，并可用作上述疾病外科治療(如血管成形術(shù)、血管移植術(shù)、交感神經(jīng)切除術(shù))后的補(bǔ)充治療以緩解癥狀.本試驗(yàn)以浙江大家制藥有限公司的西洛他唑片作為參比劑，考察海南綠島制藥有限公司生產(chǎn)的西洛他唑片的藥動(dòng)學(xué)，作出生物等效性評(píng)價(jià).

1　材料與方法

1. 1受試者資料受試者選擇20名男性健康受試者，體重指數(shù)19. 2～24. 0kg/m2，年齡19～26歲.所有受試者均通過健康體格檢查，實(shí)驗(yàn)室檢查(血常規(guī)、肝功能、腎功能、心電圖等)均屬正常，精神狀態(tài)良好.在試驗(yàn)期1個(gè)月內(nèi)未服用過任何其他藥物，且在試驗(yàn)期1個(gè)月內(nèi)禁忌煙酒.所有受試者均簽署知情同意書，并經(jīng)本基地倫理委員會(huì)審批同意.

1. 2藥品及試劑西洛他唑片(每片50mg，批號(hào): 101201，海南綠島制藥有限公司);參比制劑(R):西洛他唑片(每片50mg，批號(hào): 120403P，浙江大家制藥有限公司);西洛他唑(批號(hào): 100363－200301，中國藥品生物制品檢定所);地西泮(批號(hào): 171225－

200903，中國藥品生物制品檢定所).乙腈(色譜純，美國Fisher公司);甲醇(色譜純，美國Fisher公司);其余試劑均為分析純.

1. 3給藥方案20例受試者隨機(jī)分成2組，每組10例，按2×2交叉試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，兩期研究間的清洗期為14d.參比制劑或受試制劑，經(jīng)藥物清除期(2周)后交換給藥.在服藥前禁食12h，次晨空腹口服100mg參比制劑(R)或受試制劑(T)，統(tǒng)一飲水250ml，服藥后2h內(nèi)不喝水，不吃食物，至給藥后4h給予統(tǒng)一低脂標(biāo)準(zhǔn)餐.

1. 4血樣采集分別于給藥前(0h)及給藥后0. 5、1、2、3、4、6、8、10、12、24、36、48、60h各取靜脈血4ml，血樣采集后，于3000r/min離心10min，分離出血漿約2. 5ml，立即分裝置EP管中于－20℃低溫保存待測(cè).

1. 5樣品測(cè)定

1. 5. 1色譜條件色譜系統(tǒng)Agilent 1200型系列高效液相色譜儀(包括四元梯度泵、在線脫氣機(jī)、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、化學(xué)工作站);色譜柱: Agilent Eclipse XDB－C18(4. 6×150mm，5μm);柱溫: 35℃;流動(dòng)相:乙腈－30mM乙酸銨水溶液(45∶55);流速: 0. 5ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng): 254nm.在此色譜條件下，西洛他唑的出峰時(shí)間約為9min，內(nèi)標(biāo)物地西泮的出峰時(shí)間約為16min，兩個(gè)峰之間分離良好，血漿中無內(nèi)源性物質(zhì)干擾分離，見圖1.

1. 5. 2血樣預(yù)處理冷凍血漿在室溫下融化，在渦旋器上渦旋約20s.吸取0. 6ml血漿，置10ml離心管中，加入內(nèi)標(biāo)液(22. 2μg/ml)15μl，漩渦混勻，加乙酸乙酯4ml，渦旋混合2min，3500r/min離心5min.精密吸取上層有機(jī)相于40℃水浴氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)眉状?00μl溶解，取15μl進(jìn)樣.記錄色譜圖，內(nèi)標(biāo)法以峰面積定量.

圖1　高效液相色譜圖

1. 5. 3標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取西洛他唑?qū)φ掌?0. 3mg置于100ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度得103μg/ml標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，精密稱取內(nèi)標(biāo)物地西泮11. 09mg置于100mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度得110. 9 μg·ml－1儲(chǔ)備液，再用甲醇稀釋得22. 2μg/ml的內(nèi)標(biāo)液.取健康人空白血漿10ml若干份，分別加入西洛他唑標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液使其濃度分別為25. 75、51. 5、103. 0、206. 0、515. 0、1030. 0、2060. 0ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)含藥血漿.按“1. 5. 2”項(xiàng)下操作，同時(shí)制備空白樣品，進(jìn)行HPLC分析，記錄色譜圖，計(jì)算西洛他唑峰面積As和內(nèi)標(biāo)峰面積Ai的比值.以比值(= As/Ai)對(duì)血藥濃度C作權(quán)重回歸計(jì)算，權(quán)重系數(shù)w = 1/C2，線性范圍為25. 75～2060. 0 ng/ml(r = 0. 9995)，最小可定量濃度為25. 75ng/ml(S/N＞10).

1. 5. 4方法學(xué)評(píng)價(jià)配制低、中、高3種濃度(51. 5、206、1030ng/ml)的標(biāo)準(zhǔn)血樣，按“1. 5. 2”項(xiàng)處理后進(jìn)樣，同時(shí)以相應(yīng)濃度對(duì)照品溶液直接進(jìn)樣，將兩組峰面積進(jìn)行比較計(jì)算萃取回收率.另配制低、中、高3種濃度(51. 5、206、1030ng/ml)的標(biāo)準(zhǔn)血樣，相應(yīng)方法處理后進(jìn)樣，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出濃度，將所得的濃度與已知加人濃度相比，計(jì)算相對(duì)回收率及日內(nèi)、日間精密度.結(jié)果見表1.

表1　西洛他唑血漿回收率及精密度測(cè)定結(jié)果

1. 6數(shù)據(jù)處理以實(shí)測(cè)值計(jì)算Cmax、Tmax;以末端相血藥濃度的對(duì)數(shù)值對(duì)時(shí)間進(jìn)行回歸，求得斜率Ke及T1/2，運(yùn)用梯形法計(jì)算曲線下面積AUC0～t、AUC0～∞= AUC0～t+ ct/Ke.兩種制劑的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)Cmax，AUC0～t經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析，在α=0. 05水平進(jìn)行雙單側(cè)t檢驗(yàn)，按受試制劑AUC0～t在參比制劑80%～125%，Cmax在75%～133%內(nèi)判定標(biāo)準(zhǔn)，考察兩制劑是否具有生物等效性.

2　結(jié)果

2. 1藥動(dòng)學(xué)參數(shù)20例健康志愿者單劑量口服西洛他唑參比與受試制劑100mg平均藥－時(shí)曲線見圖2，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見表2.

圖2　健康受試者口服100mg西洛他唑片后平均血藥濃度—時(shí)間曲線

表2　20例志愿者口服兩種西洛他唑片后的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

2. 2生物等效性兩種制劑間和給藥次序間無顯著差別，AUC0→T、AUC0→∞在不同給藥周期間有顯著差異，Cmax在不同給藥周期間無顯著差異，雙單側(cè)t檢驗(yàn)的統(tǒng)計(jì)參數(shù)th 和tl兩藥均大于單側(cè)t(0. 05，18)(1. 75).試驗(yàn)制劑和參比制劑中西洛他唑的Tmax值經(jīng)Wilcoxon檢驗(yàn)，不同制劑間無顯著差異(Z =－0. 587，P = 0. 557).按照生物等效性判定標(biāo)準(zhǔn)，認(rèn)為兩種制劑生物等效.分析結(jié)果見表3.

表3　生物等效性分析結(jié)果

2. 3臨床觀察受試者空腹單劑量口服100mg西洛他唑片后，一般情況良好，整個(gè)試驗(yàn)過程中，無明顯不良反應(yīng)發(fā)生.

3　討論

本試驗(yàn)建立高效液相色譜法測(cè)定人血漿中西洛他唑的濃度，并使用液–液萃取法處理血漿樣品，使內(nèi)源性雜質(zhì)與西洛他唑很好地分離.該方法操作簡(jiǎn)便、靈敏度佳、特異性高、重現(xiàn)性好，適于西洛他唑藥動(dòng)學(xué)及生物等效性研究.

20名受試者口服西洛他唑受試制劑與參比制劑后，主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無顯著性差異，說明兩種制劑的吸收、分布過程基本相似.經(jīng)計(jì)算受試制劑的平均相對(duì)生物利用度為(101. 3±24. 6)%;經(jīng)生物等效性統(tǒng)計(jì)分析，均表明兩種不同廠家生產(chǎn)的西洛他唑片具有生物等效性.

參考文獻(xiàn)

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收稿日期:( 2014. 10. 20)

【文章編號(hào)】1007－8517(2015)02－0006－03

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【中圖分類號(hào)】R969. 1