陶文雅,王晨,徐韋(中國人民解放軍第102醫(yī)院,江蘇常州213003)

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甲狀腺乳頭狀癌組織中MMP-2、MT1-MMP的表達變化及意義

陶文雅,王晨,徐韋(中國人民解放軍第102醫(yī)院,江蘇常州213003)

摘要：目的觀察基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)在甲狀腺乳頭狀癌(PTC)組織中的表達變化，并探討其意義。方法 采用免疫組化法對176例PTC患者的癌及癌旁組織標本中MMP-2和MT1-MMP進行檢測，觀察其在PTC中的表達并分析其與臨床病理參數(shù)的相關性。結果MMP-2在甲狀腺乳頭狀癌及癌旁組織中的陽性表達率分別為67.04%(118/176)和13.6%(24/176)，二者比較，P<0.01；MT1-MMP在甲狀腺乳頭狀癌及癌旁組織中的陽性表達率分別為61.93%(109/176)和10.8%(19/176)，二者比較，P<0.01。MT1-MMP在PTC組織中的表達與淋巴結轉(zhuǎn)移相關(P<0.05)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無相關性(P均>0.05)；MMP-2在PTC組織中的表達與包膜浸潤和淋巴結轉(zhuǎn)移相關(P均<0.05)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無相關性(P均>0.05)。MMP-2在PTC中的表達與MT1-MMP呈正相關(r=0.305，P<0.01)。結論 MMP-2與MT1-MMP在PTC組織中的陽性表達率均升高，在腫瘤發(fā)展中有協(xié)同作用,且與癌灶包膜浸潤及淋巴結轉(zhuǎn)移相關。

關鍵詞：甲狀腺乳頭狀癌；基質(zhì)金屬蛋白酶；細胞浸潤；淋巴結轉(zhuǎn)移

甲狀腺癌乳頭狀癌(PTC)多見于年輕女性或兒童，惡性程度較低[1]。甲狀腺癌生長較緩慢，可局限于甲狀腺內(nèi)多年，但約50%的患者可出現(xiàn)癌細胞經(jīng)腺內(nèi)淋巴管擴散至腺體的其他部位及局部淋巴結，引起預后不佳[2～4]。研究[5，6]表明，惡性腫瘤出現(xiàn)轉(zhuǎn)移和侵襲的先決條件在于突破細胞基底膜及間質(zhì)組成的一層組織學屏障，而基質(zhì)金屬蛋白酶家族(MMPs)則可通過降解這層屏障中的成分使這一層組織學屏障被破壞及誘導免疫耐受等機制，為癌灶轉(zhuǎn)移及侵襲提供條件。作為MMPs家族的一員，MMP-2可通過誘導新生血管形成，降解細胞外基質(zhì)等作用，在肺癌、前列腺癌、乳腺癌等進展遷移中發(fā)揮作用[7～9]。膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1(MT1-MMP)是MMPs中的一員，可通過將多種細胞外基質(zhì)成分降解、促進新生血管生成等機制來影響腫癌細胞的浸潤、遷移、凋亡等過程。研究[10]顯示，MMP-2與甲狀腺乳頭狀癌的遷移、浸潤相關。Deryugina等[11]研究表明，MMP-2與MT1-MMP在腫瘤組織中的表達存在相關性。 2009年2月～2015年8月,我們檢測了176例PTC患者癌及癌旁組織中MMP-2與MT1-MMP表達，分析其與臨床病理參數(shù)的關系。

1資料與方法

1.1臨床資料選擇2009～2015年于本院住院行手術治療的176例PTC患者的術后甲狀腺癌組織標本(PTC組)，所有標本經(jīng)病理檢查確診。收集癌旁2 cm組織(癌旁組)，均最后確定無腫瘤細胞存在?；颊吣?5例、女121例，年齡18～69(42.7±3.2)歲。臨床分期：Ⅰ～Ⅱ期130例，Ⅲ～Ⅳ期46例；瘤灶最大徑>2 cm者63例，<2 cm者113例；淋巴結轉(zhuǎn)移82例。

1.2癌及癌旁組織中MT1-MMP和MMP-2表達檢測采用免疫組化SP法。10%甲醛溶液固定兩組標本后予石蠟包埋及連續(xù)切片，4 μm厚。切片脫蠟至水后行高壓熱修復。3%H2O2溶液將過氧化物酶阻斷，將鼠抗人MMP-2單抗(1∶100稀釋)與MT1-MMP多抗(1∶100稀釋)加入并進行反應，4 ℃過夜，磷酸鹽緩沖液沖洗，加入生物素化二抗液，放置10 min(室溫)，滴加SABC液，再放置10 min(37 ℃)，磷酸鹽緩沖液沖洗，DAB顯色，蒸餾水洗后予蘇木精復染。陰性對照采用磷酸鹽緩沖液替代一抗，購自研生生化公司(上海)的陽性切片(已知)作為陽性對照。

1.3結果判斷標準MT1-MMP與MMP-2在免疫組化實驗中陽性表達部位均為胞質(zhì)，陽性強度表現(xiàn)為淺黃色～棕褐色。按照半定量積分法[12]，聯(lián)合陽性細胞染色強度和陽性細胞百分率進行結果判定。陽性物質(zhì)染色強度評分標準：胞質(zhì)染色呈棕褐色為3分，胞質(zhì)染色呈棕黃色為2分，胞質(zhì)染色呈淺黃色為1分，胞質(zhì)無著色為0分；陽性細胞百分率判定評分標準：0分：染色細胞無或低于5%；1分：染色細胞為5%～25%；2分：染色細胞為25%～50%；3分：染色細胞超過50%。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件。率的比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Spearman檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1兩組MMP-2、MT1-MMP表達比較 MMP-2在PTC組和癌旁組陽性表達率分別為67.04%(118/176)和13.6%(24/176)，兩組比較，P<0.01(χ2=104.302)；MT1-MMP在PTC組和癌旁組陽性表達率分別為61.93%(109/176)和10.8%(19/176)，兩組比較，P<0.01(χ2=99.420)。

2.2MMP-2及MT1-MMP表達與PTC臨床病理參數(shù)的關系MMP-2在PTC組織中的表達與包膜浸潤及淋巴結轉(zhuǎn)移有關(P均<0.05)，與性別、年齡、癌灶大小、臨床分期無關(P均>0.05)。MT1-MMP在PTC組織中的表達與腫瘤組織的淋巴結轉(zhuǎn)移有關(P<0.05)，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無關(P均>0.05)，見表1。

表1　MMP-2、MT1-MMP表達與PTC臨床病理參數(shù)的關系

2.3PTC中MMP-2與MT1-MMP表達的關系PTC中MMP-2與MT1-MMP表達呈正相關(r=0.305，P<0.01)。

3討論

腫瘤遷移和浸潤的機制復雜，其中重要的一步即細胞外基質(zhì)屏障的破壞[13]。細胞外基質(zhì)成分包括纖維黏連蛋白、間質(zhì)膠原、彈性蛋白等,對與其接觸的癌基因表達及微環(huán)境的維持發(fā)揮重要作用,故破壞細胞外基質(zhì)更新代謝平衡失調(diào)的任何物質(zhì)均可能影響腫瘤浸潤、遷移等過程[8]，而MMPs則可通過降解各種細胞外基質(zhì)的成分影響腫瘤浸潤與遷移等[6，11]。研究[14,15]表明，肺癌、胰腺癌、結腸癌等多種惡性腫瘤的遷移和浸潤均與MMPs活性升高有關。研究[16]表明，MMP-2可降解Ⅴ型、Ⅳ型膠原等細胞外基質(zhì)成分，破壞與腫瘤遷移、浸潤相關的組織屏障，促進癌灶的遷移及生長。

Saffar等[17]通過分析并檢測甲狀腺乳頭狀癌患者標本MMP-2的表達后發(fā)現(xiàn)，MMP-2在PTC中表達和其包膜浸潤存在一定關聯(lián)。Wu等[18]發(fā)現(xiàn)，MMP-2在PTC中表達高于良性結節(jié)，而無淋巴結轉(zhuǎn)移者癌組織中MMP-2表達明顯低于淋巴結轉(zhuǎn)移者。本研究中，MMP-2在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織。進一步研究發(fā)現(xiàn)，MMP-2在PTC組織中的表達與包膜浸潤及淋巴結轉(zhuǎn)移相關，與性別、年齡、臨床分期、癌灶大小無關。此與吳立剛等[19]的結論一致， MMP-2可能在PTC癌灶包膜浸潤和淋巴結轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。

MT1-MMP為一種膠原酶,活化后可將層黏連蛋白5和1、Ⅰ型及Ⅲ型膠原蛋白、玻璃黏連蛋白等組成細胞外基質(zhì)的多種大分子降解，與此同時還能通過激活MMP-2從而達到對細胞外基質(zhì)成分的降解作用[8,16]。研究[20]表明, MT1-MMP在黑色素瘤、肝癌、肺癌、皮膚癌等惡性腫瘤中高表達,并與癌細胞浸潤、遷移及惡性程度等存在一定關系。Ying-Chi等[21]發(fā)現(xiàn),MT1-MMP高表達于肝細胞癌、癌旁組織及肝周靜脈中。Yao等[22]研究表明，MT1-MMP在乳腺癌中的高表達通過對血管內(nèi)皮生長因子-C的上調(diào)促進癌組織的血管和淋巴管形成。

本研究中，MT1-MMP在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁組織；MT1-MMP在PTC組織中的表達與腫瘤組織的淋巴結轉(zhuǎn)移相關，MMP-2表達與MT1-MMP呈正相關。此與劉章毅等[23]研究結果一致。進一步提示MMP-2與MT1-MMP對PTC遷移、浸潤過程有協(xié)同作用。

綜上所述，MMP-2與MT1-MMP在PTC中的表達與癌灶包膜浸潤及淋巴結轉(zhuǎn)移相關，二者在腫瘤發(fā)展中有協(xié)同作用。

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本刊2016年第56卷第5期“誘導多能干細胞的制備及其應用進展”一文的通信作者為“趙晶”。特此聲明。

本刊編輯部

(收稿日期：2015-12-20)

中圖分類號：R736.1

文獻標志碼：B

文章編號：1002-266X(2016)13-0068-03

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2016.13.027