薛建文林 華黃興振

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高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定口疳吹藥中苦參堿和氧化苦參堿的含量

薛建文1林 華2黃興振3

【摘要】目的 探討高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定口疳吹藥中苦參堿和氧化苦參堿含量的可行性。方法 采用HPLC法同時(shí)測(cè)定口疳吹藥中苦參堿和氧化苦參堿含量。結(jié)果 苦參堿和氧化苦參堿質(zhì)量濃度分別在5.15～103.00 μg/ml （r=0.9997）、4.87～97.40 μg/ml（r=0.9999）時(shí)與其峰面積呈良好線性關(guān)系；苦參堿和氧化苦參堿的平均加樣回收率分別為98.11％、99.09％，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為1.50％、0.96％。結(jié)論 HPLC法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可作為口疳吹藥中苦參堿和氧化苦參堿含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法。

【關(guān)鍵詞】高效液相色譜法；口疳吹藥；苦參堿；氧化苦參堿；山豆根；含量測(cè)定

1云浮市人民醫(yī)院藥學(xué)部，廣東云浮 527300

2廣西柳州食品藥品檢驗(yàn)所，廣西柳州 213022

3廣西醫(yī)科大學(xué)藥劑學(xué)教研室，廣西南寧 530021

口疳吹藥是由山豆根、青黛、冰片、黃連、甘草、玄明粉、兒茶、硼砂（煅）、人中白、僵蠶、薄荷11味藥物加工而成的中藥復(fù)方制劑，具有清火消腫的作用，是治療咽喉紅腫、口舌腫痛、風(fēng)火牙疳等癥狀的首選藥物[1]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅對(duì)該制劑的性狀進(jìn)行了規(guī)定，未對(duì)方中任何藥物進(jìn)行定性或定量研究，不能有效控制該制劑的質(zhì)量，本研究采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)口疳吹藥中山豆根[2]所含苦參堿和氧化苦參堿進(jìn)行定量檢測(cè)，為進(jìn)一步控制口疳吹藥質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 材料 苦參堿對(duì)照品（批號(hào)：110805-200508）；氧化苦參堿（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110780-201007）；口疳吹藥（雷允上藥業(yè)有限公司，批號(hào)：NC14013、NC14015、NC14021）；色譜純乙腈；分析純異丙醇、磷酸。

1.2 儀器 1200型高效液相色譜儀（安捷倫Agilent）；Chemstation色譜工作站。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：氨基鍵合硅膠填充柱（4.6 mm ×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-異丙醇-3％磷酸溶液（80:5:15）[2-5]；檢測(cè)波長(zhǎng)：210 nm[2,6]；流速：1.2 ml/min；柱溫：30 ℃。

2.2 混合對(duì)照品溶液配制 分別精密稱取苦參堿對(duì)照品和氧化苦參堿對(duì)照品各適量，加流動(dòng)相制成濃度分別為0.515、0.487 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液，加流動(dòng)相制成苦參堿和氧化苦參堿濃度分別為0.0206、0.0487 mg/ml的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液制備 取口疳吹藥適量，研磨成細(xì)粉，取約1.6 g，精密稱定其質(zhì)量，置于具塞錐形瓶中，精密加入三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）混合溶液50 ml，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，再稱定其質(zhì)量，用三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）混合溶液補(bǔ)足損失重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20 ml，40 ℃減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至20 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，振搖均勻，過(guò)濾，即得續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 陰性樣品溶液制備 按口疳吹藥處方，稱取除山豆根的其余藥味，參照口疳吹藥制備工藝，按照2.3供試品溶液的制備方法制成山豆根空白溶液。

2.5 方法專屬性 分別精密吸取供試品溶液、混合對(duì)照品溶液及山豆根空白溶液20 μl，進(jìn)樣。結(jié)果顯示，在與所測(cè)組分對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間，樣品色譜圖中有對(duì)應(yīng)吸收峰；而山豆根空白溶液圖譜上未顯示苦參堿和氧化苦參堿吸收峰，見(jiàn)圖1。

2.6 線性關(guān)系考察 精密量取苦參堿儲(chǔ)備液、氧化苦參堿儲(chǔ)備液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 ml，分別置于5個(gè)10 ml容量瓶中，加甲醇制成系列濃度混合對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，以峰面積Y與對(duì)照品質(zhì)量濃度X，得苦參堿回歸方程為：A=1.0249×106C－416.7，r=0.9997，線性范圍為5.15～103.00 μg/ml；氧化苦參堿A=4.6241×106C+298.4，r=0.9999，線性范圍為4.87～97.40 μg/ml。結(jié)果表明，苦參堿和氧化苦參堿在各自的線性范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

圖1　苦參堿和氧化苦參堿的HPLC圖注：1：苦參堿；2：氧化苦參堿；A：對(duì)照品；B：樣品；C：陰性對(duì)照品

2.7 精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液20 μl，連續(xù)6次注入高效液相色譜儀中，測(cè)得苦參堿和氧化苦參堿峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）分別為0.82％、1.07％。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)口疳吹藥，按2.3方法制成6份供試品溶液，在上述條件下依法進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各成分含量和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，苦參堿和氧化苦參堿的RSD分別為1.22％、1.59％。

2.9 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一批號(hào)口疳吹藥供試品溶液，分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣20 μl測(cè)定，測(cè)得苦參堿和氧化苦參堿的RSD分別為0.80％、1.15％。

2.10 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱定口疳吹藥（苦參堿為0.618 mg/g，氧化苦參堿為1.471 mg/g）0.8 g，研磨成細(xì)粉，置于具塞錐形瓶中，精密加入混合對(duì)照品溶液25 ml、三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）混合溶液25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，再稱定重量，用三氯甲烷-甲醇-濃氨試液（40:10:1）混合溶液補(bǔ)足減少重量，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液20 ml，40 ℃減壓回收溶劑至干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，轉(zhuǎn)移至20 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，振搖均勻，過(guò)濾，即得續(xù)濾液作為加樣供試品試液。依法進(jìn)樣測(cè)定，平均加樣回收率及RSD，見(jiàn)表1。

表1　苦參堿和氧化苦參堿回收率試驗(yàn)

2.11 3批樣品測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)樣品，按供試品制備方法，在上述色譜條件下測(cè)定本品中苦參堿和氧化苦參堿含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2　3個(gè)批號(hào)樣品中苦參堿和氧化苦參堿的含量測(cè)定

3 討論

山豆根為豆科植物越南槐的干燥根和根莖，具有清熱解毒、消腫利咽的作用，可用于火毒蘊(yùn)結(jié)、乳蛾喉痹、咽喉腫痛、齒齦腫痛、口舌生瘡等的治療，是口疳吹藥的主要成分，而苦參堿和氧化苦參堿為山豆根的主要成分。本研究對(duì)口疳吹藥中苦參堿和氧化苦參堿進(jìn)行定量控制研究，結(jié)果表明HPLC法快速、靈敏、準(zhǔn)確，可作為口疳吹藥中苦參堿和氧化苦參堿含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)方法。

參考文獻(xiàn)

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作者簡(jiǎn)介：薛建文（1981.6-），主管藥師。研究方向：藥物制劑和質(zhì)量研究。E-mail：xuejianwenjianwen@163.com

【中圖分類號(hào)】R927.2

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A 【DOI】10.12010/j.issn.1673-5846.2016.04.005