苗淑彥， 韓冬冬， 聶　琴， 苗惠君， 張文兵**， 麥康森

(1.中國海洋大學水產動物營養(yǎng)與飼料農業(yè)部重點實驗室，海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室，山東 青島 266003；

2.揚州大學動物科學與技術學院，江蘇 揚州 225009)

?

飼料中糊精替代魚油對大菱鲆幼魚代謝及免疫反應的影響*

苗淑彥1,2， 韓冬冬1， 聶琴1， 苗惠君1， 張文兵1**， 麥康森1

(1.中國海洋大學水產動物營養(yǎng)與飼料農業(yè)部重點實驗室，海水養(yǎng)殖教育部重點實驗室，山東 青島 266003；

2.揚州大學動物科學與技術學院，江蘇 揚州 225009)

摘要：為研究飼料中糊精替代魚油對大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚代謝及免疫反應的影響，在飼料中蛋白質含量為45%的基礎上，配制4組等氮等能的飼料(D1、D2、D3和D4)，飼料中可溶性糖含量分別為1.93%、5.80%、15.98%和28.27%，脂肪含量分別為16.48%、12.82%、10.78%和6.64%，其中糊精為糖源，魚油和大豆卵磷脂為脂肪源。在室內流水系統中養(yǎng)殖大菱鲆幼魚((8.32 ± 0.06)g)，檢測大菱鲆幼魚的血液和肝臟中糖、脂肪和蛋白質代謝及抗氧化指標，試驗周期為9周。研究表明：隨著飼料中糊精替代魚油水平的升高，大菱鲆的血糖含量、血漿胰島素含量、血漿谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)活性(P<0.05)顯著升高。其中，D4組AST活性顯著高于其余3組(P<0.05)，D1組ALT活性顯著高于其余3組(P<0.05)。飼料中糊精替代魚油水平的升高對血漿中總氨基酸、總膽固醇(CL)和甘油三酯(TGs)的含量無顯著影響(P>0.05)。隨著飼料中糊精含量的不斷上升，血漿中溶菌酶、過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和總抗氧化能力(T-AOC)呈下降趨勢。肝臟中堿性磷酸酶(AKP)和CAT活性以及T-AOC也有一定程度下降(P<0.05)，但肝臟溶菌酶活性顯著上升(P<0.05)。當飼料可溶性糖含量為15.98%時，肝臟SOD活性最高(P<0.05)。結果表明：飼料中，糊精替代魚油既影響大菱鲆幼魚的糖和脂類代謝，又影響其免疫力。在實際生產中，除了關注飼料中糖對魚體生長的影響，還應關注糖對魚體代謝及免疫的影響。

關鍵詞：大菱鲆； 糖； 糊精； 魚油； 代謝； 免疫

引用格式：苗淑彥，韓冬冬，聶琴，等. 飼料中糊精替代魚油對大菱鲆幼魚代謝及免疫反應的影響[J].中國海洋大學學報(自然科學版)， 2016, 46(4)： 21-27.

MIAO Shu-Yan, Han Dong-Dong, NIE Qin, et al. Influence of replacement of dietary fish oil by dextrin on metabolism and immune response of juvenile turbot (Scophthalmusmaximus) [J].Periodical of Ocean University of China, 2016, 46(4)： 21-27.

蛋白質和脂肪是水產動物配合飼料中主要的能量來源，但研究表明，魚類也能夠利用飼料中適量的糖類物質[1]，從而降低配合飼料中蛋白質和脂肪的含量，進而緩解魚類飼料對魚粉和魚油的依賴，降低飼料成本。對脂肪的研究表明：飼料中脂肪含量過多可能會抑制魚類的生長，并引起脂肪在魚體內的蓄積[2-4]。脂肪缺乏會導致魚類生長停滯及其它一系列生理學疾病[3,5]。與脂肪相比，糖類物質具有成本低、來源穩(wěn)定且不易引起魚類脂肪肝等優(yōu)點。由于魚類的代謝及免疫狀態(tài)與營養(yǎng)供給狀況密切相關[6-10]，因此，在研究魚類對糖類利用效率時，除生長指標外，代謝及免疫反應也是受關注的重要方面。研究發(fā)現，飼料中糖的含量應保持在適宜范圍內，過量的糖會對魚體產生代謝負荷，危害魚體健康[8,11]。

大菱鲆(Scophthalmusmaximus)因其價格較高、肉質鮮美、生長快而成為歐洲和亞洲地區(qū)重要的養(yǎng)殖品種[12]。苗淑彥等利用劑量-效應生長實驗，以糊精為飼料糖源，以特定生長率為指標，確定大菱鲆對飼料糖的需求量為15%，并比較了不同飼料糖源對大菱鲆代謝反應的影響[13]。但飼料糖水平對大菱鲆機體代謝的影響尚不清楚。本研究以飼料可溶性糖含量為1.93%、脂肪含量為16.48%為基準，按照等氮等能設計，分別設置不同糊精替代魚油水平的飼料，探討其對大菱鲆代謝和免疫反應的影響，為完善魚類糖代謝理論和科學指導配合飼料中糖類物質的使用提供基礎數據。

1材料與方法

1.1 實驗飼料配方和制作

飼料配方及組成見表1。對照組飼料中未添加可溶性糖，包含44.12%蛋白質和16.48%脂肪。在對照組飼料的基礎上，每組飼料分別添加不同含量的糊精(濟南鑫奎化工有限公司，食品級)，添加水平分別為5%、15%和28%，同時調節(jié)飼料脂肪水平以保持與對照組飼料能量相當。4組等氮等能的實驗飼料分別命名為D1、D2、D3和D4。配制飼料前，所有原料過80目篩，混勻，然后添加魚油和大豆卵磷脂充分混合，加水混勻后在螺桿擠壓機中制成1.5mm×3.0mm的顆粒，50℃烘箱內干燥后置-20℃冰箱保存。

表1　試驗飼料配方及常規(guī)營養(yǎng)組成(干物質)

續(xù)表1

原料IngredientsD1D2D3D4粗脂肪Crudelipid16.4812.8210.786.64可溶性糖Solublecarbohydrate1.935.8015.9828.27灰分Ash11.8511.4911.4911.68總能Grossenergy/kJ·g-121.3720.7320.6119.28

注：①維生素混合物(mg/kg 飼料)：維生素A，32mg；維生素D，5mg；維生素E，240mg；維生素K，10mg；維生素B1，25mg；維生素B2，45mg；煙酸, 200mg；維生素B6，20mg；生物素，60mg；肌醇，800mg；泛酸鈣，60mg; 葉酸，20mg；維生素B12，10mg；維生素C，2000mg；微晶纖維素，4292.54mg。②礦物質預混物(mg/kg 飼料)：五水硫酸銅，10mg；亞硒酸鈉，20mg；一水硫酸錳，45mg；六水氯化鈷(1%)，50mg；一水硫酸鋅，50mg；碘酸鈣(1%)，60mg；一水硫酸亞鐵，80mg；七水硫酸鎂，1200mg；沸石粉，18485mg。③誘食劑：?；撬帷酶拾彼帷锰鸩藟A=1∶3∶3。

Notes: ①Vitamin premix (mg/kg diet): Vitamin A, 32mg; Vitamin D, 5mg; Vitamin E, 240mg; Vitamin K, 10mg; Vitamin B1, 25mg; Vitamin B2, 45mg; Nicotinic acid, 200mg; Vitamin B6, 20mg; Biotin, 60mg; Inositol, 800mg; Calcium pantothenate, 60mg; Folic acid, 20mg; Vitamin B12, 10mg; Vitamin C, 2000mg; Microcrystalline cellulose, 4292.54mg；②Mineral premix (mg/kg diet): CuSO4·5H2O, 10mg; Na2SeO3, 20mg; MnSO4·H2O, 45mg; CoCl2·6H2O (1%), 50mg; ZnSO4·H2O, 50mg; Ca(IO3)2(1%), 60mg; FeSO4·H2O, 80mg; MgSO4·7H2O, 1200mg; Zeolite powder, 18485mg；③Attractants: taurine∶glycine∶betaine=1∶3∶3.

1.2 試驗用魚及養(yǎng)殖管理

試驗用大菱鲆幼魚購自山東省青島市膠南養(yǎng)殖場，為當年人工培育的同一批種苗，大小均勻，健康無病。養(yǎng)殖試驗在中國海洋大學鰲山衛(wèi)實驗基地室內流水養(yǎng)殖系統中進行，養(yǎng)殖容器為500L的玻璃鋼桶，桶內水流速度為6L/min。實驗前投喂商業(yè)飼料(青島七好生物科技有限公司提供)暫養(yǎng)2周以適應環(huán)境。實驗開始前，禁食大菱鲆24h，選擇體重相近((8.36±0.02)g)，體格健壯的幼魚，隨機分為4組，每組設3個重復，每個重復放養(yǎng)28尾魚。每天人工投喂2次實驗飼料(07：00和18：00)，每日觀察攝食情況并記錄，調整飼料投喂達飽食水平。投喂結束1h后，收集殘餌。實驗周期為9周，每周檢測2次水質指標，水溫為18～20℃，pH為7.6～7.8，鹽度為28.2～30.2，溶解氧7.10～8.07mg/L，氨氮為0.045～0.092mg/L、亞硝酸氮為0.023～0.058mg/L。

1.3 樣品收集及指標測定

養(yǎng)殖實驗結束后，大菱鲆禁食24h取樣。為減少取樣操作對魚體產生的應激，所有的實驗魚于取樣前麻醉(MS 222，100mg/kg)。隨機取10尾魚，用肝素鈉取血器于尾靜脈取血，血液先于離心機2000r/min離心10min，分離血漿后立刻置于液氮中保存以測定血液學及免疫學指標。其次，取5尾魚的肝臟迅速置于液氮保存用于分析肝臟免疫學指標。

飼料原料及飼料中的糖含量采用蒽酮比色法[14]測定。

血漿總氨基酸含量參照Moore的茚三酮方法[15]進行測定。血糖采用葡萄糖氧化法進行測定(Sigma kit No. 510，Sigma Chemicals，St. Louis，MO)。血漿胰島素的測定參照Plisetskaya等的方法[16]。血漿總膽固醇和甘油三酯的測定參照Trinder的方法[17]。血漿谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)活性用全自動生化分析儀測定(Hitachi 7020, Tokyo, Japan)。

免疫學指標測定方法如下：

堿性磷酸酶(AKP)活力測定苯磷酸二鈉法[18]。一個酶活力單位定義為：每分鐘每毫克蛋白質在37℃下與底物反應30min后產生1mg苯酚的酶量。

溶菌酶活力測定參照Ellis的方法[19]。一個酶活力單位定義為：每分鐘每毫克蛋白質使吸光值變化0.001的酶量。

過氧化氫酶(CAT)活力測定參照Beer和Sizer的方法[20]。

超氧化物歧化酶(SOD)活力測定參照鄒國林的方法[21]。計算公式：

1個酶活力單位=[(鄰苯三酚自氧化率-每分鐘測定樣品OD值變化)/鄰苯三酚自氧化率×50%]×[(反應液總體積/樣品量)/樣品中蛋白質的含量]。

總抗氧化能力(T-AOC)測定ABTS法(總抗氧化能力檢測試劑盒，南京建成生物工程研究所)。

蛋白含量測定考馬斯亮藍法。以牛血清白蛋白為標準品，繪制標準曲線，根據標準曲線測得樣品的蛋白含量。

所有測定均采用3個重復。

1.4 統計分析

采用EXCEL 2003和SPSS 13.0軟件進行統計分析，數據采用平均值±標準誤(Means ± S.E.)的形式表示，顯著水平為P<0.05。當差異顯著時采用Duncan’s多重比較分析組間的差異顯著程度。

2結果

2.1 血液生理生化指標

大菱鲆幼魚的血液學指標見表2。飼料中不同糊精水平替代魚油后對大菱鲆幼魚血漿總氨基酸、總膽固醇(CL)和甘油三酯(TGs)的含量沒有顯著影響(P>0.05)，但顯著影響血漿葡萄糖和胰島素的含量以及谷草轉氨酶(AST)和谷丙轉氨酶(ALT)的活性(P<0.05)。其中，D4組大菱鲆幼魚的血漿葡萄糖含量顯著高于其余3組(P>0.05)。D4組大菱鲆幼魚的血漿胰島素含量最高，其次是D3組，D1和D2組胰島素含量最低(P<0.05)。D4組AST活性顯著高于其余3組(P<0.05)，但D1組ALT活性顯著高于其余3組(P<0.05)。

表2　飼料中不同含量糊精替代魚油對大菱鲆幼魚血液學指標的影響

注：表中數據以平均值±標準誤表示(n=3)，同列不同上標英文字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note:Values (mean ±S.E. of three replicates) in the same column not sharing a common superscript are significantly different (P<0.05).

①Diets；②Totalα-amino acids；③Glucose；④Insulin；⑤Total cholesterol；⑥Triacylglycerols；⑦Glutamic oxalacetic transaminase；⑧Glutamic-pyruvic transaminase

2.2 免疫學指標

大菱鲆幼魚的免疫學指標見表3。

飼料中不同糊精水平替代魚油后對大菱鲆幼魚血漿堿性磷酸酶(AKP)活性沒有顯著影響(P>0.05)，但顯著影響了血漿溶菌酶和抗氧化酶的活性(P<0.05)。D4組血漿溶菌酶活性顯著高于其余3組(P<0.05)；D4組血漿過氧化氫酶(CAT)活性顯著高于D1和D2組(P<0.05)，D3組血漿CAT活性與其余3組沒有顯著差異(P>0.05)；D4組血漿超氧化物歧化酶(SOD)活性顯著低于其余3組(P<0.05)；D1組血漿總抗氧化能力(T-AOC)顯著高于其余3組(P<0.05)。

飼料中不同糊精水平替代魚油后顯著影響肝臟免疫學指標(P<0.05)。D1組大菱鲆幼魚肝臟AKP活性最高，D2和D4組最低，D3組肝臟AKP活性與其余3組無顯著差異(P<0.05)；D4組大菱鲆幼魚肝臟溶菌酶活性最高，其次為D3組，D1組最低(P<0.05)，D2組與D1和D3組沒有顯著差異(P>0.05)；D3組大菱鲆幼魚肝臟的CAT和SOD活性顯著高于D4組(P<0.05)，D1和D2組CAT、SOD活性與其余兩組沒有顯著差異(P>0.05)；D4組肝臟T-AOC活性顯著低于其余3組(P<0.05)。

表3　飼料中不同含量糊精替代魚油對大菱鲆幼魚血漿及肝臟中免疫學指標的影響/U·mg-1

注：表中數據以平均值±標準誤表示(n=3)，同列不同上標英文字母表示差異顯著(P<0.05)。

Notes: Values (mean ±S.E. of three replicates) in the same column not sharing a common superscript are significantly different (P<0.05).

①Diets；②Alkaline phosphatase；③Lysozyme；④Catalase；⑤Superoxide dismutase；⑥Total antioxidant capacity

3討論

3.1 糊精替代魚油對大菱鲆血液學指標的影響

部分血漿參數的變化可以反映魚類對營養(yǎng)素代謝的改變。在本實驗條件下，大菱鲆血漿總氨基酸含量不受飼料的影響。Lee等[22]對牙鲆(Paralichthysolivaceus)的研究也發(fā)現，隨著飼料中糊精水平的增加，各組間牙鲆血漿氨基酸含量沒有顯著差異，說明飼料中一定量的糖替代脂肪不會對魚類的蛋白質代謝產生影響。

一般而言，魚體血糖水平隨著飼料中糖含量的增加而升高[23]。在本試驗條件下，僅當飼料中可溶性糖含量為28.27%時，血糖水平顯著升高。但對武昌魚(Megalobramaamblycephala)的研究得出了相反的結論，當飼料中糖替代脂肪，即飼料中糖的含量由19.30%升高到41.63%，同時脂肪的含量由11.89%降低至1.73%后，武昌魚的血糖含量先升高而后降低[10]。Li等[10]認為這可能是由兩方面的原因造成的。首先，武昌魚是草食性淡水魚類，具有較高的血糖調節(jié)能力，因此，飼料中的高糖水平沒有引起血糖含量的升高；其次，飼料中高含量的脂肪可能引起魚類的應激反應，從而導致血糖水平的升高。血糖能夠誘導硬骨魚類胰島素的釋放[24-25]。例如，當魚類攝食高糖飼料后，血漿胰島素水平顯著升高[25]，這主要是因為葡萄糖能夠引起魚類Brockmann小體分泌胰島素[23]。胰島素的釋放一方面有利于組織對血糖的吸收，從而能夠促使魚類較好地利用糖；另一方面，飼料中高含量的糖能持續(xù)提高胰島素敏感性，從而增加對糖的利用，提高魚類對糖的適應[25]。對歐洲鱸(Dicentrarchuslabrax)的研究表明，飼料的營養(yǎng)組成也顯著影響肝臟細胞對糖類的利用以及胰島素對糖類刺激的應答[26]。在本研究中，隨著飼料中糖含量的升高，胰島素水平也顯著上升。參照血糖水平的變化，說明血糖對胰島素的誘導具有一定的滯后性，從而在一定程度上降低了魚類對胰島素的利用效率。另外，對胰島素的分析表明，胰島素通過與細胞表面的胰島素受體結合而參與調節(jié)魚類和其它脊椎動物的攝食、生長、發(fā)育及中間代謝等各個方面。肉食性魚類對胰島素受體的親和力較低[27]，同時也說明了肉食性魚類對糖類利用的有限性。但對大鱗大麻哈魚的葡萄糖耐受試驗表明，血漿胰島素水平與葡萄糖攝入量沒有顯著關系[28]。許多研究也表明，葡萄糖誘導胰腺分泌胰島素的能力遠低于氨基酸和脂肪酸，Hemre等[29]對大西洋鱈(Gadusmorhua)的研究顯示，有氨基酸存在時，葡萄糖對胰島素分泌的刺激作用得到加強，因此推測魚類胰島素的主要作用可能是調控蛋白質代謝而不是糖代謝[23,29]。

本研究中，血漿甘油三酯和膽固醇水平并不受飼料中糖脂含量變化的影響，這與Enes等[30]對歐洲鱸的研究結果一致。齊野等[31]對寶石鱸(Scortumbarcoo)的研究結果表明，淀粉和糊精對血漿甘油三酯的影響較大，隨糖水平的升高而上升，但血漿總膽固醇含量卻不受飼料可消化糖水平的影響。對瓦氏黃顙魚(Pelteobagrusvachelli)的研究結果表明，血清中甘油三酯和總膽固醇的含量隨著飼料中糖水平的升高而降低，其中40%糖處理組顯著低于7%和24%糖處理組[32]。

谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶主要分布于機體肝和腎等組織細胞中，在糖、蛋白質和脂肪三大物質代謝過程中起著十分重要的作用，是硬骨魚類肝臟中重要的氨基轉移酶[33]。正常情況下，血漿中這2種酶的活性低且含量穩(wěn)定，當肝臟受到損傷時可導致大量轉氨酶釋放到血液中，引起血漿中這兩種酶濃度上升或活性增強[34-35]，這通常被認為是肝腎等組織受到損傷，魚體健康狀況受到影響的表現[36]。本試驗結果表明，飼料中高糖水平顯著升高谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶的活性。可見，高糖對大菱鲆肝臟產生了一定的損傷。但Li等[10]對武昌魚的研究結果表明，相對于高脂肪飼料組，高糖飼料組的魚體谷草轉氨酶和谷丙轉氨酶活性呈下降趨勢，說明武昌魚對高糖的耐受能力較高脂強。

3.2 糊精替代魚油對大菱鲆免疫學指標的影響

對哺乳類和魚類的研究結果均表明，飼料的營養(yǎng)組成能夠顯著影響動物的抗病力[37]，而免疫指標能準確地反映機體的健康狀況。通過對免疫指標的檢測可以間接考察大菱鲆對糖的耐受情況。非特異性免疫系統(吞噬細胞、中性粒細胞、巨噬細胞、溶菌酶等)被認為是病原防御的第一道屏障。Tokutake等[38]認為，溶菌酶是魚類非特異性免疫的第一道屏障，能夠防御外來細菌的入侵。在本研究中，當飼料中糖含量較高時，血漿溶菌酶活性顯著下降，但肝臟溶菌酶活性顯著上升。Vielma[39]等研究了糖類對白鮭(Coregonuslava-retus)應激和免疫參數的影響。結果表明，與低糖飼料組相比，高糖飼料組的溶菌酶活性較低；Lin等[6]對點帶石斑魚的研究發(fā)現，隨著飼料糖水平的升高，血漿溶菌酶活性下降。但目前尚無實質性的證據表明長期攝食高糖飼料會對虹鱒的溶菌酶產生影響[40]。

正常狀態(tài)下，機體能夠利用抗氧化防御機制，如抗氧化酶等抵抗細胞產生的活性氧(ROS)，從而緩解其對機體產生的氧化壓力。在本研究中，血漿和肝臟抗氧化酶活性隨著飼料中糖含量的升高而具有顯著變化，糖含量升高，過氧化氫酶和總抗氧化能力具有一定程度的下降。高糖飼料顯著降低了魚類的抗氧化酶活性，說明高糖應激對魚類產生了免疫抑制作用。超氧化物歧化酶是生物體內清除氧自由基的重要酶類，是活性氧防御系統中的主要成分，保護機體細胞免受自由基損傷[41]。超氧化酶歧化酶普遍存在于水產動物體內，正常情況下，魚體SOD酶可清除氧化代謝產物，當魚體處于應激狀態(tài)時，其氧化能力下降，過量的氧自由基與不飽和脂肪酸發(fā)生脂質過氧化，對魚體造成損傷[42]。對大菱鲆超氧化酶歧化酶的研究結果表明，飼料中適量的糖水平對血漿超氧化酶歧化酶活性沒有顯著影響，但過高的糖水平使超氧化酶歧化酶活性下降，提示高水平的糖可能對大菱鲆產生了一定的營養(yǎng)脅迫，使其清除自由基的能力減弱，可能會進一步影響大菱鲆的健康。

4結語

本研究結果表明，飼料中糊精替代魚油水平的升高顯著升高了大菱鲆血糖和血漿胰島素的含量，但對總氨基酸、總膽固醇和甘油三酯的含量沒有顯著影響。同時，飼料糊精替代魚油水平的升高顯著降低血漿溶菌酶、CAT、SOD和T-AOC的活性及MDA的含量，同時肝臟AKP、CAT和T-AOC等酶活性也顯著下降。這表明，飼料中不同的糊精替代魚油水平不僅能夠影響大菱鲆幼魚的糖脂代謝，同時對免疫反應也產生顯著影響。

參考文獻：

[1]Wilson R P. Utilization of dietary carbohydrate by fish [J]. Aquaculture, 1994, 124: 67-80.

[2]Garling D L J, Wilson R P. Effects of dietary carbohydrate to lipid ratios on growth and body composition of fingerling channel catfish[J]. Progressive Fish-Culturist, 1977, 39: 43-47.

[3]Takeuchi T, Satoh S, Watnabe T. Requirement ofTilapianiloticafor essential fatty acids[J]. Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries, 1983, 49: 977-982.

[4]Chou B S, Shiau S Y. Optimal dietary lipid level for growth of juvenile hybrid tilapia,Oreochromisniloticus×Oreochromisaureus[J]. Aquaculture, 1996, 143: 185-195.

[5]Castell J D, Sinnhuber R O, Lee D J, et al. Essential fatty acids in the diet of rainbow trout (Salmogaindneri), Physiological symptoms of EFA deficiency[J]. Journal of Nutrition, 1972, 102: 67-92.

[6]Lin Y H, Shiau S Y. Dietary lipid requirement of grouper,Epinephelusmalabaricus, and effects on immune responses [J]. Aquaculture, 2003, 225: 243-250.

[7]Lin Y H, Shiau S Y. Dietary vitamin E requirement of grouper,Epinephelusmalabaricus, at two lipid levels, and their effects on immune responses [J]. Aquaculture, 2005, 248: 235-244.

[8]Kumar V, Sahu N P, Pal A K, et al. Immunomodulation ofLabeorohitajuveniles due to dietary gelatinized and non-gelatinized starch [J]. Fish & Shellfish Immunology, 2007, 23: 341-353.

[9]Lim C, Yildirim-Aksoy M, Li M H, et al. Influence of dietary levels of lipid and vitamin E on growth and resistance of Nile tilapia toStreptococcusiniaechallenge [J]. Aquaculture, 2009, 298: 76-82.

[10]Li X F, Liu W B, Lu K L, et al. Dietary carbohydrate/lipid ratios affect stress, oxidative status and non-specific immune responses of fingerling blunt snout bream,Megalobramaamblycephala[J].Fish & Shellfish Immunology, 2012, 33: 316-323.

[11]Polakof S, Panserat S, Soengas J L, et al. Glucose metabolism in fish: a review [J]. Comparative Biochemistry and Physiology, part B, 2012, 182: 1015-1045.

[12]Nie Q, Miao H, Miao S, et al. Effects of dietary glucose and dextrin on activity and gene expression of glucokinase and fructose-1,6-bisphosphatase in liver of turbotScophthalmusmaximus[J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2015, 41(3): 819-832.

[13]苗淑彥, 苗慧君, 聶琴， 等. 飼料中不同種類的碳水化合物對大菱鲆生長性能和代謝反應的影響[J].水產學報, 2013, 37(6): 910-919.

Miao S Y, Miao H J, Nie Q, et al. Effects of different dietary carbohydrates on growth performance and metabolism response of juvenile turbotScophthalmusmaximus[J]. Journal of Fisheries of China, 2013, 37(6): 910-919.

[14]Hedge J E，Hofreiter B T．Carbohydrate Chemistry[M]． New York: Academic Press， 1962．

[15]Moore S. Amino acid analysis: aqueous dimethyl sulfoxide as solvent for the ninhydrin reaction [J]. Journal of Biological Chemistry, 1968, 243: 6281-6283.

[16]Plisetskaya E M, Dickhoff W W, Paquette T L, et al. The assay of salmon insulin by homologous radio-immunoassay[J]. Fish Physiology and Biochemistry, 1986, 1: 37-43.

[17]Trinder P. Determination of blood glucose using an oxidase-peroxidase system with a non-carcinogenic chromogen [J].Journal of Clinical Pathology, 1969, 22: 158-161.

[18]Pipe R K. Hydrolytic enzymes associated with the granular haemocytes of the marine musselMytilusedulis[J]. Histochemical Journal, 1990, 22: 595-603.

[19]Ellis A E. Lysozyme assays[J]. Techniques in Fish Immunology, 1990, 1： 101-103.

[20]Beers R F, Sizer O W. Spectrophotometric method for measuring the breakdown of hydrogen peroxide by catalase [J]. Journal of Biological Chemistry, 1952, 195:133-140.

[21]鄒國林, 桂興芬, 鐘曉凌, 等. 一種SOD的測定方法[J]. 生物化學和生物物理進展, 1986, 4: 71-73.

Zou G L, Gui X F, Zhong X L, et al. A method to analyze the activity of SOD [J]. Progress in Biochemistry and Biophysics, 1986, 4: 71-73.

[22]Lee S M, Kim K D, Lall S P. Utilization of glucose, maltose, dextrin and cellulose by juvenile flounder (Paralichthysolivaceus) [J]. Aquaculture, 2003, 221: 427-438.

[23]Hemre G I, Mommsen T P, Krogdahl ?. Carbohydrates in fish nutrition: effects on growth, glucose metabolism and hepatic enzymes [J]. Aquaculture Nutrition, 2002, 8: 175-194.

[24]Zhu H Y, Wang G J, Yu D G, et al. Changes in nitric oxide level and nitric oxide synthase and sensitivity to Vibrio parahaemolyticus in serum of white leg shrimp exposed to sudden changes in water temperature [J]. Journal of Dalian Fisheries University, 2006, 21(1): 46-50.

[25]Leung L Y, Woo Y S. Influence of dietary carbohydrate level on endocrine status and hepatic carbohydrate metabolism in the marine fishSparussarba[J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2012, 38: 543-554.

[26]Enes P,Sanchez-Gurmaches J, Navarro I, et al. Role of insulin and IGF-I on the regulation of glucose metabolism in European sea bass (Dicentrarchuslabrax) fed with different dietary carbohydrate levels [J]. Comparative Biochemistry and Physiology, 2010, 157A: 346-353.

[27]Párrizas M, Planas J, Plisetskaya E M, et al. Insulin receptor and its tyrosine kinase activity in skeletal muscle of carnivorous and omnivorous fish[J]. American Journal of Physiology, 1994, 266: 1944-1950.

[28]Mazur C N, Higgs D A, Plisetskaya E, et al. Utilization of dietary starch and glucose tolerance in juvenile Chinook salmon (Oncorhynchustshawytscha) of different strains in seawater [J]. Fish Physiology and Biochemistry, 1992, 10: 303-313.

[29]Hemre G I, Lie ?, Sundby A. Dietary carbohydrate utilisation in cod (Gadusmorhua): metabolic responses to feeding and fasting[J]. Fish Physiology and Biochemistry, 1993, 10(6): 455-463.

[30]Enes P, Panserat S, Kaushik S, et al. Rapid metabolic adaptation in European sea bass (Dicentrarchuslabrax) juveniles fed different carbohydrate sources after heat shock stress [J]. Comparative Biochemistry and Physiology, 2006, 145A: 73-81.

[31]齊野. 寶石鱸對飼料可消化糖利用的初步研究[D].天津: 天津農學院, 2010.

Qi Y. Preliminary study on the utilization of dietary digestible carbohydrate byScortumbarcoo[D]. Tianjin: Tianjin Agricultural University， 2010.

[32]楊瑩, 陳立僑, 李二超， 等.飼料糖水平對瓦氏黃顙魚幼魚生長、體成分和血清生化指標的影響研究[J].復旦學報(自然科學版), 2011(5): 625-631.

Yang Y, Chen L Q, Li E C, et al. Effect of dietary carbohydrate level on growth, body composition and biochemical indices in serum of Pelteobagrus vachelli [J]. Journal of Fudan University (Natural Science), 2011(5): 625-631.

[33]Cowey C B, Walton M J. Intermediary metabolism. In: Halver JE (ed) Fish nutrition [M]. San Diego：Academic Press,1989： 260-329.

[34]鄭永華, 蒲富永. 汞對鯉鯽魚組織轉氨酶活性的影響[J].西南農業(yè)大學學報, 1997, 19(1): 41-45.

Zheng Y H, Pu F Y. Effect of mercury on transaminase activities of tissues inCparpio&Cauratus[J]. Journal of Southwest Agricultural University, 1997, 19(1): 41-45.

[35]沈同, 王鏡巖. 生物化學(下冊) [M]. 北京: 高等教育出版社, 1999.

Shen T, Wang J Y. Biochemistry [M]. Beijing: Higher Education Press, 1999.

[36]高露姣, 施兆鴻, 艾春香. 不同脂肪源對施氏鱘幼魚血清生化指標的影響[J].海洋漁業(yè), 2005, 27(40): 319-323.

Gao L J, Shi Z H, Ai C X. Effect of dietary lipid sources on the serum biochemical indices ofAcipenserschrenckiijuvenile [J]. Marine Fisheries, 2005, 27(40): 319-323.

[37]Lygren B, Hemre G I. Influence of dietary carbohydrate on antioxidant enzyme activities in liver of Atlantic salmon (SalmosalarL.) [J]. Aquaculture International, 2001, 9: 421-427.

[38]Tokutake K, Mochizuki A, Matsumiya M. Seasonal variation of lysozyme activity in short-necked clam [J]. Nippon Suisan Gakkaishi, 1992, 58: 1103-1106.

[39]Vielma J, Koskelaa J, Ruohonenb K, et al. Optimal diet composition for European whitefish (Coregonuslavaretus): carbohydrate stress and immune parameter responses [J]. Aquaculture, 2003, 225: 3-16.

[40]Page G I, Hayworth K M, Wade R R, et al. Non-specific immunity parameters and the formation of advanced glycosylation end-products (AGE) in rainbow trout,Oncorhynchusmykiss(Walbaum), fed high levels of dietary carbohydrates [J]. Aquaculture Research, 1999, 30: 287-297.

[41]Mourente G, Good J E， Thompson K D. Effects of partial substitution of dietary fish oil with blends of vegetable oils, on blood leucocyte fatty acid compositions, immune function and histology in European sea bass (DicentrarchuslabraxL.) [J]. British Journal of Nutrition， 2007, 98(4):770-779.

[42]葉繼丹, 韓友文, 趙吉偉， 等. 喹乙醇對鯉肝胰抗氧化酶系統的影響[J]. 水產學報, 2004, 28(3): 231-235.

Ye J D, Han Y W, Zhao J W， et al. Effects of dietary olaquindox on antioxidant enzymes system in hepatopancreas ofCyprinuscarpio[J]. Journal of Fisheries of China, 2004, 28(3): 231-235.

責任編輯朱寶象

Influence of Replacement of Dietary Fish Oil by Dextrin on Metabolism and Immune Response of Juvenile Turbot (Scophthalmusmaximus)

MIAO Shu-Yan1, 2, HAN Dong-Dong1, NIE Qin1, MIAO Hui-Jun1, ZHANG Wen-Bing1, MAI Kang-Sen1

(1.The Key Laboratory of Aquaculture Nutrition and Feeds of Ministry of Agriculture, Ocean University of China, Qingdao 266003, China; 2. College of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China)

Abstract:A 9-week feeding trial was conducted to determine the influence of replacement of dietary fish oil by dextrin on the haematological and immunological parameters of juvenile turbot (Scophthalmus maximus) (initial body weight: (8.32 ± 0.06)g). Each of the four isonitrogenous and isoenergetic diets (D1, D2 through D4) containing graded levels of soluble carbohydrates (1.93%, 5.80%, 15.98% and 28.27%) and lipids (16.48%, 12.82%, 10.78% and 6.64%) was fed to turbot to apparent satiation in a flow-through water system. Results showed that dietary carbohydrate content significantly increased the plasma glucose and insulin concentration in turbot (P<0.05). The activity of glutamic oxalacetic transaminase (AST) in serum of fish fed diet D4 was significantly higher than that of other three groups (P<0.05). Meanwhile, the activity of glutamic-pyruvic transaminase (ALT) in serum of fish fed diet D1 was significantly higher than that in other three groups (P<0.05). However, dietary carbohydrate content did not significantly affect plasma total amino acids, total cholesterol (CL) and triglycerides (TGs) concentrations (P>0.05). With the increasing dietary carbohydrate contents, the activity of lysozyme, catalase (CAT), superoxide dismutase (SOD) and total antioxidant capacity (T-AOC) in plasma significantly decreased (P<0.05). The same thing was true in the activity of alkaline phosphatase (AKP), CAT and T-AOC in liver (P<0.05), but not lysozyme (P<0.05). The results of the haematological parameters suggested that the replacement of dietary fish oil by dextrin did not influence the protein metabolism of turbot. Glucose induced insulin secretion in the pancreas was much lower than that of amino acids and fatty acids. Meanwhile, the activities of ALT and AST in serum significantly increased in D4 treatment. It was suggested that high dietary carbohydrate content would have certain damage to the liver of turbot. This effect did not occurred in the study of blunt-snout bream. In regard to the immunological parameters, high dietary dextrin content significantly decreased the activity of lysozyme, CAT, SOD and the T-AOC in plasma. It was suggested that high dietary dextrin content stressed the metabolism of turbot. It would weaken its ability to scavenge free radicals. This may further affect the health of turbot.With the isonitrogenous and isoenergetic design, the results of present study indicated that different dietary dextrin contents not only affected the glucose and lipid metabolisms, but also the immunity of turbot.

Key words:turbot; carbohydrate; dextrin; fish oil; metabolism; immune

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb. 20150101

中圖法分類號：S963.71

文獻標志碼：A

文章編號：1672-5174(2016)04-021-07

作者簡介：苗淑彥(1978-)，女，博士生。研究方向：水生動物營養(yǎng)與飼料學**通訊作者： E-mail：wzhang@ouc.edu.cn

收稿日期：2015-04-22；

修訂日期：2015-09-09

*基金項目：國家重點基礎研究發(fā)展計劃項目(2014CB138600)資助

Supported by the National Basic Research Program (2014CB138600)