呂艷鋒，王建新，李志文，崔振華，王賢仁，禹化龍，喻苗，金鐳，劉貞吉(山東大學第二醫(yī)院，濟南250033)

?

玉燭散水煎液對血虛型結(jié)腸慢傳輸型便秘小鼠胃腸功能的影響及其作用機制

呂艷鋒，王建新，李志文，崔振華，王賢仁，禹化龍，喻苗，金鐳，劉貞吉(山東大學第二醫(yī)院，濟南250033)

摘要：目的探討不同濃度玉燭散水煎液對血虛型結(jié)腸慢傳輸型便秘(STC)小鼠胃腸功能的影響及其可能的作用機制。方法制備含生藥0.8、0.4、0.2 g/mL的玉燭散水煎液(分別為高、中、低濃度)。建立小鼠血虛型STC模型60只，隨機分為模型對照組、莫沙必利組，高、中、低濃度玉燭散組，每組12只；莫沙必利組予莫沙必利灌胃，高、中、低濃度玉燭散組分別予高、中、低濃度玉燭散水煎液20 mL/kg灌胃；另選正常小鼠12只作為空白對照組，空白對照組、模型對照組均予等體積生理鹽水灌胃。各組均連續(xù)灌胃7天。比較各組第1次排黑便時間、排便粒數(shù)、排便重量及血清5-羥色胺(5-HT)、胃動素(MTL)、NO水平。結(jié)果與空白對照組比較，模型對照組第1次排黑便時間明顯增加，排便粒數(shù)、排便質(zhì)量顯著降低(P均<0.05)；與模型對照組比較，高、中濃度玉燭散組第1次排黑便時間明顯縮短，糞便粒數(shù)和重量顯著增加(P均<0.05)；與莫沙必利組比較，高、中濃度玉燭散組第1次排黑便時間亦顯著縮短，糞便粒數(shù)和重量亦顯著增加(P均<0.05)；并且高、中濃度玉燭散組效果優(yōu)于低濃度玉燭散組(P均<0.05)。與空白對照組比較，模型對照組血清5-HT水平明顯降低(P<0.05)；與模型對照組比較，高、中、低濃度玉燭散組及莫沙必利組血清5-HT水平明顯升高(P均<0.05)。與空白對照組比較，模型對照組血清MTL水平明顯降低(P<0.05)；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組血清MTL水平明顯升高(P<0.05)。與空白對照組比較，模型對照組血清NO水平明顯升高(P<0.05)；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組、莫沙必利組血清NO水平明顯降低(P均<0.05)。結(jié)論0.8、0.4、0.2 g/mL的玉燭散水煎液均能促進血虛型STC小鼠腸蠕動，改善其胃腸功能，呈一定的量效關(guān)系；其機制可能與升高血清5-HT、MTL水平，降低血清NO水平有關(guān)。

關(guān)鍵詞：結(jié)腸慢傳輸型便秘；血虛型便秘；玉燭散；小鼠

結(jié)腸慢傳輸型便秘(STC)又稱結(jié)腸無力，屬腸道動力障礙性疾病[1，2]。中醫(yī)認為，STC大多屬中醫(yī)虛秘范疇，多以虛證為主，臨床以氣虛、血虛便秘居多，且虛實夾雜，多伴血瘀，臨證以養(yǎng)血潤腸、化瘀通便為治法，常能獲得滿意療效。玉燭散出自中醫(yī)古籍《儒門事親》，具有調(diào)養(yǎng)氣血、通瘀潤腸之功效，多用于治療虛型便秘。本課題組自2008年開展關(guān)于便秘胃腸道動力方面的中醫(yī)藥研究，前期研究發(fā)現(xiàn)，玉燭散中部分單味藥物在藥理上有促進排便作用，但其成方功效具體機理鮮見報道。2012年12月~2013年10月，我們觀察了玉燭散水煎液對血虛型STC小鼠胃腸功能的影響，現(xiàn)分析結(jié)果，并探討其可能的作用機制。

1材料與方法

1.1材料健康ICR小鼠100只，4周齡，雌雄各半，體質(zhì)量18～22 g，由山東魯抗醫(yī)藥集團提供，許可證號：SCXK(魯)20080002。所有小鼠于山東大學第二醫(yī)院實驗動物中心適應性飼養(yǎng)，溫度20～22 ℃，相對濕度50%～60%。復方苯乙哌啶(批號：20110703，長春長紅制藥有限公司)；枸櫞酸莫沙必利片(批號：110511，魯南貝特制藥有限公司)；納米碳混懸液(規(guī)格：50 mg/支，批號：20100022，重慶萊美藥業(yè)股份有限公司)；電子天平(型號：DS-425P，上海寺崗電子有限公司)；恒溫鼓風干燥箱(型號：DHG-9030A，上海精宏儀器廠)。 玉燭散水煎液(主要成分為當歸、川芎、熟地、白芍、大黃、芒硝、甘草)制備：取同一批次各藥材飲片(除芒硝)10 g，用蒸餾水浸泡30 min，煎煮30 min收集煎液，煎液中加入芒硝10 g，攪拌充分溶解。原渣再加水煎20 min，過濾取煎液，兩液合并后加熱蒸發(fā)，制成含生藥0.8、0.4、0.2 g/mL的水煎液(分別為高、中、低濃度)，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2動物分組及處理所有小鼠適應性飼養(yǎng)48 h。隨機取12只作為空白對照組。其余小鼠制作血虛型STC模型[3,4]：復方苯乙哌啶(1.875 mg/kg)連續(xù)灌胃30天。灌胃首日下午，用75%乙醇棉球擦拭小鼠尾部，使血管擴張充血，剪去鼠尾尖端(0.25～0.30 cm)，將鼠尾傷口浸入37 ℃溫水中，直至小鼠失血0.15～0.20 mL。每5天同法放血1次，共6次。共制成血虛型STC模型小鼠60只。

將成模小鼠隨機均分為模型對照組、莫沙必利組及高、中、低濃度玉燭散組，每組12只。按人和動物比例折算藥物用量[5]，莫沙必利組給予枸櫞酸莫沙必利片1.875 mg/kg，用生理鹽水稀釋至0.05 mg/mL灌胃，2次/d；高、中、低濃度玉燭散組分別予高、中、低濃度玉燭散水煎液20 mL/kg灌胃，2次/d?？瞻讓φ战M、模型對照組給予等體積生理鹽水灌胃。各組均連續(xù)灌胃7天。末次灌胃前禁食12 h，灌胃液加入納米碳混懸液1 mL，混勻后灌胃。

1.3相關(guān)指標觀察

1.3.1排便情況觀察灌胃后第1次排黑便時間，連續(xù)觀察12 h，計數(shù)排便粒數(shù)，并稱取糞便重量。

1.3.2血清5-羥色胺(5-HT)、胃動素(MTL)、NO各組收集完糞便后，腹腔注射4%水合氯醛麻醉，下腔靜脈取血，4 ℃ 2 500 r/min離心10 min，取上清，檢測血清5-HT、MTL、NO。所有操作嚴格按試劑盒說明進行。

2結(jié)果

2.1各組排便情況比較見表1。

表1　各組排便情況比較±s)

注：與空白對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，#P<0.05；與莫沙必利組比較，△P<0.05；與低濃度玉燭散組比較，▲P<0.05。

2.2各組血清5-HT、MTL、NO水平比較見表2。

表2　各組血清5-HT、MTL、NO水平比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05；與模型對照組比較，#P<0.05；與莫沙必利組比較，△P<0.05；與中濃度玉燭散組比較，▲P<0.05。

3討論

STC是由結(jié)腸傳輸功能障礙引起的一種常見疾病，表現(xiàn)為排便次數(shù)減少、排便困難、腹脹等，其確切發(fā)病機制尚不清楚[6～8]。目前西醫(yī)治療以各類瀉藥為主，多數(shù)患者治療早期病情有所緩解，但長期服用瀉藥易產(chǎn)生耐藥，部分患者產(chǎn)生藥物依賴性，表現(xiàn)為服藥即便、停藥即秘，出現(xiàn)濫用瀉藥綜合征、瀉劑結(jié)腸等，部分長期服藥者出現(xiàn)水電解質(zhì)紊亂、心律失常等。

近年來，中藥單方及組方治療便秘多有報道，如單味中藥枳實、木香、養(yǎng)血潤腸方等[9，10]，均可增加胃腸道推進率。玉燭散來自《儒門事親》卷十二，由當歸、川芎、熟地、白芍、大黃、芒硝、甘草組成，主要功用是養(yǎng)血清熱、泄積通便，主治血虛秘結(jié)?！冻煞角杏谩分^：取《爾雅》“四時和氣，謂之玉燭”之義。古籍中對其頗為推崇，《血證論》釋：取四物以補調(diào)其血，而芒硝、大黃逐瘀去閉。

5-HT是參與調(diào)節(jié)胃腸道運動和分泌功能的重要神經(jīng)遞質(zhì)和旁分泌信號分子，與慢性便秘、腸易激綜合征、腹瀉等胃腸道功能性疾病密切相關(guān)[11～13]。結(jié)腸體外實驗證明，5-HT類似物能夠加速結(jié)腸運動，而其拮抗劑則明顯抑制結(jié)腸運動[14]。MTL是一種含有22個氨基酸的活性直鏈多肽，分泌MTL的細胞分布于十二指腸和近端空腸黏膜隱窩及絨毛中，在胃底、胃竇及小腸下部黏膜有少量分布，通過血液循環(huán)以內(nèi)分泌的方式調(diào)節(jié)胃腸運動，其主要生理作用是促進消化間期的胃腸運動，是參與胃腸動力的一種興奮性肽[15]。NO在腸道的生理活動中具有重要作用，通過擴散方式進入胃腸平滑肌細胞，激活可溶性鳥苷酸環(huán)化酶，引起cGMP升高，可減少細胞內(nèi)鈣離子濃度，使結(jié)腸平滑肌松弛導致胃腸蠕動減弱[16]。

莫沙必利作為第四代促胃腸動力藥物，是一種強效5-HT受體激動劑，通過興奮肌間神經(jīng)叢5-HT受體，刺激乙酰膽堿釋放，增強胃腸運動，已得到廣泛認可。本研究結(jié)果顯示，與莫沙必利組比較，高、中濃度玉燭散組第1次排黑便時間明顯縮短，排便粒數(shù)及重量明顯增加。表明玉燭散水煎液可用于STC的治療。本研究還發(fā)現(xiàn)，與空白對照組比較，模型對照組血清5-HT水平明顯降低；與模型對照組比較，高、中、低濃度玉燭散組及莫沙必利組血清5-HT水平明顯升高。與空白對照組比較，模型對照組血清MTL水平明顯降低；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組血清MTL水平明顯升高。與空白對照組比較，模型對照組血清NO水平明顯升高；與模型對照組比較，中濃度玉燭散組、莫沙必利組血清NO水平明顯降低。表明玉燭散可能通過升高血清5-HT、MTL水平，降低血清NO水平而發(fā)揮治療作用。

綜上所述，0.8、0.4、0.2 g/mL的玉燭散水煎液均能促進血虛型STC小鼠腸蠕動，改善其胃腸功能，呈一定的量效關(guān)系；其機制可能與升高血清5-HT、MTL水平，降低血清NO水平有關(guān)。

參考文獻：

[1] Lyford GL, He CL, Soffer E, et al. Pan-colonic decrease in interstitial cells of Cajal in patients with slow transit constipation[J]. Gut, 2002,51(4):496-501.

[2] Sanders KM, Ordog T, Ward SM. Physiology and pathophysiology of the interstitial cells of Cajal: from bench to bedside. Ⅳ. Genetic and animal models of GI motility disorders caused by loss of interstitial cells of Cajal[J]. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 2002,282(5):G747-G756.

[3] 盧文麗，方肇勤，潘志強，等.四種不同品系小鼠氣虛血虛證候的比較與評價[J].遼寧中醫(yī)雜志,2007,34(4)：519-522.

[4] 劉麗莎，張微，趙敏，等.功能性便秘動物造模方法研究概況[J].實用中醫(yī)內(nèi)科雜志，2015,29(2)：169-172.

[5] Kobayashi A, Yokota H, Kobayashi H, et al. Mucosal neuroendocrine cell abnormalities in patients with chronic constipation[J]. Asian J Surg, 2004,27(3):197-201.

[6] Bassotti G, Villanacci V. Slow transit constipation: a functional disorder becomes an enteric neuropathy[J]. World J Gastroenterol, 2006,12(29):4609-4613.

[7] Chan AO, Cheng C, Hui WM, et al. Differing coping mechanisms, stress level and anorectal physiology in patients with functional constipation[J]. World J Gastroenterol, 2005, 11(34):5362-5366.

[8] Benatar A, Feenstra A, Decraene T, et al. Effects of cisapride on corrected QT interval, heart rate, and rhythm in infants undergoing polysomnography[J]. Pediatrics, 2000,106(6):E85.

[9] 吳承艷，李振彬，石建喜.木香、丁香和威靈仙鎮(zhèn)痛及胃腸動力作用的實驗研究[J]．江蘇中醫(yī)藥，2005，26(12):61-63．

[10] 邱劍鋒，李國棟，肖誠，等.養(yǎng)血潤腸方對小鼠血虛型慢性功能性便秘結(jié)腸組織勻漿及血清中 NO的影響[J].江西中醫(yī)藥大學學報，2007,19(3)：68-69.

[11] Prasansuklab A, Poovorawan Y, Tencomnao T. Modulation of human serotonin transporter expression by 5-HTTLPR incColon cells[J]. Int J Mol Sci, 2011,12(10):6619-6634.

[12] Priem EK, De Maeyer JH, Vandewoestyne M, et al. Predominant mucosal expression of 5-HT4(+h) receptor splice variants in pig stomach and colon[J]. World J Gastroenterol, 2013,19(24):3747-3760.

[13] Chua AS, Keeling PW, Dinan TG. Role of cholecystokinin and central serotonergic receptors in functional dyspepsia[J]. World J Gastroenterol, 2006,12(9):1329-1335.

[14] Lacy BE, Yu S. Tegaserod: a new 5-HT4 agonist[J]. J Clin Gastroenterol, 2002,34(1):27-33.

[15] He Y, Wang H, Yang DY, et al. Differential expression of motilin receptor in various parts of gastrointestinal tract in dogs[J]. Gastroenterol Res Pract, 2015,2015:970940.

[16] Francis SH, Busch JL, Corbin JD, et al. cGMP-dependent protein kinases and cGMP phosphodiesterases in nitric oxide and cGMP action[J]. Pharmacol Rev, 2010,62(3):525-563.

(收稿日期：2015-12-08)

中圖分類號：R574.62

文獻標志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)08-0025-03

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.08.009

通信作者：王建新(E-mail： youtow@sina.com)

基金項目：山東省自然科學基金資助項目(ZR2011HQ049)；濟南市青年科技明星計劃項目(201004055，20090208)。