方希修，王冬梅，周雪松，王風(fēng)平，成明超，顧海華

(1. 江蘇康諾農(nóng)業(yè)科技有限公司，江蘇 濱海 224500；2. 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；3. 江蘇濱?？h農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇 濱海 224500)

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濱海白首烏(耳葉牛皮消)藥理活性研究進展

方希修1,2*，王冬梅2，周雪松3，王風(fēng)平1，成明超3，顧海華1

(1. 江蘇康諾農(nóng)業(yè)科技有限公司，江蘇 濱海 224500；2. 江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院，江蘇 泰州 225300；3. 江蘇濱?？h農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇 濱海 224500)

濱海白首烏(耳葉牛皮消)是一種傳統(tǒng)中藥材，為蘿藦科鵝絨藤屬植物耳葉牛皮消的塊根。耳葉牛皮消具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化、抗衰老、調(diào)血脂、促進毛發(fā)生長、保護臟器等多種藥理活性。本文分析了耳葉牛皮消藥理活性，提出了今后耳葉牛皮消研究與開發(fā)利用方向。

白首烏(耳葉牛皮消)；C21甾體；藥理活性

濱海白首烏(耳葉牛皮消)是世界上唯一生長在中國的物種，是中國傳統(tǒng)的食、藥、美容兼用植物。全國耳葉牛皮消95%出產(chǎn)在江蘇省濱?？h，當(dāng)?shù)剞r(nóng)民種植白首烏的歷史悠久，是我國著名的首烏之鄉(xiāng)。耳葉牛皮消味甘、苦,性微溫,含有C21甾苷等生物活性物質(zhì),并含有多種營養(yǎng)成分及生物活性物質(zhì),具有補肝腎,強筋骨,益精血,健脾消食,解毒療瘡等功效。研究表明, 耳葉牛皮消各個有效部位和成分具有清除自由基、提高特異和非特異性免疫、抑制腫瘤、降低膽固醇、降低心肌耗氧量等活性。近年來，隨著對耳葉牛皮消開發(fā)利用的不斷深入，耳葉牛皮消和耳葉牛皮消制品的需求量呈猛增趨勢。

1　抗腫瘤作用

白首烏甾體總苷具有廣譜抗腫瘤作用,對Hce28693(人大腸癌細胞)、PC3(人前列腺癌細胞)、HeLa(人宮頸癌細胞)、PAA4(人肺癌細胞)4種實體瘤細胞均有較強的體外細胞毒作用,且呈濃度依賴性。

1.1對癌細胞的直接殺傷作用

研究發(fā)現(xiàn)，白首烏總苷對S180等4種瘤株在體內(nèi)均明顯的抑制作用，且作用與藥物劑量、給藥途徑有密切關(guān)系[1]。白首烏總苷抗腫瘤作用的機制。首先是對癌細胞的直接殺傷作用。經(jīng)FCM快速測定細胞內(nèi)DNA的相對含量，結(jié)果說明其對癌細胞S期有阻滯作用，由于甾體酯苷分子中既有親脂性的甾核，又有親水性的基團，可推測其對癌細胞的殺傷與分子表面活性劑有關(guān)，藥物作用于細胞膜表面，能抑制Na+/K+泵，競爭K+的結(jié)合部位，引起膜表面性質(zhì)的改變。在電鏡下可見有癌細胞膜破裂現(xiàn)象[2]。在形態(tài)學(xué)上支持白首烏甾體的直接殺傷作用。白首烏甾體酯苷具有良好的抗腫瘤作用，而且抗腫瘤作用廣泛，它不僅對艾氏腹水瘤和Lewis肺癌有抑制作用，而且對小鼠S180實體瘤也具有顯著的抑制作用，并具有明顯的量效關(guān)系，同時對體外培養(yǎng)的瘤細胞無論是人類瘤細胞株，還是動物瘤株均有明顯的抑制作用。初步認為與白首烏甾體酯苷分子表面活性樣作用(即親脂基團和親水基團)有關(guān)[3]。

1.2誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡

白首烏苷(AK)是從白首烏總苷(CA)中分離純化出來的單體，將AK作用于體外傳代培養(yǎng)的KB細胞。應(yīng)用MTT法證實AK對KB細胞有殺傷作用，其機理可能與誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡有關(guān)。形態(tài)學(xué)觀察可見50μg.mL-1濃度作用72 h可誘導(dǎo)KB細胞出現(xiàn)核縮等早期調(diào)亡現(xiàn)象，經(jīng)流式細胞胞儀測定表明藥物作用72 h可出現(xiàn)調(diào)亡峰，調(diào)亡百分率為41.9%，并將KB細胞周期阻滯于G0/G1期[4]；通過研究白首烏 C21甾體苷類化合物誘導(dǎo)肝癌細胞凋亡的作用，發(fā)現(xiàn)C21甾體苷類化合物(10，20 和 40 mg/kg)對小鼠移植性肝癌 Heps 有抑制作用，3 個劑量組的抑瘤率分別為 34.79%、47.08%和 50.23%[4]。實驗分離得到 9 種 C21甾體苷類化合物，對 SMMC-7721 和 A549 細胞株的抑制作用程度是有差異的，但是1株細胞的增殖抑制率隨各化合物濃度的增加而增加[3]。利用提取純化 C21甾體類化合物作用于 PC-3 (人前列腺癌細胞)，SGC-7901 (人胃癌細胞)，BGC-823(人胃癌細胞)，BEL-7402(人肝癌細胞)和 KB(人鼻咽癌細胞)細胞株，C21甾體苷類化合物對前兩者有抗腫瘤作用， 而對后三者未表現(xiàn)出明顯抗腫瘤作用，這表明 C21甾體類化合物對 5 種腫瘤細胞抑制作用并不是絕對的，而是有選擇性的[5]。 通過研究C21甾體苷類化合物誘導(dǎo) PC-3 腫瘤細胞凋亡作用， 發(fā)現(xiàn) PC-3 腫瘤細胞凋亡與 C21甾體苷具有量—效關(guān)系，且可以濃度依賴性地提高細胞 G2/M 期比例，AO 染色熒光顯微鏡觀察，提取物可誘發(fā)明顯的核斷裂和核固縮，以及凋亡小體的形成[6]。

2　免疫調(diào)節(jié)作用

實驗研究表明，中藥白首烏的提取物白首烏總苷對機體免疫功能有明顯的增強作用[7]。白首烏苷體外在高濃度(50、25、12 μg/mL)時對小鼠脾臟Ti淋巴細胞增殖反應(yīng)及IL-2、IFN-C的活性均有抑制作用，而在低濃度(1.5μg/mL)時則有促進作用[8]。根據(jù)胸腺指數(shù)和脾指數(shù)，白首烏總苷對小鼠免疫器官的重量無影響；能激活小鼠腹腔M5，顯著提高其吞噬消化功能，從而提高小鼠的非特異性免疫力:能顯著提高M5提呈抗原的能力，從而提高機體的特異性免疫作用[9]。C21甾苷可降低移植性肝癌實體瘤Heps 小鼠荷瘤后異常增高的脾指數(shù)，升高胸腺指數(shù)，增強巨噬細胞吞噬能力，明顯增強 T、B 淋巴細胞增殖反應(yīng)，使脾細胞分泌 IL-2 及腹腔巨噬細胞分泌 TNF-α 的量顯著提高，即白首烏 C21甾苷可提高荷瘤小鼠特異性和非特異性細胞免疫功能[10]。此外，白首烏多糖能顯著促進家兔 T 淋巴細胞在體外的增殖能力； 顯著增強小鼠胸腺和脾臟指數(shù)及巨噬細胞的吞噬功能，增強小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)，從而提高機體的免疫功能[11]。

白首烏還可使動物T淋巴細胞依賴區(qū)增生，B淋巴細胞依賴區(qū)增大，從形態(tài)上支持白首烏有提高機體免疫功能的作用[12]。白首烏總磷脂可顯著提高外周血ANAE(+)淋巴細胞比值和絕對數(shù)，預(yù)防和治療環(huán)磷酰胺所致外周血ANAE(+)(-)淋巴細胞比值和絕對數(shù)的倒置現(xiàn)象，使T細胞比值保持在正常水平[13]。

3　抗氧化、抗衰老作用

現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，C21甾苷因其結(jié)構(gòu)上具有不飽和雙鍵，具有體外清除自由基、抗氧化的作用。C21甾苷是通過體內(nèi)直接清除氧自由基和激活機體抗氧化防御系統(tǒng)等作用提高機體的抗氧化作用，起到延緩衰老、抗疲勞和滋補強健的作用。目前認為其抗衰老、延年益壽的作用主要活性成分為C21甾苷[14]。體外實驗也證明，白首烏C21甾苷具有清除超氧陰離子自由基[15]和羥自由基的功能[16]。研究顯示，C21甾苷能夠提高健康小鼠常壓耐缺氧和負重游泳時間，全面提高 D-半乳糖衰老模型小鼠血清、心、肝、腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)的活性，降低脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)的量，提高心肌組織端粒酶活性，與維生素 E(VE)對照組相比總體差異不大，有些項目指標(biāo)甚至優(yōu)于 VE組[17-18]。白首烏總苷是通過對氧自由基的直接清除作用和激活機體的抗氧化防御系統(tǒng)兩個方面來提高機體的抗氧化水平，減少自由基對機體的危害。

通過觀察白首烏醇提物對腦缺血再灌注損傷小鼠的保護作用及對正常小鼠耐缺氧能力的影響，發(fā)現(xiàn)給藥組小鼠血清超氧化物歧化酶( SOD) 活性增加，丙二醛( MDA) 含量降低，提示白首烏醇提物能清除氧自由基，減輕自由基造成的腦缺血再灌注損傷，并顯著提高小鼠的耐缺氧能力[19]。運用劇烈運動小鼠模型，以紅細胞抗?jié)B透性、肝臟中過氧化脂質(zhì)含量以及 SOD、紅細胞過氧化氫酶( CAT) 、血液谷胱甘肽過氧化物酶( GSH-Px) 等 3 種體內(nèi)抗氧化酶的活性為指標(biāo)，考察白首烏總苷抵抗內(nèi)源性自由基氧化損傷的功能。結(jié)果表明，劇烈過度運動會導(dǎo)致小鼠紅細胞的滲透性增加及肝臟中過氧化脂質(zhì)含量升高，并導(dǎo)致 SOD、CAT 和GSH-Px 活性降低，而白首烏總苷可抑制上述氧化損傷[20]。

4　調(diào)血脂作用

白首烏有明顯的降低血清膽固醇的作用。進一步的研究表明，其降脂的有效成分可能是總苷或多糖。研究發(fā)現(xiàn)白首烏有明顯地降低血清膽固醇的作用[21]。進一步研究表明，白首烏調(diào)血脂的有效成分可能是其總苷，其調(diào)血脂作用與劑量呈正相關(guān)。白首烏總苷尚有抗高脂促動脈平滑肌細胞增生的作用。這可能對預(yù)防動脈粥樣硬化斑塊的形成有一定的意義。采用水提醇沉法提取白首烏多糖，研究其抗高血脂的藥理作用，結(jié)果表明，白首烏多糖具有降低血清總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白，提高高密度脂蛋白的能力，因此具有降血脂的生理活性，對高血脂癥的發(fā)生有一定的預(yù)防作用[22]。

5　促進毛發(fā)生長作用

中醫(yī)認為: 發(fā)為血之余，血為發(fā)之本，血盛則發(fā)潤，血虧則發(fā)枯。毛發(fā)的生長與脫落，潤澤與枯竭，與血氣及腎精息息相關(guān)。白首烏既是常用的補血益精之藥，又是養(yǎng)生防老的珍品，因而具有促進毛發(fā)生長的作用。以白首烏為主配制復(fù)方白首烏生發(fā)酊用于臨床，經(jīng) 126 例臨床觀察，治愈率達 96 %，特別是對于眉發(fā)成片脫落者療效顯著[23]。皮片顯微投影法研究發(fā)現(xiàn)，白首烏總磷脂可促進家兔耳毛的生長，增加毛孔和毛纖維的平均直徑，使分布曲線右移，毛孔群間距離縮小，為探討白首烏補肝腎、益精血、烏須發(fā)等功效提供了有益的參考[24]。

6　對臟器的保護作用

6.1對心臟功能的保護作用

白首烏總苷可明顯降低心肌細胞的耗氧量，采用體外誘導(dǎo)法引起心肌脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的實驗發(fā)現(xiàn)總苷可有效抑制MDA的生成，主要是通過清除超氧陰離子自由基(O2-)的途徑實現(xiàn)的，從而使心肌細胞免受或少受自由基的損傷，保護心肌的完整結(jié)構(gòu)和正常的生理功能[25]。

6.2對腦細胞1的保護作用

白首烏二酮(cynadione A)是一種非常有效的保護神經(jīng)細胞抵抗過氧化物侵害的物質(zhì)。白首烏二酮(cynadione A)能減輕由神經(jīng)遞質(zhì)興奮劑、L-谷氨酸鹽引起的神經(jīng)毒性以及由紅藻氨酸鹽引起的神經(jīng)毒性，主要通過促進H2O2的分解而實現(xiàn)的[2]。

6.3對肝臟的保護作用

白首烏總苷對乙酰苯肼造成的溶血性貧血的肝臟有明顯的保護作用，是通過增加肝細胞代謝功能及對乙酰苯肼造成的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)進行抑制，從而對受損肝臟起到良好的保護作用[26]。對白首烏的提取物中的氨基酸、多糖能提高肝損傷大鼠的存活率和降低血清膽紅素和轉(zhuǎn)氨酶的作用，并且能顯著提高肝細胞酶的生物活性[27]。

白首烏二酮(cynadione A)能明顯降低(約50%)鼠的CCl4損傷肝細胞一級培養(yǎng)模型谷丙轉(zhuǎn)氨酶山梨醇脫氫酶的釋放[28]。研究表明是通過減少代謝產(chǎn)物丙二醛的量來降低脂質(zhì)過氧化作用[35]。采用CCl4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型研究江蘇地產(chǎn)白首烏總苷的肝臟保護作用，結(jié)果表明: 白首烏總苷能顯著改善肝脾充血、腫大，減輕肝脾損傷； 治療組肝細胞壞死較少，匯管區(qū)結(jié)締組織增生不明顯； 白首烏總苷具有減輕肝細胞變性、壞死，促進肝細胞再生的作用； 白首烏總苷還可顯著抑制血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT) 、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST) 的升高，表明白首烏總苷能明顯改善肝臟功能，具有抑制肝損傷的作用[29]。另有實驗研究證實，白首烏甾苷對乙酰苯肼造成的溶血性貧血的肝臟有明顯的保護作用，可使受損動物肝臟的酶活性有不同程度的恢復(fù)，有的可恢復(fù)到正常水平，肝細胞內(nèi) RNA 及蛋白合成增加，從而對受損肝臟起到良好的保護作用[30]。從 ALT、AST 的活性入手，研究白首烏多糖溶液的保肝護肝作用，實驗證明白首烏多糖對酒精所致小鼠急性肝損傷具有顯著的保護作用[23]。

6.4對胃腸的作用

用硫酸阿托品抑制小鼠小腸推進運動，觀察耳葉牛皮消對小腸推進運動的影響；以夾尾刺激法制造大鼠功能性消化不良模型，觀察耳葉牛皮消對模型大鼠胃黏膜一氧化氮(NO)含量的影響；用苦寒瀉下法制造大鼠脾虛泄瀉模型，觀察耳葉牛皮消對模型大鼠血中胃腸激素水平的影響。結(jié)果表明，耳葉牛皮消能顯著提高小腸運動受抑小鼠的小腸推進功能，顯著降低功能性消化不良大鼠胃黏膜NO含量，顯著升高脾虛泄瀉模型大鼠血清胃泌素(GAS)和血漿胃動素(MTL)含量。耳葉牛皮消促進胃腸運動的機制可能與其降低胃黏膜NO含量、提高血清GAS和血漿MTL水平有關(guān)[31]。

7　毒理學(xué)研究

實驗證明白首烏水煎劑及白首烏淀粉口服無急性毒性反應(yīng)，甾體酯苷及其苷元為白首烏主要有毒成分，但其口服 LD50屬微毒范圍，且白首烏甾體酯苷無致突變作用，因此可以認為，白首烏飲片按一般劑量口服是比較安全的[32]。從急性毒性實驗、Ames實驗、小鼠骨髓微核實驗、小鼠精子畸形實驗和 30 d 喂養(yǎng)實驗對白首烏進行食品安全性評價，結(jié)果顯示急性毒性及 Ames 實驗、小鼠骨髓微核和精子畸形實驗結(jié)果均呈陰性；30 d 喂養(yǎng)實驗，含 1/10白首烏片飼料組，實驗動物出現(xiàn)了興奮性增高、易激怒、明顯消瘦、體質(zhì)量呈下降趨勢、食物利用率低，雌性動物血小板有減少傾向，雄性動物 AST、ALT 有升高傾向；含 l/5 白首烏片飼料組，實驗動物陸續(xù)死亡，有輕度肝細胞顆粒樣變性等[33]。白首烏醇提物比白首烏總苷、全粉的增強免疫和抗氧化能力強；醇提物和全粉末表現(xiàn)出急性毒性，總苷具有一定的急性毒性，其 LD50為 5.49 g/kg[34]。

8　展　望

目前，耳葉牛皮消的開發(fā)利用還停留在特色食品或功能食品的生產(chǎn)和利用，產(chǎn)品技術(shù)含量低，附加值小。江蘇濱海作為白首烏的重要產(chǎn)地，由于對其藥用開發(fā)不夠，濱海市民間大多將耳葉牛皮消制成白首烏粉、白首烏片，并作為保健品在市場上銷售，使其藥用價值沒有真正得到體現(xiàn)。雖然白首烏的藥化、藥理和臨床應(yīng)用己取得許多進展，但仍有不少問題需要進一步的闡明和研究，如各藥理作用的有效成分，抗衰老作用及其機理，尤其對老年性疾病的防治及其機制，有待于深入研究。

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Advances in Research of Pharmacology Activities ofCynanchumbungei

FangXixiu1,2 *,WangDongmei2,ZhouXuesong3,WangFengping1,ChengMingchao3,GuHaihua1

(1.JiangsuKangnuoAgriculturalScienceandTechnologyCo.,Ltd.,Binhai224500,China; 2JiangsuAgriculturalandHusbandryCollege,Taizhou225300,China; 3.InstituteofAgriculturalScienceandTechnologyofBinhaiCountyinJiangsuProvince,Binhai224500,China)

Cynanchum bungeiisafamoustraditionaltonicintheOrientalSystemofmedicineasCynanchumauriculatumRoyleexWightroots.Ithasanti-tumor,immunomodulatory,anti-oxidation,anti-aging,regulatinglipidmetabolism,promotinghairgrowth,protectingorgansandotheractivities.Thepharmacologicalactivitieswasanalyzed,andresearchanddevelopmentdirectionofCynanchum auriculatumRoyleexWightinthefutureweresummarizedinthisreview.

Cynanchum bungei (Cynanchum auriculatumRoyleexWight);C21steroidalglycosides;pharmacologicalactivities

10.3969/j.issn.1006-9690.2016.04.014

2016-01-12

江蘇省農(nóng)業(yè)科技自主創(chuàng)新項目[CX(14)2139]。

方希修(1965—)，男，博士，教授，研究方向為分子免疫與分子營養(yǎng)代謝調(diào)控。E-mail:381162855@qq.com

R285

A

1006-9690(2016)04-0053-04