馬俊鵬，王新玲，李　蕓，胡君萍，王小青，丁燕楠，王曉梅

(1.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院米東醫(yī)院藥械科，新疆 烏魯木齊　830000；2. 新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，

新疆 烏魯木齊　830011；3.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第五師醫(yī)院藥劑科，新疆 博樂　833400)

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◇藥學(xué)研究◇

維吾爾藥鐵力木不同極性部位體外抗氧化作用的研究

馬俊鵬1，王新玲2，李蕓3，胡君萍2，王小青2，丁燕楠2，王曉梅2

(1.新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院米東醫(yī)院藥械科，新疆 烏魯木齊830000；2. 新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，

新疆 烏魯木齊830011；3.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第五師醫(yī)院藥劑科，新疆 博樂833400)

摘要：目的研究維吾爾藥鐵力木不同極性部位的體外抗氧化活性。方法以Vc為對照，通過測定鐵力木乙醇提取物、水提取物及乙醇提取物石油醚(沸程60～90℃)、乙酸乙酯、正丁醇、水各萃取物對Fe(3+)的還原能力、對DPPH自由基(DPPH·)和超氧自由基)的清除能力，研究鐵力木的體外抗氧化活性。結(jié)果鐵力木各部位對Fe(3+)均表現(xiàn)出一定的還原能力，對DPPH·及均表現(xiàn)出一定的清除作用，但作用均弱于VC。其中水層及正丁醇層對Fe(3+)的還原能力較強(qiáng)，而其石油醚層和乙酸乙酯層還原能力較弱；水層和水提取物對DPPH·具有一定的清除能力；石油醚層及水提取物清除的作用較強(qiáng)。結(jié)論鐵力木具有較好的抗氧化能力。

關(guān)鍵詞：鐵力木；抗氧化活性；鐵離子還原反應(yīng)；DPPH自由基；超氧自由基

維吾爾藥鐵力木為藤黃科(Guttiferae)植物鐵力木(MesuaferreaLinn.)的干燥花蕾。其原植物主要分布于在海拔500～600 m的亞熱帶地區(qū)，如：中國云南、廣東、廣西及印度、斯里蘭卡、馬來西亞等地[1]。鐵力木植物的葉子、花、種子油脂及樹皮均可作為印度傳統(tǒng)藥物的常用藥材，在民間主要作為敷劑用于治療消化不良、發(fā)燒、腎臟疾病等，鐵力木的花還具有治療哮喘、咳嗽、發(fā)燒等功效[2]。鐵力木花蕾為維吾爾醫(yī)常用藥材，維吾爾名為那爾米西克，主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如寒性心虛、抑郁癥、神經(jīng)衰弱、身寒陽痿、濕性胃虛等[3-4]。鐵力木還可制成復(fù)方制劑，如維藥復(fù)方“艾比那爾米西克”用于治療胃脘塞虛、胃納不佳、腹痛腹脹等[3]。目前，國外已有學(xué)者對鐵力木花的化學(xué)成分及活性進(jìn)行了研究，從中分離得到萜類、環(huán)己二烯類、香豆素類等化合物；還通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定鐵力木花的環(huán)己烷和苯提取物中主要有三萜類、樹脂；乙醇提取物中富含低聚糖、鞣質(zhì)和皂苷類成分；而甲醇提取物中也發(fā)現(xiàn)有生物堿、糖苷、鞣質(zhì)、酚類、香豆素、甾體、黃酮、皂苷及揮發(fā)油類成分。其甲醇提取物對雌性大鼠具有體外的抗氧化活性和肝保護(hù)作用；水提取物具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基的活性等[5-9]。但國內(nèi)對鐵力木花的化學(xué)成分及活性研究報道較少，艾力克木·吐爾遜等[10]報道了鐵力木花的生藥學(xué)特征及其不同萃取部位抗血小板的聚集作用。因此，為了更好地開發(fā)和利用該藥材資源，本實(shí)驗(yàn)對鐵力木花不同極性溶劑的提取物及各萃取部位進(jìn)行體外抗氧化活性的初步研究，以期為其綜合利用和深入開發(fā)提供理論依據(jù)。

1儀器與試藥

1.1藥材鐵力木藥材購于新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院中心藥房，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院天藥/生藥教研室王曉梅副教授鑒定為藤黃科鐵力木屬植物鐵力木(MesuaferreaLinn.)的干燥花蕾(批號:201510301)。

1.2試藥DPPH(Sigma)；VC抗壞血酸(南京化學(xué)試劑有限公司)；鐵氰化鉀、鄰苯三酚、過氧化氫、硫酸亞鐵、鄰菲啰啉(鄭州市德眾化學(xué)試劑廠)。上述試劑均為分析純。

1.3儀器T6新世紀(jì)紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)； AB104-N電子分析天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司，d=0.1 mg)； HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療儀器有限公司)；真空干燥箱(DZF-6090型，上海一恒科學(xué)儀器公司)；EYELAN-1001旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)。

2方法

2.1鐵力木不同極性部位的制備稱取0.5 kg的鐵力木藥材，以乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，濃縮得乙醇提取物。將乙醇提取物水混懸后，依次用石油醚(沸程60～90℃)、乙酸乙酯及正丁醇萃取，得石油醚層，乙酸乙酯層，正丁醇層，水層。另外，將乙醇提取后藥渣用水煎煮3次，合并煎煮液，濃縮得水提取物。流程圖見圖1。

圖1　 流程圖

2.2抗氧化活性研究

2.2.1Vc溶液的制備精密稱取Vc對照品10 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得1 g·L-1的Vc儲備液。測定時，吸取適量儲備液至10 mL的容量瓶中，配成一系列濃度梯度的Vc溶液。

2.2.2各極性部位溶液的制備精密稱取鐵力木不同極性部位的浸膏各10 mg，分別置于10 mL的容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得1 g·L-1的不同極性部位的儲備液。測定時，吸取適量儲備液至10 mL的容量瓶中，配成一系列濃度梯度的供試品溶液。

2.2.3Fe3+還原能力的測定[11]取干凈試管若干支，分別依次加入各樣品溶液2.5 mL、pH值為6.6的磷酸鹽緩沖溶液2.5 mL、1%鐵氰化鉀溶液2.5 mL，搖勻；將試管置于50℃水浴中保溫20 min，取出，快速冷卻，分別加入10% 三氯乙酸溶液2.5 mL，搖勻，離心10 min；再分別取上清液2.5 mL，依次加入蒸餾水2.5 mL、0.1% FeCl3溶液0.5 mL，充分混勻，靜置10 min，在波長700 nm下測定吸光度值A(chǔ)(以蒸餾水作參比)。吸光度值越大，說明樣品對Fe3+的還原能力越強(qiáng)。

2.2.4對DPPH·的清除率的測定[12](1)DPPH·溶液的配制：精密稱取DPPH 20 mg于250 mL容量瓶中，加無水乙醇溶解并定容至刻度，制成0.08 g·L-1的DPPH溶液，0～4℃避光保存。

(2)清除DPPH·能力的測定：分別吸取0.08 g·L-1的DPPH溶液2 mL于試管中，各加系列樣品溶液1 mL和甲醇1 mL，混合均勻，在517 nm處測定吸光度值A(chǔ)i；另取試管，加入3 mL甲醇和各系列樣品溶液1 mL，混合均勻，在517 nm處測定吸光度值A(chǔ)j；另取試管，分別吸取0.08 g·L-1的DPPH溶液2 mL，加入甲醇2 mL，混合均勻，在517 nm處測定吸光度值A(chǔ)0；每組測定三次。DPPH·清除率計(jì)算公式如下：清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/A0] ×100%。

2.2.5對超氧自由基清除率的測定[13]分別吸取磷酸鹽緩沖液(pH=8.2)9 mL與各樣品溶液1 mL，混合均勻后于25℃恒溫水浴15 min。再分別吸取混合液3 mL，加入45 mmol·L-1鄰苯三酚溶液0.1 mL，搖勻，在第4分鐘加入10 mol·L-1鹽酸1滴終止反應(yīng)，于325 nm處測定樣品吸光值A(chǔ)1；同時分別測定不加鄰苯三酚溶液的樣品溶液和磷酸鹽混合液的吸光值A(chǔ)2和以1 mL溶劑代替樣品溶液的磷酸鹽和鄰苯三酚混合液的吸光值A(chǔ)3，每組重復(fù)測定3次。超氧自由基清除率的計(jì)算公式如下：清除率(%)=[1-(A1-A2)/A3] ×100%。

3結(jié)果

3.1鐵力木不同極性部位對Fe3+還原能力的測定還原能力的測定可以評價物質(zhì)抗氧化活性的強(qiáng)弱。實(shí)驗(yàn)中，樣品的吸光度值越大，說明樣品對Fe3+的還原能力越強(qiáng)。鐵力木各極性部位和Vc對Fe3+的還原能力見圖2。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，鐵力木各極性部位和Vc 對Fe3+均表現(xiàn)出一定的還原能力，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)它們對Fe3+的還原能力呈良好的量效關(guān)系，即隨著濃度的增加，清除率也逐漸增加。但鐵力木各極性部位的作用均弱于Vc。

3.2鐵力木不同極性部位清除DPPH·的能力因DPPH·溶液在517 nm處有最大吸收，當(dāng)樣品對DPPH·有清除作用時，其吸光度值下降。因此，樣品對DPPH· 的清除能力可以通過比較各溶液吸光度值的變化來評價。鐵力木各極性部位和Vc對DPPH·的清除能力如圖3所示。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，鐵力木各極性部位和Vc對DPPH·均表現(xiàn)出一定的清除作用。在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)它們對DPPH·的清除能力呈良好的量效關(guān)系，即隨著濃度的增加，清除率也逐漸增加。經(jīng)過計(jì)算得各部位的IC50值分別為：Vc(0.06 g·L-1)、水層(0.06 g·L-1)、正丁醇層(0.18 g·L-1)、乙酸乙酯層(1.19 g·L-1)、石油醚層(0.37 g·L-1)、水提物(0.12 g·L-1)、乙醇提取物(0.83 g·L-1)。通過比較各部位的IC50值可知鐵力木各極性部位的作用強(qiáng)弱順序?yàn)椋核畬?水提取物>正丁醇層>石油醚層>乙醇提取物>乙酸乙酯層。其水層對DPPH·具有較強(qiáng)的清除能力，作用相當(dāng)于Vc。

圖2　鐵力木提取物和Vc的還原能力

圖3　對DPPH·的清除能力

的清除能力

4討論

體外抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鐵力木不同極性部位均具有一定抗氧化能力，尤其是高濃度的作用明顯強(qiáng)于低濃度，從而可以推斷鐵力木的抗氧化作用與其各部位所含的的化學(xué)成分含量有關(guān)，含量越高，則其抗氧化活性也就較強(qiáng)。因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)為體外實(shí)驗(yàn)，并不能完全闡明鐵力木的抗氧化作用機(jī)制，因此若想把鐵力木開發(fā)成天然的抗氧化劑，還需對其體內(nèi)的抗氧化作用機(jī)制進(jìn)行更深入的研究。

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Antioxidant activities of different polarity chemical constituents from Mesua ferrea in vitro

MA Jun-peng1,WANG Xin-lin2,LI Yun3,et al

(1.DepartmentofPharmacy,MidongHospitalofPeople’sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion,Urumqi,Xinjiang830000,China;2.PharmacyCollege,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi,Xinjiang830011,China;3.DepartmentofPharmacy,theFifthDivisionHospitalofXinjiangProductionandConstructionCorps,Bole,Xinjiang833400,China)

Abstract:Objective To study the antioxidant activity of the different polarity chemical constituents from the buds of Mesua ferrea. Methods The capacity of ferric reducing antioxidant power and scavenging of the ethanol total extract,water extract,petroleum ether fraction，ethylacetate fraction，n-butanol fraction and water fraction from the buds of Mesua ferrea were evaluated by Fe(3+) reduction capacity experiments and scavenging assay in vitro at different concentrations．The results were compared with those of positive control vitamin C (VC)．Results The ferric reducing antioxidant power and scavenging activity of different polarity chemical constituents from the buds of Mesua ferrea were weaker than those of VC. Among them,the water fraction and n-butanol fraction exhibited strong reduction power of Fe(3+). The water extract and water fraction demonstrated strong scavenging activities of DPPH·. The petroleum ether fraction and water extract demonstrated the strong scavenging activities of . Conclusions Mesua ferrea has a strong antioxidant activity.

Key words:Mesua ferrea;antioxidant activity;ferric reducing antioxidant

(收稿日期：2015-10-19，修回日期：2015-12-07)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.03.004

通信作者：王曉梅，女，副教授，研究方向：天然藥物活性成分的研究與開發(fā)，E-mail：forever.wxm@163.com

基金項(xiàng)目：國家“十二五”科技支撐計(jì)劃(No 2012BAI30B02)