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血糖參考測量實驗室能力驗證*

全燦1，李紅梅1，徐蓓1，吳佳佳1，史光華2，呂京2，陳寶榮3

(1.中國計量科學研究院，北京 100029；2.中國合格評定國家認可委員會，北京 100062；

3.北京航天總醫(yī)院檢驗科，北京 100076)

本論文在質檢公益性行業(yè)科研專項項目的資助下，建立同位素稀釋質譜技術開展國際比對，研制血清葡萄糖國家標準物質，并應用于參考測量實驗室的血糖能力評估，驗證我國參考測量實驗室血糖測量能力，為參考測量程序提供可溯源性，報道如下。

1計劃概述

1.1項目簡介葡萄糖是人體內新陳代謝的重要物質，是人體能量的主要來源之一。血糖濃度測定、口服糖耐量試驗是臨床診斷糖尿病的重要指標[1]。人血清葡萄糖的常規(guī)測定方法主要包括葡萄糖氧化酶法和己糖激酶法。葡萄糖氧化酶法操作簡便，性能較好，廣泛用于臨床，但是此方法線性范圍較窄，抗干擾能力稍差；己糖激酶方法性能優(yōu)于前者，但由于價格偏高，臨床應用受到限制；干化學法快速簡便，主要用于急診[2]。參考測量程序：亦稱參考方法，是經過充分研究的測量程序，給出的量值測量不確定度適合其預期用途，主要用于評價測量相同被測量的其他測量程序[3]。血清葡萄糖測定的一級參考測量程序是同位素稀釋質譜法(IDMS)，二級參考測量程序是己糖激酶分光光度法[4]?！堆迤咸烟菧y定參考方法》WS/T 350-2011是由衛(wèi)生部臨床檢驗標準專業(yè)委員會提出改采用由國際檢驗醫(yī)學溯源聯(lián)合委員會(JCTLM)批準的《CDC人血清葡萄糖己糖激酶參考方法(分光光度法)》,并參考ISO15193：2009《體外診斷器具-生物源樣品中量的測定-參考測定程序的表述》適當增加內容[5]。

1.2參加實驗室本次選用中國計量科學研究院實驗室建立的同位素稀釋質譜法作為參考值的確定方法。中國計量科學研究院建立的同位素稀釋質譜法參加了CCQM的血糖國際比對CCQM K11.1和K11.2[6]。本次能力驗證得到了國家科技基礎性專項項目(2011FY130100)的支持。共10家來自北京、上海、廣東、四川、浙江、吉林共5省的10家血糖參考實驗室參加了本次能力驗證項目，包括醫(yī)院、臨床檢驗、醫(yī)療器械及民營實驗室等。每個參加實驗室被賦予唯一的實驗室代碼,能力驗證相關報告均按代碼標識參加實驗室。

2能力驗證

2.1方案設計依據CNAS-CL03：2006《能力驗證提供者認可規(guī)則》[7]設計本次能力驗證。

2.1.1樣品制備及濃度水平本次PT樣品為健康人血清樣品和添加樣本，依據CNAS-CL03：2006《能力驗證提供者認可規(guī)則》。本次能力驗證樣品為血清中葡萄糖基體標準物質樣品，按照一級標準物質技術規(guī)范(JJG1006-94)[8]進行制備。每家機構將獲得2個濃度水平的樣品，各濃度樣品量不少于10瓶，每瓶約0.5 mL。樣品基質為人體血清。濃度1，量值在5～7 mmol/L;濃度2，量值在12～15 mmol/L范圍。

2.1.3樣品儲存、運輸和分發(fā)每家實驗室發(fā)給隨機配對抽取的兩個濃度水平的樣品，與能力驗證實施指南、樣品確認單、實驗室代碼編號和測量結果總結表等，采用現(xiàn)場或特快專遞的方式發(fā)給各參加實驗室。樣品長期保存需-80 ℃，干冰運輸，以物流方式將樣品發(fā)送至各參加技術機構。當樣品到達后，參加者應立即核查運輸包裝是否有損壞、干冰是否還有剩余、樣品是否保持低溫狀態(tài)。如果情況正常，則填寫接收交接單，并發(fā)送郵件或傳真至組織單位。如果在傳送過程中有意外情況發(fā)生，應及時通報組織單位，由組織單位按意外情況進行處理。

2.1.4能力驗證方法本次能力驗證，參加實驗室可選用：(1)WS/T 350——《人血清葡萄糖己糖激酶參考方法(分光光度法)》；(2)《同位素稀釋質譜法(GC ID/MS 或LC/ID/MS/MS) 測定血清葡萄糖》的1種或者兩種。參加實驗室在收到樣品后，根據檢驗方法進行檢測，最后報告血糖的測量結果。

2.2統(tǒng)計評價方法能力驗證統(tǒng)計方法取決于實驗結果的總體分布，通過統(tǒng)計驗證實驗室的數(shù)據分布,以確定合適的統(tǒng)計方法。

2.2.1數(shù)據準備在對實驗結果進行統(tǒng)計分析之前，應確保數(shù)據是正確、合理的。輸入并檢查所有數(shù)據結果(必要時經過轉換)，制作顯示結果分布的數(shù)據直方圖，以檢驗正態(tài)性假設。通過數(shù)據直方圖檢查結果是否連續(xù)和對稱。

2.2.2總計統(tǒng)計量完成了數(shù)據準備，就可以用總計統(tǒng)計量來描述結果，包括結果數(shù)、中位值、標準四分位數(shù)間距(IQR)、穩(wěn)健的變異系數(shù)(CV)、最小值、最大值和極差等統(tǒng)計量[10-11]。結果數(shù)是從一個特定檢測中得到的結果總數(shù)，符號為N。

3血糖能力驗證結果及統(tǒng)計評價

3.1樣品A血糖能力驗證結果見表1、圖1(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

表1　　樣品A的能力驗證結果

3.2樣品B血糖能力驗證結果見表2、圖2(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)。

表2　　樣品B的能力驗證結果

-：無數(shù)據。

3.3圖形顯示在最終報告中應有結果的圖示及其相關的不確定度。圖3、4(見《國際檢驗醫(yī)學雜志》網站主頁“論文附件”)分布顯示了在表1、2中的結果。每個參加實驗室的值和參考值用菱形◆表示。實驗室值向上和向下延伸的線段代表實驗室報告的不確定度。

4技術分析

4.1不同參考測量程序的比較絕大部分參加實驗室采用第一法：WS/T350-2011血清葡萄糖測定參考方法，該方法采用在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷酸腺苷(ATP)磷

酸化反應，生成葡萄糖-6-磷酸與ADP。葡萄糖-6-磷酸催化脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸，同時NAD還原成NADH。通過紫外可見分光光度計檢測吸光度；只有2號實驗室采用同位素稀釋氣相色譜質譜法(ID-GC/MS)，對應的前處理方法為衍生化，先后和鹽酸羥胺、醋酐反應，得到糖腈乙酰酯衍生物。利用IDGCMS具有更小的不確定度。

4.2不確定度評定部分參考實驗室尚未掌握不確定度評定，沒有依據《測量不確定度要求的實施指南》[14]開展不確定度評定，對A類、B類、樣品稱量、前處理、定值等不確定度分量不能正確分析和評定，對線性擬合不確定評定基本沒有考慮。

參考文獻

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血清腫瘤標志物PSA檢測助力前列腺癌有效管理

日前，在北京舉辦的腫瘤標志物大師班交流會上，西班牙巴塞羅那臨床醫(yī)院生化實驗室癌癥研究中心主任Rafael Molina教授就PSA的研究發(fā)展、醫(yī)學價值及其對前列腺癌管理的應用進行了深入探討。

WHO 1999年發(fā)布的PSA校準方法(WHO 96/670)將截斷(cut-off)值定為3.1 ng/mL，一般超過10 ng/mL考慮罹患前列腺癌的可能。但血清PSA濃度在前列腺增生和前列腺炎中均有升高，前列腺良性疾病與前列腺癌在2～10 ng/mL時有交叉，存在很高比例的假陰性和假陽性結果。若假陰性出現(xiàn)在2～4 ng/mL，可導致15%癌癥漏檢；假陽性在4～10 ng/mL出現(xiàn)時，被認為是判斷前列腺癌的灰區(qū)，65%良性疾病被錯判為癌癥。此時，可通過結合fPSA計算游離前列腺指數(shù)(%fPSA)，提高檢出率。在tPSA水平為4～10 ng/mL的患者中，以%fPSA為標準可減少35%不必要的活檢，檢出敏感性達94%。

Molina教授介紹了一項覆蓋歐洲八個國家、入組50～74歲男性人群的歐洲前列腺癌隨機篩查研究(ERSPC)，結果發(fā)現(xiàn)，隨訪至第9年時，核心年齡段定期篩查組與對照組的前列腺癌死亡率之比為0.85；隨訪至第11年時，比值為0.78。近期，在《柳葉刀》雜志上公布的13年隨訪結果顯示，55～69歲男性中，PSA篩查使前列腺癌死亡率下降了21%，且與隨訪9年和11年結果相比，獲益呈增長趨勢。

PSA篩查也存在潛在傷害，包括過度診斷和隨之而來的過度治療。Molina教授表示：“篩查前，建議醫(yī)生和患者討論檢測項目的選擇、益處和可能的副作用，以便患者根據情況做出自己的選擇，對有早期診斷要求的人群不應拒絕進行PSA篩查?！?/p>

由于tPSA檢測方法多樣，不同廠商試劑、不同檢測方法之間差異水平達10%～40%。為提高PSA檢測特異性，臨床醫(yī)生需結合年齡特異性參考范圍、PSA抗原密度(PSA/D)、速率(PSAV)、游離與總PSA比(f/t)、外周帶PSA(PSA-TZD)檢測等附加指標綜合判斷。雖然當前不同PSA檢測方法之間差異仍較大，但隨著診斷技術改進，PSA檢測精準度正在不斷提高。羅氏診斷Elecsys?PSA和fPSA檢測擁有WHO標準溯源，只需一管血，18分鐘就能為臨床提供準確結果和高醫(yī)學價值信息，為患者長期隨訪提供可靠依據，有助于實現(xiàn)前列腺癌高效管理。

(收稿日期：2015-09-24)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.04.068

文獻標識碼：B

文章編號：1673-4130(2016)04-0571-03

基金項目：質檢公益性行業(yè)科研專項項目(201410234)；質檢公益性行業(yè)科研專項項目(201210066);國家科技基礎性專項項目(2011FY130100)。

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