董祺，高志惠

(1.山東老來(lái)壽生物集團(tuán)股份有限公司，山東 濟(jì)南 250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355)

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【藥理與毒理】

蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180小鼠抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究

董祺1，高志惠2*

(1.山東老來(lái)壽生物集團(tuán)股份有限公司，山東 濟(jì)南 250014；2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東 濟(jì)南 250355)

摘要：采用小鼠腋下S180實(shí)體瘤模型，通過(guò)檢測(cè)抑瘤率、免疫器官重量以及血清NSE、CEA、CA72-4等指標(biāo)，全面評(píng)價(jià)蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180小鼠的抗腫瘤作用。結(jié)果表明，蛹蟲草子實(shí)體膠囊中、高劑量能明顯抑制S180實(shí)體瘤的生長(zhǎng)(P<0.05)；高、中、低劑量均可延長(zhǎng)S180腹水瘤小鼠的生存時(shí)間；高、中、低劑量組均能降低血清NSE的值；中、低劑量組均能增加血清CEA的值；高劑量組能增加血清CA72-4值，而中、低劑量則減少血清CA72-4值。研究認(rèn)為，蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180小鼠具有一定的抗腫瘤作用。

關(guān)鍵詞：蛹蟲草子實(shí)體膠囊；S180肉瘤小鼠；抗腫瘤

蛹蟲草Cordycepsmilitaris(L.ex.Fr)Link也稱北蟲草，與冬蟲夏草同為蟲草屬，是一種具有較高醫(yī)用價(jià)值的藥用真菌。臨床報(bào)道蛹蟲草對(duì)胃癌、肝癌以及鼻咽癌等多種癌癥具有一定的治療作用[1-2]，但有關(guān)蛹蟲草抗腫瘤的實(shí)驗(yàn)研究目前未見報(bào)道。為了驗(yàn)證“老來(lái)壽牌蛹蟲草子實(shí)體膠囊”的抗癌功能，并模擬子實(shí)體膠囊在臨床上出現(xiàn)的一些問(wèn)題，探討藥物的治療機(jī)制，我們進(jìn)行了子實(shí)體膠囊對(duì)S180小鼠抗腫瘤作用的實(shí)驗(yàn)研究，為下一步的市場(chǎng)開發(fā)和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1材料

1.1藥品與試劑

老來(lái)壽牌蛹蟲草子實(shí)體膠囊(濟(jì)南老來(lái)壽生物股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20140630)；

復(fù)方環(huán)磷酰胺片(天津A制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：20140301)；神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：E11136914)；癌胚抗原(CEA)試劑盒(武漢華美生物工程有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：C16136913)；糖鏈抗原72-4(CA72-4)試劑盒(上海西唐生物科技有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：1210251)

1.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與瘤株

昆明種小鼠，雌雄各半，300只，體重均為18～22 g，購(gòu)自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證號(hào)：魯動(dòng)質(zhì)scxk(魯)20130009。S180肉瘤腹水型荷瘤小鼠，由山東省醫(yī)科院藥物所提供。

1.3主要儀器

GB303基本型電子天平(Mettler-Totado公司)；恒溫水浴(上海醫(yī)用電子設(shè)備廠生產(chǎn))；DDL-5型離心機(jī)(上海安亭科技儀器廠生產(chǎn))。

2方法

2.1劑量配制依據(jù)

蛹蟲草每天每次用量為0.35 g，共4次。設(shè)計(jì)給小鼠灌胃劑量為按體表面積比值折算給藥劑量，高劑量給藥0.364 g/kg、中劑量給藥0.182 g/kg、低劑量給藥為0.091 g/kg。

復(fù)方環(huán)磷酰胺片：按日用量200 mg(環(huán)磷酰胺)計(jì)，按體表面積比值折算給藥劑量為等效劑量，小鼠給藥量為0.026 g/kg。

2.2裸鼠移植S180模型建立及動(dòng)物分組

取S180肉瘤腹水型荷瘤小鼠[3-8]，消毒腹部皮膚，用5 mL一次性無(wú)菌注射器抽取腹腔積液，所抽腹水放入無(wú)菌三角燒瓶?jī)?nèi)，用0.9%生理鹽水調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107mL-1，0.5 h內(nèi)每只小鼠右側(cè)腋窩皮下接種腫瘤細(xì)胞懸液0. 2 mL。24 h后稱重隨機(jī)分為5組(每組10只)：模型對(duì)照組、蛹蟲草高、中、低劑量組，復(fù)方環(huán)磷酰胺片組，分別給予水，蛹蟲草子實(shí)體膠囊(0.364、0.182、0.091 g/kg)以及環(huán)磷酰胺26 mg/kg，灌胃給藥，0.04 mL/g，每天1次，連續(xù)14 d。

2.4指標(biāo)檢測(cè)和結(jié)果評(píng)價(jià)

觀察動(dòng)物至第14天，最后一天灌胃后取血，3 000 r/min分離血清，采用酶聯(lián)反應(yīng)試劑盒檢測(cè)血清NSE、CEA、CA72-4 的值。取血后后采用頸椎脫臼法處死小鼠，稱量并記錄體重，剖取腫瘤組織，稱重、計(jì)算抑瘤率[9-16]。剖取胸腺組織，稱量并記錄其重量。

抑瘤率 =(對(duì)照組瘤重-給藥組瘤重)/對(duì)照組瘤重×100%。

2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3結(jié)果

3.1蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180實(shí)體瘤小鼠腫瘤重量和胸腺的影響

由表1可知蛹蟲草子實(shí)體膠囊高、中、低劑量組均能明顯抑制 S180實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，其中，與模型對(duì)照組相比，蛹蟲草子實(shí)體膠囊高、中劑量組小鼠的瘤體重量有極其顯著性差異(P<0.001)；蛹蟲草子實(shí)體膠囊低劑量組小鼠的瘤體重量有非常顯著性差異(P<0. 01)。從瘤重抑制率分析，3個(gè)劑量組有明顯的劑量依賴性，說(shuō)明蛹蟲草子實(shí)體膠囊高、中劑量對(duì)于S180肉瘤小鼠抑制腫瘤的效果優(yōu)于復(fù)方環(huán)磷酰胺片(見表1～2)。

由表2可知蛹蟲草子實(shí)體膠囊高、中、低劑量組均能增加S180小鼠的胸腺重量，提高腫瘤小鼠的免疫能力。從胸腺重量值分析，蛹蟲草子實(shí)體膠囊高劑量組大于蛹蟲草子實(shí)體膠囊中劑量組大于復(fù)方環(huán)磷酰胺片組等于蛹蟲草子實(shí)體膠囊低劑量組大于模型對(duì)照組。

表1　蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180肉瘤小鼠腫瘤重量的影響±s，n=10)

注：**P<0.01，***P<0.001，vs.模型組。

表2　蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180肉瘤小鼠胸腺重量的影響±s，n=10)

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型組。

3.2蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180實(shí)體瘤小鼠的血清NSE的影響

由表3可知，蛹蟲草子實(shí)體膠囊高、中、低劑量組均能降低血清NSE的值。復(fù)方環(huán)磷酰胺片組能顯著降低NSE值，與模型組比較具有非常顯著性差異(P<0.01)高劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，中低劑量組與模型組比較均能降低NSE值(P<0.05)，3個(gè)劑量組有明顯的劑量依賴性。

表3　蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180肉瘤小鼠血清NSE的影響±s，n=8)

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型組。

3.3蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180實(shí)體瘤小鼠的血清CEA 的影響

由表4可知，蛹蟲草子實(shí)體膠囊中、低劑量組均能增加血清CEA的值。復(fù)方環(huán)磷酰胺片組能明顯提高小鼠血清CEA值，與模型組比較具有非常顯著性差異(P<0.01)，高、中劑量組也能增加CEA值，與模型組比較具有非常顯著性差異(P<0.01或P<0.05)，但效果差于復(fù)方環(huán)磷酰胺片組，低劑量組與模型組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)，3個(gè)劑量組有明顯的劑量依賴性。

表4　蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180肉瘤小鼠CEA的影響±s，n=8)

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型組。

3.4蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180實(shí)體瘤小鼠的血清CA72-4 的影響

表5　蛹蟲草子實(shí)體膠囊對(duì)S180肉瘤小鼠CA72-4的影響

注：*P<0.05，**P<0.01，vs.模型組。

由表5可知，蛹蟲草子實(shí)體膠囊高劑量組能增加血清CA72-4值,與模型組比較具有顯著性差異(P<0.05)，而中、低劑量則減少血清CA72-4值。從數(shù)值上分析，復(fù)方環(huán)磷酰胺片組大于蛹蟲草子實(shí)體膠囊高劑量組大于模型對(duì)照組和蛹蟲草子實(shí)體膠囊中劑量組大于蛹蟲草子實(shí)體膠囊低劑量組。

4討論

目前腫瘤的主要治療方法為化學(xué)治療、手術(shù)和放射治療，但是這些方法副作用大、價(jià)格昂貴，效果也不十分理想，極大地限制了其使用范圍。傳統(tǒng)中醫(yī)認(rèn)為腫瘤是“積之始生，得寒乃生”及“內(nèi)傷于憂怒”，即外感和情志所傷是積聚的病因，但發(fā)病與否決定于人之正氣。

中醫(yī)通常采用扶正固本、活血化瘀和清熱解毒法發(fā)揮抑瘤作用，尤其在調(diào)整機(jī)體功能、增強(qiáng)機(jī)體免疫力方面有著獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。蛹蟲草為蟲草屬的模式種，含有蟲草素、蟲草多糖、腺苷和氨基酸以及微量元素等，其獨(dú)特的藥理作用已日益引起藥學(xué)界的高度重視。由于蛹蟲草具有以上諸多優(yōu)點(diǎn)，成為蟲草屬中藥用蟲草菌中的佼佼者，目前是天然蟲草的最佳代替品。本實(shí)驗(yàn)采用裸鼠移植S180模型，發(fā)現(xiàn)其能抑制 S180實(shí)體瘤的生長(zhǎng)，非常適合開發(fā)成抗腫瘤藥物。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，小樣本動(dòng)物血清檢測(cè)時(shí)，蛹蟲草子實(shí)體膠囊能降低血清NSE、CA72-4、CEA的值，其規(guī)律性有待進(jìn)一步研究。

NSE是神經(jīng)元和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞所特有的一種酸性蛋白酶，是小細(xì)胞肺癌最敏感最特異的腫瘤標(biāo)志物；CA72-4通過(guò)乳腺癌肝轉(zhuǎn)移灶的癌細(xì)胞膜免疫所制備，也是胃腸道和卵巢癌的腫瘤標(biāo)志。蛹蟲草子實(shí)體膠囊能有效降低NSE和CA72-4數(shù)值，從分子生物學(xué)方面顯示了其抑制腫瘤的能力。下一步，課題組需繼續(xù)進(jìn)行大樣本動(dòng)物檢測(cè)，從而建立蛹蟲草子實(shí)體膠囊與血清NSE、CEA之間的關(guān)聯(lián)性，為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Experiments of antitumor effect ofCordycepsmilitariscapsules on S180mouselet

DONG Qi1,GAO Zhi-hui2*

(1.Shandong Laolaishou Biology Group Co. Ltd., Jinan 250014, China;2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China)

Abstract∶We employ S180solid tumor model at the armpit of mouselet to comprehensively evaluate antitumor effect of Cordyceps militaris capsules on S180mouselet through the test for such parameters as tumor inhibition rate, immune organ weight and serum NSE, CEA and CA72-4. Results show that medium and high dosage Cordyceps military capsule can significantly inhibit the growth of S180solid tumor (P<0.05). High, medium and low dosage Cordyceps military capsule can all extend survival time of S180ascites sarcoma mouselet. High, medium and low dosage Cordyceps military capsule can all reduce the value of serum neuron specific enolase (NSE). Medium and low dosage Cordyceps military capsule can increase the value of serum CEA. High dosage Cordyceps military capsule can increase the value of serum CA72-4, but medium and low dosage Cordyceps military capsule can reduce the value of serum CA72-4. These experiments show that Cordyceps militaris capsule has certain antitumor effect on S180mouselet.

Key words∶Cordyceps militaris capsules; S180mouselet; antitumor

中圖分類號(hào)：R965.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1002-4026(2016)02-0025-05

作者簡(jiǎn)介：董祺(1973-)，男，中藥師，研究方向?yàn)橹兴幮滤幯芯?。Tel：0531-87165709，Email：13361009188@189.cn；150271091@qq.com*通訊作者，高志惠(1990-)，女，碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幩幚?。Tel：0531-82949847，Email：gaozhihui8800@163.com

基金項(xiàng)目：山東省國(guó)際科技合作計(jì)劃(2012GHZ21903)；山東省自然科學(xué)基金(ZR2015HM061)；山東省科技發(fā)展計(jì)劃(2014GSF118026)；

收稿日期：2015-12-23

DOI:10.3976/j.issn.1002-4026.2016.02.006