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酶解法提取大高良姜多糖工藝優(yōu)化及抗氧化活性分析

2016-05-30 17:33劉源張孝琴王譯偉楊剛
關(guān)鍵詞:抗氧化活性

劉源 張孝琴 王譯偉 楊剛

摘要:【目的】?jī)?yōu)化酶解法提取大高良姜多糖工藝,并分析其抗氧化活性,為大高良姜多糖的有效利用提供技術(shù)支持?!痉椒ā恳远嗵翘崛÷蕿樵u(píng)價(jià)指標(biāo),在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用Plackett-Burman(PB)試驗(yàn)法對(duì)影響大高良姜多糖提取率的5個(gè)因素進(jìn)行篩選;根據(jù)PB試驗(yàn)結(jié)果,選取3個(gè)主要影響因素,通過(guò)Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)化,確定最佳工藝條件;同時(shí)測(cè)定大高良姜多糖對(duì)DPPH和ABTS自由基的清除率?!窘Y(jié)果】酶解法提取大高良姜多糖最佳工藝條件:料液比1∶24、pH 6.0、酶解時(shí)間50.5 min、酶解溫度44 ℃、酶用量2%,在此條件下多糖提取率為13.53%。與傳統(tǒng)熱水浸提法比較,酶解法提取時(shí)間縮短72.0%,提取率提高24.1%。大高良姜多糖對(duì)DPPH和ABTS自由基均有較強(qiáng)的清除能力,其半數(shù)有效質(zhì)量濃度(IC50)分別為2.21 mg/mL和2.15 g/mL。【結(jié)論】響應(yīng)面試驗(yàn)?zāi)P湍茌^好優(yōu)化酶解法提取大高良姜多糖工藝,優(yōu)化后的工藝具有操作簡(jiǎn)單、省時(shí)高效、無(wú)毒環(huán)保等優(yōu)點(diǎn),提取得到的多糖有較強(qiáng)的抗氧化能力,可為后續(xù)開(kāi)發(fā)利用大高良姜提供技術(shù)支持。

關(guān)鍵詞: 大高良姜多糖;酶解法;Plackett-Burman試驗(yàn)法;Box-Behnken響應(yīng)面法;抗氧化活性

中圖分類號(hào): R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A 文章編號(hào):2095-1191(2016)08-1376-07

Abstract:【Objective】The extraction process of polysaccharide from Alpinia galanga Willd. by enzymolysis method was optimized, in order to provide technical support for effectively using polysaccharide from A. galanga. 【Method】With extraction rate of polysaccharides as index, the five factors affecting extraction rate of polysaccharides from A. galanga were screened by Plackett-Burman method on the basis of single factor experiment. According to the results of Plackett-Burman test, three main influencing factors were selected. Then the extraction process was optimized by by using the Box-Behnken response surface method, so as to determine optimum process conditions. Meanwhile, the scavenging rate of polysaccharide from A. galangal to DPPH free radical and ABTS free radical was determined. 【Result】The optimum process conditions of extracting polysaccharides were as follows: solid-liquid ratio of 1∶24, pH of 6.0, enzymolysis time of 50.5 min, enzymolysis temperature of 44 ℃, enzyme dosage of 2%. Under the above optimum conditions, the extraction rate of polysaccharide was 13.53%. Compared with traditional hot-water extraction method, the enzymolysis method took shorter time, so the extraction time was shortened by 72.0%, but the extraction rate was increased by 24.1%. Furthermore, polysaccharide from A. galanga had strong ability to scavenge DPPH and ABTS free radicals, and the half effective mass concentration(IC50) was 2.21 mg/mL and 2.15 g/mL, respectively. 【Conclusion】The response surface experimental model can optimize extraction process of polysaccharide from A. galangal, the enzymatic method can improve the extraction rate of polysaccharides. The extraction process has the advantages of simple operation, time saving, high efficiency, no toxicity and environmental protection, etc., and extracted polysaccharide has more stronger antioxidant activity, therefore this process can provide scientific basis for development of A. galangal in future.

Key words: Alpinia galangal Willd. polysaccharide; enzymolysis method; Plackett-Burman test; Box-Behnken response surface method; antioxidant activity

0 引言

【研究意義】大高良姜又名大良姜、良姜、山姜,為姜科山姜屬植物大高良姜[Alpinia galanga(L.) Willd.]的根莖,是《中國(guó)藥典》收錄的藥用植物,果實(shí)入藥稱為紅豆蔻。根莖粗壯、圓形、有節(jié),棕紅色并略有辛辣味,能溫胃、散寒、行氣止痛(趙志禮等,2001),常用作調(diào)經(jīng)劑、催欲劑、墮胎藥、驅(qū)風(fēng)劑、退熱劑和抗炎藥等,也可用于治療支氣管炎、心臟疾病、慢性腸炎、腎結(jié)石、糖尿病及風(fēng)濕病等疾?。↘aushik et al.,2011)。已有研究發(fā)現(xiàn),姜科植物多糖具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抗氧化等作用(李世杰等,2013)。因此,研究大高良姜多糖的提取工藝及抗氧化活性,對(duì)其藥用開(kāi)發(fā)與利用具有重要意義?!厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前對(duì)大高良姜的研究主要集中于黃酮和色素的提取工藝研究,如黃俊生等(2010)優(yōu)化熱水浸提大高良姜色素的工藝條件;牛付閣(2011)研究熱水提取大高良姜黃酮工藝;彭晶等(2013)利用酶法提取大高良姜黃酮,并對(duì)其工藝進(jìn)行優(yōu)化。近年來(lái),有關(guān)姜科植物的多糖提取研究較少,樊亞鳴等(2007)對(duì)微波—水溶液提取春砂仁多糖的工藝進(jìn)行優(yōu)化,結(jié)果表明,在液固比10∶1、微波功率600 W、提取溫度80 ℃的條件下提取20 min,多糖產(chǎn)率為11.33%;鄭義等(2014)利用熱水浸提高良姜多糖,在最佳工藝條件(液料比43∶1、浸提溫度95 ℃、浸提時(shí)間3 h)下獲得多糖產(chǎn)率11.81%。而有關(guān)大高良姜有效成分的抗氧化活性研究報(bào)道甚少,至今僅有王蓓蓓等(2011)比較研究高良姜與大高良姜總黃酮抗氧化活性,結(jié)果發(fā)現(xiàn)大高良姜中總黃酮的抗氧化活性強(qiáng)于高良姜?!颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】酶解法提取是通過(guò)纖維素酶破壞提取植物細(xì)胞,使內(nèi)部物質(zhì)從細(xì)胞中釋放出來(lái),降低提取難度,具有高效、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn),已廣泛應(yīng)用于植物多糖的提取(汪財(cái)生等,2010;周立等,2014),但目前尚無(wú)利用此法提取大高良姜多糖的研究報(bào)道?!緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】利用Design-Expert 8.0.6軟件,將Plackett-Burman(PB)試驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)相結(jié)合,優(yōu)化酶解法提取大高良姜多糖的工藝,并研究其抗氧化活性,旨在為大高良姜多糖的有效利用提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

大高良姜采自四川省瀘州市龍馬潭區(qū)特興鎮(zhèn)魏園村黃金山生態(tài)園,除去莖葉雜質(zhì),經(jīng)清水沖洗后切片曬干,粉碎過(guò)60目篩備用。纖維素酶(酶活單位≥50 U/mg,最適溫度30~60 ℃,最適pH 4.0~6.5)購(gòu)自江蘇銳陽(yáng)生物科技有限公司,DPPH購(gòu)自美國(guó)Sigma公司,ABTS購(gòu)自碧云天生物技術(shù)有限公司,維生素C(Vc)購(gòu)自東北制藥集團(tuán)有限公司;葡萄糖、硫酸、苯酚、丙酮、乙醚、無(wú)水乙醇均為國(guó)產(chǎn)分析純。主要儀器設(shè)備:RE52CS-1旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)、MCR-3S微波爐(西安予輝儀器有限公司)、SP-1901型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(上海光譜儀器有限公司)、FW80-1粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)、HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋(常州智博瑞儀器制造有限公司)。

1. 2 試驗(yàn)方法

1. 2. 1 大高良姜多糖提取 準(zhǔn)確稱取大高良姜粉→添加一定量的酶→加入50%乙醇溶解→調(diào)節(jié)pH→控制酶解溫度→水浴鍋酶解提取→90 ℃滅酶30 min→抽濾→定容→計(jì)算提取率。

1. 2. 2 多糖提取率測(cè)定 以葡萄糖質(zhì)量濃度為x軸、490 nm處測(cè)定的吸光值為y軸,擬合回歸曲線,得回歸方程:y=156.3x+2.858(R2=0.9992),繪制得標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

多糖提取率(%)=提取得到的多糖質(zhì)量/原料總質(zhì)量×100

1. 2. 3 單因素試驗(yàn) 采用控制變量法,依次改變料液比、酶解時(shí)間、酶解溫度、pH、酶用量5個(gè)因素,結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,以多糖提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行分析。

1. 2. 4 PB試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)上述5個(gè)因素進(jìn)行篩選試驗(yàn),試驗(yàn)因素水平如表1所示,再根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果確定影響顯著的因素進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)。

1. 2. 5 Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素試驗(yàn)和PB篩選試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,對(duì)所確定的因素進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn),確定最佳多糖提取工藝條件,試驗(yàn)因素水平如表2所示。

1. 2. 6 對(duì)比試驗(yàn) 采用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化工藝進(jìn)行酶解法提取試驗(yàn),再結(jié)合傳統(tǒng)熱水浸提法的結(jié)果,比較兩種方法對(duì)大高良姜多糖提取率的優(yōu)劣性。

1. 2. 7 多糖抗氧化活性測(cè)定

1. 2. 7. 1 DPPH自由基清除率測(cè)定 將大高良姜多糖配成不同質(zhì)量濃度的溶液,分別取2.0 mL置于容量瓶中,再分別加入2.0 mL 1 mmol/L DPPH溶液,混勻后于25 ℃避光反應(yīng)30 min,在517 nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)1。同時(shí)取2.0 mL不同質(zhì)量濃度多糖溶液,分別加入2.0 mL 95%乙醇后,測(cè)定吸光值A(chǔ)2。最后取2.0 mL蒸餾水加入2.0 mL 1 mmol/L DPPH溶液測(cè)定吸光值A(chǔ)0,根據(jù)公式計(jì)算DPPH自由基清除率。

DPPH自由基清除率(%)=(1-■)×100

1. 2. 7. 2 ABTS自由基清除率測(cè)定 先配制ABTS工作液,再分別取0.1 mL稀釋后的不同質(zhì)量濃度大高良姜多糖提取液與3.9 mL ABTS工作液混合成樣品液,室溫避光反應(yīng)6 min后測(cè)定樣品液在734 nm處的吸光值A(chǔ);以0.1 mL蒸餾水與3.9 mL ABTS工作液混合進(jìn)行空白試驗(yàn),測(cè)定吸光值A(chǔ)0,根據(jù)公式計(jì)算ABTS自由基清除率。

ABTS自由基清除率(%)=■×100

1. 3 統(tǒng)計(jì)分析

采用SPSS 19.0進(jìn)行單因素方差分析;采用Design-Expert 8.0.6進(jìn)行響應(yīng)面分析。

2 結(jié)果與分析

2. 1 單因素試驗(yàn)結(jié)果

2. 1. 1 料液比對(duì)大高良姜多糖提取率的影響 采用1.2.1的提取方法,固定pH 5.5、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間2.0 h、酶用量3%,考察不同料液比(1∶20、1∶25、1∶30、1∶35和1∶40)對(duì)大高良姜多糖提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖1。開(kāi)始時(shí)隨著料液比的降低,大高良姜多糖提取率逐漸增大,當(dāng)料液比小于1∶25時(shí),多糖提取率反而減少;其中料液比為1∶25時(shí)提取率最高(11.68%),與料液比1∶30和1∶35的提取率無(wú)顯著差異(P>0.05,下同)。因此,選擇料液比1∶20和1∶30進(jìn)行PB試驗(yàn)。

2. 1. 2 酶解時(shí)間對(duì)大高良姜多糖提取率的影響 采用1.2.1的提取方法,固定pH 5.5、酶解溫度50 ℃、酶用量3%、料液比1∶30,考察不同酶解時(shí)間(0.5、1.0、1.5、2.0和2.5 h)對(duì)大高良姜多糖提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖2。多糖提取率隨酶解時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增大,酶解時(shí)間為1.0 h時(shí)達(dá)最大值,且多糖提取率與0.5、2.0、2.5 h的多糖提取率有顯著差異(P<0.05,下同);酶解時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(超過(guò)1.0 h),多糖提取率逐漸下降。最終選擇0.5和1.5 h作為PB試驗(yàn)的酶解時(shí)間。

2. 1. 3 酶解溫度對(duì)大高良姜多糖提取率的影響 采用1.2.1的提取方法,固定pH 5.5、酶解時(shí)間2.0 h、酶用量3%、料液比1∶30,考察不同酶解溫度(35、40、45、50和55 ℃)對(duì)大高良姜多糖提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖3。大高良姜多糖提取率隨著酶解溫度的升高逐漸增加,超過(guò)45 ℃后逐漸下降;酶解溫度在40~55 ℃范圍內(nèi)多糖提取率無(wú)顯著性差異,最終選擇40和50 ℃作為PB試驗(yàn)的酶解溫度。

2. 1. 4 pH對(duì)大高良姜多糖提取率的影響 采用1.2.1的提取方法,固定酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間2.0 h、酶用量3%、料液比1∶30,考察不同pH(4.5、5.0、5.5、6.0和6.5)對(duì)大高良姜多糖提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖4。根據(jù)圖中多糖提取率隨著pH變化的規(guī)律,發(fā)現(xiàn)pH為6.0時(shí)多糖提取率最高,之后多糖提取率減少,pH在5.0~6.5范圍內(nèi)多糖提取率無(wú)顯著性差異,因此選擇pH 5.5和6.5進(jìn)行PB試驗(yàn)優(yōu)化。

2. 1. 5 酶用量對(duì)大高良姜多糖提取率的影響 采用1.2.1的提取方法,固定pH 5.5、酶解溫度50 ℃、酶解時(shí)間2.0 h、料液比1∶30,考察不同酶用量(1%、2%、3%、4%和5%)對(duì)大高良姜多糖提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖5。根據(jù)圖中多糖提取率隨酶用量變化的規(guī)律,發(fā)現(xiàn)在酶用量2%~5%范圍內(nèi),多糖提取率的變化不顯著,但在酶用量2%~3%時(shí)出現(xiàn)小幅高峰值,因此選擇酶用量為1%和3%進(jìn)行PB試驗(yàn)。

2. 2 響應(yīng)面優(yōu)化大高良姜多糖提取工藝

2. 2. 1 PB試驗(yàn)篩選顯著影響大高良姜多糖提取率的因素 綜合單因素試驗(yàn)結(jié)果,運(yùn)用Design-Expert 8.0.6設(shè)計(jì)12次PB試驗(yàn),進(jìn)行料液比(A)、酶解時(shí)間(B)、酶解溫度(C)、pH(D)、酶用量(E)5個(gè)因素對(duì)多糖提取率的顯著性考察,其試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。表3為上述5個(gè)因素對(duì)多糖提取率的回歸方程系數(shù)及顯著性檢驗(yàn)結(jié)果,由表3可知,酶解溫度和酶解時(shí)間對(duì)大高良姜多糖提取率影響極顯著(P<0.01,下同),料液比影響顯著。結(jié)合考慮實(shí)際生產(chǎn)的需求,確定pH為6.0、酶用量為2%,選擇料液比、酶解溫度和酶解時(shí)間為響應(yīng)面試驗(yàn)考察因素。

2. 2. 2 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果 根據(jù)Design-Expert 8.0.6的Box-Behnken響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理,綜合單因素試驗(yàn)和PB試驗(yàn)結(jié)果,確定料液比、酶解時(shí)間、酶解溫度為主要因素,設(shè)計(jì)3因素3水平響應(yīng)面分析試驗(yàn),其方案及結(jié)果如表5所示。采用Design-Expert 8.0.6對(duì)表5數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合分析,得到模型的擬合曲線方程為:Y=13.35-0.21A-0.36B-0.38C+0.70AB+0.47AC+

0.022BC-1.15A2-0.83B2-1.15C2。

對(duì)模型進(jìn)行回歸系數(shù)和方差分析的顯著性檢驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表6。由表6可知,該模型的Prob>F,為0.0001(小于0.01),表明該模型的回歸方程具有顯著性。3個(gè)因素對(duì)大高良姜多糖提取率影響排序?yàn)椋篊(酶解溫度)>B(酶解時(shí)間)>A(料液比),其中,作用顯著的是B和AC,極顯著的是C、AB、A2、B2和C2。

2. 2. 3 響應(yīng)面分析因素之間的交互作用 根據(jù)擬合回歸方程,固定料液比、酶解時(shí)間和酶解溫度中的任意兩個(gè)因素為零水平時(shí),作出兩個(gè)交互項(xiàng)的響應(yīng)面圖,以考察其對(duì)大高良姜多糖提取率的影響,見(jiàn)圖6~圖8。響應(yīng)曲面坡度較平滑,說(shuō)明響應(yīng)值受各變量變化的影響較?。豁憫?yīng)曲面坡度較陡峭,則說(shuō)明響應(yīng)值受變量交互作用較明顯。從圖6~圖8可以看出,料液比與酶解時(shí)間交互作用的坡度最陡峭,說(shuō)明影響最顯著,而酶解溫度與酶解時(shí)間的響應(yīng)面坡度先升高后逐漸趨于平緩,說(shuō)明影響不顯著。這與響應(yīng)面方差分析結(jié)果相一致。

2. 2. 4 最佳提取條件的確定和驗(yàn)證 利用Design-

Expert 8.0.6得到最佳提取工藝為:料液比1∶23.85、酶解時(shí)間0.84 h、酶解溫度43.93 ℃,在此條件下大高良姜多糖提取率的預(yù)測(cè)值為13.4718%。綜合考慮多糖提取率和試驗(yàn)可操作性等因素,修正最優(yōu)工藝條件為:料液比1∶24、pH 6.0、酶解時(shí)間50.5 min、酶解溫度44 ℃,酶用量2%,對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證,得到實(shí)際測(cè)定值為13.53%,相對(duì)誤差0.43%。表明本研究建立的模型推測(cè)得到的最佳工藝參數(shù)對(duì)實(shí)際預(yù)測(cè)較可靠,有一定指導(dǎo)意義。

2. 3 傳統(tǒng)熱水浸提法和酶解法比較結(jié)果

改變1.2.1提取工藝,采用傳統(tǒng)熱水浸提法進(jìn)行試驗(yàn),確定料液比1∶24、浸提時(shí)間3 h、浸提溫度95 ℃,多糖提取率為10.90%。與傳統(tǒng)熱水浸提法相比較,酶解法的提取時(shí)間縮短72.0%,提取率提高24.1%,酶解法提取大高良姜多糖的效果更佳。

2. 4 大高良姜多糖抗氧化活性分析結(jié)果

2. 4. 1 大高良姜多糖對(duì)DPPH自由基的清除效果 大高良姜多糖對(duì)DPPH自由基的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖9,以Vc為參照,DPPH自由基清除能力隨大高良姜多糖質(zhì)量濃度的增大而增強(qiáng),清除率最大值為85.74%,清除能力略低于Vc。大高良姜多糖的半數(shù)有效質(zhì)量濃度(IC50)為2.21 mg/mL。

2. 4. 2 大高良姜多糖對(duì)ABTS自由基的清除效果 大高良姜多糖對(duì)ABTS自由基的清除作用結(jié)果見(jiàn)圖10,多糖質(zhì)量濃度在1.00~5.00 g/mL范圍內(nèi),其對(duì)ABTS自由基的清除率高于Vc,大高良姜多糖的IC50為2.15 g/mL。

3 討論

目前,對(duì)大高良姜同屬姜科類植物的多糖提取多采用傳統(tǒng)工藝,如王曉梅等(2011)采用水提醇沉法提取生姜多糖,平均提取率為7.58%;鄭義等(2014)采用熱水浸提高良姜多糖,得到提取率11.81%。本研究利用纖維素酶水溶液破壞大高良姜的細(xì)胞壁,極大改善細(xì)胞壁的通透性,最大程度地溶出多糖化合物;在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,將PB試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)相結(jié)合進(jìn)行擬合,優(yōu)化得到酶解法提取大高良姜多糖的提取工藝為:料液比1∶24、pH 6.0、酶解時(shí)間50.5 min、酶解溫度44 ℃、酶用量2%,在此條件下多糖提取率為13.53%,明顯高于與其他姜科類植物的多糖提取率,如樊亞鳴等(2007)測(cè)定的春砂仁多糖提取率11.33%,鄭義等(2013)測(cè)定的益智仁多糖提取率7.71%。與傳統(tǒng)熱水浸提法比較,采用酶解法提取大高良姜多糖所需時(shí)間縮短72.0%、能源消耗減少53.7%、提取率提高24.1%,說(shuō)明采用響應(yīng)面試驗(yàn)優(yōu)化的酶解法提取大高良姜多糖更有效。

姜科類植物多糖均具有較強(qiáng)的抗氧化活性,鄭義等(2013)研究益智仁多糖抗氧化活性的結(jié)果表明,益智仁多糖質(zhì)量濃度為2 g/L時(shí),其對(duì)DPPH的清除率達(dá)90.06%;鄭義等(2014)對(duì)高良姜多糖的抗氧化活性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)高良姜多糖質(zhì)量濃度為5 g/L時(shí),其對(duì)DPPH的清除率達(dá)98.36%。本研究對(duì)大高良姜多糖的抗氧化活性進(jìn)行分析,結(jié)果表明,大高良姜多糖對(duì)DPPH和ABTS自由基均有一定的清除能力;隨著大高良姜多糖質(zhì)量濃度的不斷增大,多糖的抗氧化能力也不斷增強(qiáng),其IC50分別為2.21 mg/mL和2.15 g/mL。

目前對(duì)于大高良姜多糖的研究尚處于初級(jí)階段,后續(xù)應(yīng)對(duì)其結(jié)構(gòu)鑒定和藥理性質(zhì)進(jìn)行相關(guān)研究,以及對(duì)比分析大高良姜整株的不同部位多糖含量。本研究?jī)?yōu)化工藝可為后續(xù)研究提供技術(shù)支持。

4 結(jié)論

采用響應(yīng)面試驗(yàn)?zāi)P湍茌^好優(yōu)化酶解法提取大高良姜多糖工藝,優(yōu)化后的工藝具有操作簡(jiǎn)單、省時(shí)高效、無(wú)毒環(huán)保等優(yōu)點(diǎn),提取得到的多糖有較強(qiáng)的抗氧化能力。

參考文獻(xiàn):

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(責(zé)任編輯 羅 麗)

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